贵州省优秀科技教育人才省长资金项目([2010]50)
- 作品数：12 被引量：12H指数：1
- 相关作者：何光志王文佳王平田维毅王乾宇更多>>
- 相关机构：贵阳中医学院遵义医学院附属医院贵州省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目博士科研启动基金贵州省卫生厅科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建抗蛔虫人源单链抗体库,从中筛选建抗蛔虫人源特异性单链抗体.方法:分离10个患蛔虫病人的淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.结果:初级库库容量为1.8×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.6×106的次级抗体库.结论:本研究成功构建抗蛔虫人源单链抗体库,拟在为蛔虫病的预防、诊断、治疗奠定基础.
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高
- 关键词：蛔虫单链抗体
- 抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高蔡琨安传伟
- 蛔虫抗原基因ALAg克隆及序列分析
- 2011年
- 为了确定蛔虫基因工程疫苗的候选基因,试验以蛔虫幼虫的RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出ALAg基因,扩增产物克隆到pMD18-T载体,筛选阳性克隆测序并进行Blast分析。结果表明:该基因与GenBank公布的猪蛔虫As37抗原基因(AB078971)的同源性为95%,与西式贝蛔虫Ag3抗原基因(EU927450)的同源性为92%。说明ALAg基因是线虫特有的抗原基因。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦曹峰黄高蔡琨韩洁王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：蛔虫克隆及序列分析
- 基因工程技术在医学中的应用被引量：10
- 2013年
- 目的:为了了解基因工程技术在医学中的应用及其利弊。方法:通过查阅相关文献,了解基因工程技术在重组药物、疫苗、诊断和治疗等方面的应用,并分析其利弊。结果:基因工程技术的快速发展使其在医学中得到了广泛的应用,但同时也存在着不利的一面。结论:发展基因工程技术的造福功能,抑制其危害功能。
- 郭海涛何光志
- 关键词：基因工程基因工程疫苗基因诊断基因治疗
- 抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。
- 何光志王文佳田维毅王平奚锦俞琦黄高蔡琨王乾宇
- 关键词：猪蛔虫单链抗体库抗原
- 间接ELISA检测蛔虫抗体方法的建立
- 2011年
- 目的寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶8 000。对100份人血清样本采用本方法进行检测,其阳性检出率为10.0%;血清样本对应粪便样本进行现场粪检虫卵法确定阳性率为2.0%。结论建立了稳定而特异的抗蛔虫体IgG的间接ELISA检测方法,可用于蛔虫感染的临床监测。
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦曹峰黄高蔡琨韩洁王乾宇安传伟刘安胜
- 关键词：蛔虫间接ELISA
- 抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选
- 2011年
- 用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。
- 何光志田维毅高英王平王文佳王乾宇奚锦俞琦黄高安传伟
- 关键词：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库单链抗体库
- 《病原生物学及免疫学》实验教学改革的探讨被引量：1
- 2013年
- 目的:为了提高本科生在《病原生物学及免疫学》课程的学习兴趣和提高科研能力,对其实验课程教学改革进行改革探讨。方法:提高学生学习《病原生物学及免疫学》课程的兴趣和创新思维,从深化实验课程教学改革,编写符合实际情况的实验教程,制定的实验室管理规章制度,坚持实验室开放,采取多媒体教学,改革实验考核模式,提高老师实验室工作水平,鼓励学生申报本学科的课题和培养科研思维等几方面对《病原生物学及免疫学》实验教学进行大胆的改革尝试。结果:通过《病原生物学及免疫学》实验教学进行大胆改革尝试,从而提高了学生的学习积极性和主动性,实现了教学与学习双方的良好互动。结论:《病原生物学及免疫学》实验课教学改革有利于培养大学生创新能力和综合素质。
- 何光志田维毅王平梁建东王文佳韩洁
- 关键词：实验教学改革
- 蛔虫抗原基因ALAg表达载体的构建及其重组蛋白诱导小鼠的免疫保护研究被引量：1
- 2012年
- 目的确定蛔虫基因工程疫苗候选基因。方法连接经BamHI和EcoRI酶切的pMD18-T-ALAg和pET-28a(+)质粒的纯化回收产物,将连接产物pET-28a(+)-ALAg表达载体转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达,并纯化重组蛋白(rALAg)。30只小鼠分成免疫组、佐剂组和对照组,每组10只,各组分别接种重组蛋白与弗氏完全佐剂(FCA)混合物、FCA以及磷酸盐缓冲液(PBS)后,采用蛔虫感染性虫卵进行攻击(3600个/只),观察各组小鼠体内虫体数,并采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗体IgG。结果 rALAg能被兔抗蛔虫阳性血清所识别。免疫组小鼠的肝脏和肺脏中的蛔虫幼虫数量(25.30±4.55)比对照组(57.60±5.76)减少了69.26%,与对照组和佐剂组比较差异有统计学意义(P<0.01);免疫组IgG抗体水平检测血清吸光度值A45(00.858±0.003)与对照组(0.149±0.004)、佐剂组比较(0.134±0.004)差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ALAg基因可作为蛔虫基因工程疫苗的候选基因。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高蔡琨刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：蛔虫重组蛋白免疫保护
- 抗弓形虫噬菌体单链抗体库的构建及筛选
- 2011年
- 采用弓形虫可溶性抗原攻击的小鼠,取小鼠脾脏从中提取细胞总RNA,通过RT-PCR扩增鼠源抗体VH和VL基因,并采用重叠PCR(SOE-PCR)方法构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载体pCANTAB5E中,转化于感受态大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库.从20个噬菌体克隆中筛选到15个具有弓形虫可溶性抗原结合活性的阳性克隆.研究提示成功地构建出了一个有效库容量为2.2×106的鼠抗弓形虫噬菌体单链抗体库.
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦黄高王乾宇
- 关键词：弓形虫
