国家自然科学基金(30671016)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 相关作者：张辛敖英芳林霖杨民马康涛更多>>
- 相关机构：北京大学第三医院皖南医学院弋矶山医院北京大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核心结合因子过表达定向诱导脂肪组织来源干细胞体内、外成骨被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨脂肪组织来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)和核心结合因子(Core Binding Factor Alpha 1,Cbfa1)的成骨潜能及其应用于基因增强的骨组织工程临床治疗的可能性。方法:利用重组了Cbfa1的腺病毒载体在ADSCs中过表达Cbfa1。采用Realtime RT-PCR定量检测成骨特异性基因和成脂特异性基因的表达变化。同时采用Von Kossa染色观察Cbfa1过表达后21天ADSCs内钙盐的沉积情况。在体内实验中,裸鼠右下肢肌肉内注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞,8周后,采用石蜡切片(HE和甲苯胺蓝染色)检测软骨和骨的生成情况。结果:Cbfa1转染后3天,ADSCs中检测到Cbfa1 RNA表达,及骨钙素、骨桥素、I型胶原表达,同时脂蛋白脂酶表达下降。Vocassa染色证明,转染Cbfa1后,ADSCs细胞基质中的钙盐沉积显著增加。体内实验8周后,注射Cbfa1基因修饰的脂肪来源干细胞的肌肉内有明显的软骨和骨组织形成。结论:Cbfa1过表达可定向诱导ADSCs体外钙盐沉积和体内成骨,可作为基因增强的骨组织工程中有潜力的治疗基因和载体细胞。
- 张辛敖英芳
- 关键词：脂肪组织来源干细胞核心结合因子成骨CBFA1
- 核心结合因子α1过表达促进脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化被引量：3
- 2008年
- 目的检测核心结合因子α1（Cbfα1）的特异性成骨作用以及脂肪组织来源干细胞的成骨分化潜能。方法采用Cbfα1重组的腺病毒载体感染脂肪来源干细胞，通过间接免疫荧光的方法检测脂肪来源干细胞中Cbfα1的表达。Cbfα1转染脂肪组织来源干细胞后1、3、7d利用RT-PCR检测成骨特异性基因和成脂特异性基因的表达变化。同时通过检测Cbfα1转染后7、10d脂肪来源干细胞碱性磷酸酶活性的变化，观察Cbfα1过表达后诱导脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化。结果转染后脂肪组织来源干细胞细胞数目增长一倍。在特定诱导条件下，可向成脂细胞、成骨细胞分化。Cbfα1重组的腺病毒载体对脂肪组织来源干细胞的转染效率为82．4％。转染后第1、3、7天脂肪组织来源干细胞中骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原的表达增强；脂蛋白脂酶的表达逐渐下降。转染Cbfα1后，脂肪组织来源干细胞中碱性磷酸酶活性显著增加。结论核心结合因子过表达促进脂肪组织来源干细胞向成骨细胞分化、抑制成脂分化。
- 张辛杨民林霖敖英芳
- 关键词：干细胞脂肪组织核心结合因子Α1成骨分化
- 核心结合因子(Cbfa1／Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达被引量：3
- 2008年
- 目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化。将Cbfa1/Runx2cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2。经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测。通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达。结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍。在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化。酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功。Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%。转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达。结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白。
- 张辛杨民林霖陈苹马康涛敖英芳周春燕
- 关键词：核心结合因子脂肪组织来源干细胞腺病毒载体
