重庆市自然科学基金(cstc2012jjB10022) 作品数:4 被引量:19 H指数:2 相关作者: 杨刚毅 李伶 罗小河 任艳 贾彦军 更多>> 相关机构: 重庆医科大学 重庆医科大学附属第二医院 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 国家教育部博士点基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
JAZF1过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响 被引量:4 2015年 目的:在课题组前期细胞研究结果的基础上构建锌指并列基因1(juxtaposed with another zinc finger gene 1,JAZF1)转基因动物模型并探讨JAZF1基因过表达对糖异生及胰岛素信号通路的影响。方法:将构建和制备的JAZF1基因片段,经显微注射到受精卵中,将受精卵移植入受体小鼠,产出后经鉴定和繁育得到较纯的JAZF1转基因小鼠。将8周龄转基因小鼠(Tg-JAZF1)和野生(wild type,WT)小鼠随机分为4组喂养:即普食(standard diet,SD)-WT组(n=6)、SD-Tg组(n=6)、高脂(high fat diet,HFD)-WT组(n=6)、HFD-Tg组(n=6)。各组小鼠喂养12周之后测定肝脏组织糖异生的关键基因葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6pase)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)的m RNA和蛋白表达的变化。Western blot测定肝脏、肌肉、脂肪组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平变化。结果:SD-Tg小鼠的m RNA和蛋白在肝脏、肌肉、脂肪组织中表达较SD-WT小鼠均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与WT小鼠比较,Tg-JAZF1小鼠肝脏PEPCK、G-6-Pase在SD喂养和HFD喂养条件下m RNA水平和蛋白表达水平均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);肝脏组织胰岛素信号通路蛋白磷酸化水平均增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:JAZF1转基因动物模型构建成功,JAZF1过表达能抑制肝脏糖异生关键基因表达,增加肝脏组织的胰岛素敏感性。 王汉生 李伶 杨刚毅 罗小河 李敏燕 代继桓 任艳关键词:转基因鼠 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 葡萄糖-6-磷酸酶 胰岛素信号 KLF14基因过表达对改善Hepa1-6小鼠肝癌细胞胰岛素抵抗的作用 2015年 目的探讨KLF14基因过表达对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胰岛素抵抗的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-QPCR)检测KLF14基因m RNA在健康C57BL/6J小鼠各组织的表达分布情况;构建小鼠KLF14基因重组真核表达质粒p IRES2-EGFP-KLF14并转染Hepa1-6细胞,RT-PCR法检测KLF14基因m RNA的表达;Western印迹检测KLF14及p-AKT蛋白水平的表达。结果成功构建p IRES2-EGFP-KLF14质粒;转染肝癌细胞48 h后,KLF14 m RNA和蛋白水平明显高于对照组和空载组(P<0.01);转录水平上KLF14基因在小鼠体内普遍表达,其m RNA相对表达量由高到低依次为心脏、骨骼肌、肝脏、脂肪、小肠、肾脏、脑、肺、胃、脾、附睾;非转染组给予血清干预后,正常人血清处理组和糖尿病病人血清处理组无明显差异;而转染组给予血清干预后,糖尿病病人血清处理组p-AKT表达量较正常人血清处理组明显增加;在胰岛素刺激情况下,无论转染组或非转染组,给予PI3K抑制剂LY294002后,p-AKT表达受抑。结论 KLF14在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中发挥一定作用;KLF14基因过表达可促进AKT的活化,并且其增加胰岛素敏感性的作用在糖尿病状态下较正常人更为明显。 代继桓 李伶 杨刚毅 任艳 贾彦军 罗小河 冉文侠 曾梦关键词:基因表达 胰岛素抵抗 JAZF1基因对3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK信号途径的影响 被引量:2 2014年 目的探讨JAZFl(juxtaposed with another zinc finger gene 1)基因对333一L1脂肪细胞蛋白激酶B(Akt)和AMP活化的蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法构建pGenesil—JAZFlshRNA重组质粒,转染3T3.L1脂肪细胞后分别用胰岛素或利拉鲁肽处理细胞。2.脱氧-^3H—D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取,Western印迹法检测各组细胞Akt和AMPK的磷酸化水平。结果成功构建的pGenesil-JAZFlshRNA重组载体转染333-L1脂肪细胞后下调JAZF1表达,使基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取降低33.6%和38.8%(均P〈0.05)。胰岛素或利拉鲁肽增加333-L1脂肪细胞Akt和AMPK磷酸化水平(均P〈0.05),JAZF1表达下调降低基础和2种激素刺激的Akt和AMPK活性(均P〈0.05)。结论JAZF1基因可能通过Akt和AMPK信号通路改善糖代谢。 罗小河 李伶 杨刚毅 杜林 贾彦军 冉文侠 张亚丽 罗妤关键词:蛋白激酶B 利拉鲁肽 不同糖耐量人群血浆分泌型卷曲相关蛋白5水平与胰岛素抵抗的相关性研究 被引量:13 2013年 目的探讨不同糖耐量人群血浆分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)水平变化及与APN、IR的关系。方法采用ELISA测定不同糖耐量人群血浆SFRP5和APN水平,分析血浆SFRP5与APN及相关代谢指标的关系。结果 T2DM、IGT组血浆SFRP5水平低于正常对照(NC)组[(42.99±20.89)vs(49.21±21.52)vs(78.48±23.72)μg/L,P<0.01]。肥胖者血浆SFRP5水平低于非肥胖者[(42.05±19.93)vs(67.72±26.48)μg/L,P<0.01]。相关性分析发现,血浆SFRP5水平与BMI、WHR、体内脂肪百分比(Fat%)、SBP、DBP、FPG、FIns、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、HbA1c、TG、FFA呈负相关(P均<0.01),与APN、LDL-C呈正相关(P均<0.01)。结论血清SFRP5水平在新诊断T2DM患者和肥胖人群中明显降低,可能与IR有关。 尹经霞 杨刚毅 张利莉 李伶 李生兵 廖涌关键词:胰岛素抵抗 肥胖 糖尿病