国家自然科学基金(81101216)
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 相关作者：李岱容杜永洪杨春张春燕穆柳青更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌ClpP1重组蛋白的特性探讨及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的用纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)ClpP1重组蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价,间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性,以初步评价其应用价值。方法通过SDS-PAGE确定ClpP1重组蛋白的主要表达形式,利用纯化包涵体方式对重组蛋白进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰白兔制备ClpP1多克隆抗体并检测其效价;再分别以纯化蛋白为抗原,制备抗体为一抗,间接ELISA法检测临床诊断结核病患者血清中抗M.tb抗体和M.tb抗原。结果 SDSPAGE显示ClpP1重组蛋白主要以包涵体表达形式存在,将纯化蛋白免疫新西兰白兔4次,取血测抗体效价为1∶64 000;Western blot结果显示制备抗体可较好的与ClpP1蛋白特异性结合;间接ELISA法结果表明,以重组蛋白为抗原测患者血清中抗M.tb抗体和以制备抗体为一抗测血清中的M.tb抗原的2实验组分别与对照组相比均具有显著性差异。结论制备了具有免疫原性的M.tb ClpP1重组蛋白及效价较高的多克隆抗体,并得出ClpP1多克隆抗体具有较好的免疫反应性,为进一步研究ClpP1重组蛋白的特性及其应用奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青樊宇何永林
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- 结核分枝杆菌多聚磷酸盐激酶2核酸适配体的抗结核效果评价被引量：1
- 2018年
- 目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果。方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化树。通过酶联寡核苷酸分析(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)测定PPK2核酸适配体与MTB标准株H_(37)Rv、卡介苗(BCG)、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的结合亲和力。将PPK2核酸适配体加入血清中孵育24 h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在血清中的生物稳定性。采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H_(37)Rv的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。将H_(37)Rv与1μmol/L的PPK2核酸适配体在罗氏培养基上培养10 d,观察菌落生长情况。运用酶标仪测定与不同浓度的PPK2核酸适配体共培养10 d后H_(37)Rv菌液的D(600 nm)值,观察PPK2核酸适配体对H_(37)Rv生长的影响。结果·生物信息学方法构建的PPK2进化树显示,H_(37)Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近。ELONA测定结果显示PPK2核酸适配体能与H_(37)Rv选择性结合。琼脂糖凝胶电泳分析显示PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8 h。PPK2核酸适配体对H_(37)Rv的MIC为50 nmol/L。罗氏培养基菌落生长结果显示PPK2适配体对H_(37)Rv生长具有抑制作用。生长抑制试验表明随着PPK2核酸适配体浓度增加,H_(37)Rv的D(600 nm)呈现下降趋势,说明PPK2核酸适配体对H_(37)Rv生长存在抑制作用。结论·PPK2核酸适配体对体外H_(37)Rv表现出良好的抑菌活性。
- 杨扬李岱容黎友伦陈雨晗万秋刘静姝
- 关键词：核酸适配体结核分枝杆菌抑菌活性
- 结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1基因的原核表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATP-dependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青杨静冯鑫
- 关键词：结核分枝杆菌原核细胞
- 结核分枝杆菌ClpC2基因序列分析及功能预测被引量：2
- 2014年
- 目的对结核分枝杆菌的基因clpC2(Rv2667)的同源基因进行序列分析和相似性比较,并对其编码蛋白进行理化性质及功能的预测,为ClpC2蛋白的结构与功能研究提供基础技术资料。方法根据GeneBank中分枝杆菌clpC2同源基因的核苷酸序列,进行多重序列比对和进化树构建;应用ExPA Sy在线序列分析工具,对结核分枝杆菌ClpC2蛋白质理化性质及保守结构域进行预测;应用Gene ontology(GO)在线软件对ClpC2蛋白酶的功能进行分析。结果 clpC2系统进化树分析,与16 s rRNA基因相比,进化距离明显变大,而在结核分枝杆菌复合群中高度保守。ClpC2蛋白为亲水性非跨膜蛋白,在细胞质表达,具有水解和催化功能,是一个依赖于ATP的Clp亚单位。结论 clpC2基因在结核分枝杆菌复合群中高度保守,其编码的蛋白ClpC2是一个依赖于ATP的水解蛋白酶。
- 李岱容穆柳青张春燕杨春
- 关键词：结核分枝杆菌
