江西省自然科学基金(2010GZN0022)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：裘雪梅刘仁荣徐玲陈兴龙朱立鑫更多>>
- 相关机构：江西科技师范学院江西科技师范大学南昌大学更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学医药卫生更多>>
- 基于噬菌体展示技术的赭曲霉毒素A高密度模拟表位的表达研究被引量：2
- 2012年
- 通过噬菌体展示技术展示赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)模拟表位。将带有OTA模拟表位序列的寡核苷酸双链克隆至载体pC89-COTA。利用噬菌体展示技术,通过优化辅助噬菌体感染复数、IPTG加入的时间与剂量等培养条件获得表达有高密度OTA模拟表位的噬菌体。再通过酶联免疫吸附检测(ELISA)方法比较不同的条件下的表达效果,探索最优表达条件。结果表明:成功获得高密度表达OTA模拟表位的噬菌体,辅助噬菌体感染复数与IPTG加入量对模拟表位表达量影响不大,IPTG加入时间对模拟表位表达量有较大影响,优化后模拟表位表达量大大高于优化前。
- 陈兴龙徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：噬菌体展示赭曲霉毒素A
- 黄曲霉毒素B_1抗原模拟表位高效表达
- 2013年
- 目的构建黄曲霉毒素B1(AFB1)模拟表位pⅧ噬菌体展示载体,为建立无毒害免疫学检测方法提供依据。方法构建呈现AFB1抗原模拟表位的噬菌体载体,并引入肠激酶酶切位点,诱导表达,肠激酶处理重组噬菌体颗粒,酶联免疫吸附法鉴定反应原性。结果重组质粒酶切谱、PCR扩增结果及测序结果均与设计一致,在pC89载体中插入了GACGACGACGACAAGCATCCTAGTGATCCGCGTCATGGG序列,肠激酶处理后的重组噬菌体颗粒可与AFB1抗体特异性结合,吸光度(A)值可达2.112。结论成功构建了包含肠激酶酶切位点的AFB1抗原模拟表位pⅧ噬菌体表达载体,重组噬菌体颗粒经初步表达有一定反应原性。
- 徐玲黄凤丹彭思璐刘仁荣裘雪梅陈兴龙
- 关键词：模拟表位肠激酶
- 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
- 2013年
- 拟用pⅧ噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)模拟表位肽,并验证其反应原性。通过将含有ZEN模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过EcoR I和BamH I双酶切的pC89S4噬菌粒连接,构建表达载体pC89-CZEN。pC89-CZEN转化感受态XL1-Blue得到工程菌pC89-ek-zen,然后用KM13超感染、IPTG诱导表达,纯化后得到展示有玉米赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对KM13超感染时菌体浓度OD600、IPTG诱导时菌体浓度OD600、IPTG加入量以及诱导表达温度和时间进行优化,以探索最佳表达条件;通过ELISA测定反应原性,对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与ZEN抗体的结合效果。结果显示,成功构建了表达载体pC89-CZEN,最优表达条件为KM13超感染时菌体浓度OD600为0.4、IPTG诱导时菌体浓度OD600为0.6以及IPTG加入量为终浓度1.0 mmol/L、诱导表达温度为24℃、时间8 h,酶切后结合效果明显高于酶切前。
- 徐富勇徐玲刘仁荣裘雪梅朱立鑫
- 关键词：玉米赤霉烯酮模拟表位肠激酶
