江苏省社会发展科技计划(BS2005619)
- 作品数：5 被引量：17H指数：1
- 相关作者：王翎侯建全王小林温端改冯春来更多>>
- 相关机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向survivin的siRNA表达载体的构建及生物活性鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建靶向survivin的siRNA表达载体。方法设计合成靶向survivin的siRNA相应DNA模板单链,将其克隆入空质粒pRNAT-U6.1/Neo,模板链两端分别设计两个不同的酶切位点,退火形成siRNA载体插入片段。用限制性酶切将空载体线性化,T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中,对该重组表达载体进行鉴定,获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6.1/Neo-sur-vivin。脂质体法将pRNAT-U6.1/Neo-survivin导入膀胱癌T24细胞株,实时定量PCR法检测对T24细胞survivin基因表达的抑制情况。结果PCR、酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰T24细胞survivin基因的表达,并具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论成功构建了靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体pR-NAT-U6.1/Neo-survivin,并转染膀胱癌细胞株,为进一步运用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。
- 王小林侯建全何军杨慎敏温端改
- 关键词：SURVIVIN基因小干扰RNA
- 利用RNA干扰阻抑膀胱癌细胞Survivin基因表达和诱导凋亡被引量：14
- 2006年
- 目的探讨RNA干扰下调Survivin基因表达后膀胱癌细胞生物学行为变化及Sur- vivin基因抗凋亡机制。方法设计、合成一对Survivin编码基因序列特异的小分子干扰RNA(siR- NA),用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞,分不同的浓度组(50～200 nmol/L)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测Survivin基因和Caspasc-3基因mRNA表达。结果Survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,并呈剂量和时间依赖性,最大效应浓度为100 nmol/L,此时与对照比较Survivin表达水平下调75．91%,并显著的抑制了细胞生长,抑制率达55．29%,差异有统计学意义(P＜0．05)。同时,Caspase-3 mRNA表达水平明显上升达239．80%,细胞凋亡率亦增加至45．70%,与对照相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论RNA干扰显著下调Survivin基因表达后,能明显促进T24膀胱癌细胞凋亡并抑制其增殖；Survivin基因可能是通过下调Caspase-3表达来抑制凋亡。
- 王小林侯建全温端改何军岑建农谷敏
- 关键词：RNA干扰脱噬作用
- 缺氧对肺腺癌细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达变化情况。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTY法检测缺氧对A549细胞增殖的影响;Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力;分别采用RT-PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF-1α和GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强。正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和、GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:氯化钴诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平,加速肺癌细胞的生长和转移,使之进一步耐受缺氧。
- 冯春来王翎董宁征
- 关键词：缺氧缺氧诱导因子1Α基质金属蛋白酶2A549细胞
- 骨桥蛋白、核因子-κB p65在非小细胞肺癌中的表达
- 2009年
- 目的探讨骨桥蛋白(OPN)和核因子-κBp65(NF-κBp65)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及两者与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化检测80例NSCLC和21例正常肺组织中OPN和NF-κBp65的表达,并分析OPN和NF-κBp65的表达与NSCLC临床病理特征及患者生存时间之间的关系。结果OPN和NF-κBp65在NSCLC中表达阳性率分别为63.75%、61.25%,在正常肺组织中表达阳性率分别为23.81%、9.52%。NSCLC中OPN和NF-κBp65表达显著高于正常组织(P<0.05)。OPN和NF-κBp65的表达率与患者的淋巴结转移、TNM分期有密切关系;OPN表达还与患者组织学类型有关(P<0.05)。OPN和NF-κBp65为负性预后因子;OPN和NF-κBp65之间呈正相关。结论OPN和NF-κBp65在肺癌中高表达,OPN和NF-κBp65阳性表达提示预后不良。
- 路会玲王翎
- 关键词：骨桥蛋白核因子-ΚBP65非小细胞肺癌
- 老年原发性肺癌患者缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1的表达及临床意义被引量：1
- 2009年
- 目的探讨缺氧诱导因子-1（HIF-1α）和葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及老年人原发性肺癌组织中的表达及临床意义。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）法检测氯化钴诱导缺氧F肺腺癌细胞A549的生长活性。分别采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法和免疫印迹（Westernblot）、免疫组化法测定缺氧不同时间下A549细胞及60例老年人原发性肺癌组织和26例老年人良性疾病（非癌组）组织中HIF-1α和GLUT-1的mRNA和蛋白表达，并分析HIF1α、GLUT-1与临床病理特点之间的关系。结果肺腺癌细胞在缺氧下增殖能力较正常时增强。RT—PCR结果显示，缺氧24h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA的表达分别为0．69±0，08、0．65±0．09，缺氧48h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA表达分别为0．99±0．16、0．83±0．11，高于正常对照组（缺氧Oh）的0．47±0．11、0．40±0．08（t值分别为3．81、4．97、6．35、7．89，P〈0．01）；Westernblot结果显示，缺氧24h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为1．57±0．29、1．66±0．28，缺氧48h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为2．31±0．46、2．22±0．34，高于正常对照组（缺氧0h）的0．93±0．07、1．06±0．17（t值分别为3．67、3．21、5．19、5．37，P〈0．01）。肺癌组织中HIF-1α、GLUT—1的mRNA和蛋白阳性表达率明显高于非癌组（Х^2值分别为25．31、31．12、20．26、28．70，P〈0．01）。有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者，中晚期（Ⅲ＋Ⅳ期）肺癌组织中的表达高于早期（Ⅰ＋Ⅱ期），差异有统计学意义（t值分别为2．56、2．19、3．46、2．15，Х^2值分别为5．14、4．15、7．54、5．57，P〈0．05）。HIF-1α与GI，UT-1的mRNA和蛋白表达呈正相关（r=0．527与r=0．408，P〈0．01）。结论氯化钴诱导缺氧可以上调HIF-1a、GLUT-1在肺腺癌细胞中的表达，加速肺癌细胞的生长，使之进一步耐�
- 王翎冯春来董宁征
- 关键词：细胞低氧缺氧诱导因子-1
