浙江省科技厅资助项目(2013C32018)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：孙仁杰马明章翁晓燕黄莹莹詹仪花更多>>
- 相关机构：浙江农林大学浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 水稻内源木聚糖酶osx基因的克隆及表达分析被引量：2
- 2013年
- 为进一步了解植物内源木聚糖酶基因结构及其表达特性,从水稻中克隆和表达了一种内源木聚糖酶基因。通过序列比对分析确定保守区序列,以PCR扩增得到的保守区序列从众多水稻木聚糖酶预测序列中"钓取"可能的目标基因,并以此基因为模板设计引物,通过RT-PCR扩增得到一条长度为1 443 bp的基因片段osx,测序结果与水稻木聚糖酶基因预测序列NM_001061680一致性高达99%,该序列编码480个氨基酸,经预测不存在信号肽序列。构建表达载体pET28-a(+)-osx,导入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,该表达产物未检测到木聚糖酶活性。受大麦和玉米内源木聚糖酶基因表达的前体为无活性蛋白需要剪切加工的启示,进一步通过在线蛋白同源建模分析,设计引物去掉蛋白N端约120个氨基酸,C端约40个氨基酸,保留"Glyco-hydro-10"结构域,使其成功实现了原核活性表达,表达蛋白约40 kDa,木聚糖酶活性为11.53 IU/mL。
- 黄莹莹马明章孙仁杰詹仪花翁晓燕
- 关键词：水稻木聚糖酶基因同源建模
