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Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1: 2011年; 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。; 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光; 关键词：酵母双杂交衰老共定位

A型核纤层蛋白的研究进展被引量：1: 2009年; A型核纤层蛋白由LMNA基因编码,为核纤层的主要成分,呈动态网状结构,位于核膜下层,起重要的机械支持作用,直接或间接与染色质相互作用,在维持染色质结构、转录、DNA复制和细胞凋亡等方面发挥重要作用。LMNA基因及其编码蛋白lamin A/C异常能引起一组人类遗传病,称为核纤层蛋白病。为深入了解A型核纤层蛋白的正常生理功能及其在相关核纤层蛋白病中的作用,本文就A型核纤层蛋白的结构分类、修饰组装、动力学、相互作用蛋白及相关核纤层蛋白病等方面进行综述。; 高春海刘新光周中军; 关键词：动力学相互作用蛋白

重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响: 2013年; 目的构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响。方法提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化。结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功;在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。结论成功构建了pCMV-HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。; 蒋智文郑慧玲陈维春刘新光; 关键词：HELA细胞免疫印迹法细胞周期

重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达被引量：2: 2012年; 目的构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础。方法从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性。结果扩增获得的MT-2A基因片段长186bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A。; 刘振杰赵树勇周静骆艳婷郑慧玲陈维春熊兴东徐宁刘新光; 关键词：基因表达大肠埃希菌

去乙酰化酶Sirtuin与衰老的研究进展被引量：4: 2010年; Sirtuin蛋白是一组具有NAD+依赖性的组蛋白去乙酰基转移酶,该家族成员具有高度保守的催化结构域,可以通过对多种底物进行去乙酰化作用,从而在机体内参与一系列的生物学活动,包括维持细胞抗胁迫能力和基因组稳定性以及参与能量代谢等.Sir2参与了酵母的交配型基因、端粒和rDNA重复序列的沉默以及细胞寿命等生理功能.在哺乳动物中,SIRT1是该家族中目前研究最为广泛且较为透彻的成员,而SIRT6的功能研究成为近年来继SIRT1后的又一新热点.综述了sirtuin蛋白的结构及其与衰老关系的研究进展.; 彭琪陈维春刘新光; 关键词：SIRTUIN 衰老 NAD 去乙酰化酶

衰老相关蛋白prelamin A与MT-2A的相互作用: 2012年; 目的分析衰老相关蛋白prelamin A是否与MT-2A相互作用,以及MT-2A与衰老的关系。方法采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白,酵母一对一回复性杂交和荧光共定位验证MT-2A与prelamin A是否相互作用。RT-PCR分析MT-2A在正常和早老细胞中的表达。结果通过酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选到prelamin A的候选相互作用蛋白MT-2A,一对一回复性验证也证明两者能在酵母细胞中相互作用。构建含绿色荧光蛋白的MT-2A融合表达载体转染HEK-293细胞,激光共聚焦显微观察发现MT-2A能与带红色荧光蛋白的prelamin A蛋白在核膜共定位。研究还发现MT-2A的表达在早老细胞中显著下调(P<0.01)。结论 MT-2A作为一个新的prelamin A结合蛋白,可能在细胞早老过程中具有重要的作用。; 熊兴东刘振杰王君文周中军刘新光; 关键词：相互作用酵母双杂交衰老

环指蛋白RING1与A型核纤层蛋白的细胞内相互作用被引量：1: 2011年; 环指蛋白RING1能结合DNA并抑制基因的转录.采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选出了与A型核纤层蛋白(lamin A)结合的RING1蛋白,回复杂交酵母能在缺陷培养基上生长.RING1与绿色荧光蛋白融合载体转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察发现RING1能与带红色荧光蛋白的lamin A蛋白在细胞核周围共定位.免疫共沉淀结果证明RING1与lamin A能够相互作用.结果证明了一个新的lamin A结合蛋白,为揭示lamin A影响基因表达乃至细胞衰老提供了依据.; 陈维春宋杰刘振杰蒋智文袁源郑慧玲刘新光; 关键词：相互作用酵母双杂交

MBD4/MED1的结构与功能: 2011年; 含甲基化CpG结合域蛋白质4(methyl-CpG-binding domain protein 4,MBD4)是MBD核蛋白家族中的一员,它包含一个能特异结合甲基化CpG的MBD结构域和一个具有糖苷酶活性的DNA糖苷酶结构域。该蛋白质能特异地结合甲基化CpG岛,并且在DNA错配修复、抑制转录和调节凋亡等过程中发挥重要功能,并与微卫星不稳定性密切相关。MBD4是一个重要的DNA损伤修复蛋白,多方面的报道表明其许多功能都牵涉到细胞衰老。本文就其结构与功能的研究进展作一综述。; 熊卿圆熊兴东刘新光周中军; 关键词：甲基化错配修复凋亡衰老

蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白NADH脱氢酶4的筛选被引量：1: 2009年; 目的研究新的男性不育候选基因蛋白激酶CK2α'在精子发生中的作用机制。方法以人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白,用酵母双杂交实验从构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库中筛选CK2α'亚基的相互作用蛋白。结果核酸序列分析及同源性检索表明,其中一种与NADH脱氢酶4(NADH dehydrogenase 4)有99.0%同源性。结论NADH脱氢酶是线粒体内参与三羧酸循环的重要酶,也可调节细胞凋亡,深入研究CK2α'与NADH脱氢酶4之间的关系,对了解CK2在精子发生过程中的作用有重要意义。; 陈碧刘新光郑慧玲梁景耀梁念慈; 关键词：酵母双杂交系统睾丸

组蛋白修饰调节机制的研究进展被引量：31: 2009年; 表观遗传学涉及到DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑和非编码RNA调控等内容,其中组蛋白修饰包括组蛋白的乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化及ADP核糖基化等,这些多样化的修饰以及它们时间和空间上的组合与生物学功能的关系又可作为一种重要的表观标志或语言,因而被称为"组蛋白密码".相同组蛋白残基的磷酸化与去磷酸化、乙酰化与去乙酰化、甲基化与去甲基化等,以及不同组蛋白残基的磷酸化与乙酰化、泛素化与甲基化、磷酸化与甲基化等组蛋白修饰之间既相互协同又互相拮抗,形成了一个复杂的调节网络.对组蛋白修饰内在调节机制的研究将丰富"组蛋白密码"的内涵.; 蒋智文刘新光周中军; 关键词：组蛋白修饰组蛋白密码表观遗传学

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广东省高等学校自然科学研究重点项目(06Z015)

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