广东省高等学校自然科学研究重点项目(06Z007) 作品数:4 被引量:6 H指数:2 相关作者: 高天明 朱心红 李树基 龚芝 行艳丽 更多>> 相关机构: 南方医科大学 山西医科大学 更多>> 发文基金: 广东省高等学校自然科学研究重点项目 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
大鼠海马组织线粒体的蛋白质组学分析方法的建立 2008年 为了建立蛋白质组学技术平台用于分离分析大鼠海马组织线粒体的蛋白质组成,选用成年雄性Wistar大鼠使用差速离心法分离提纯大鼠海马组织线粒体,经透射电子显微镜观察分析、免疫印迹检测细胞器标志物蛋白含量后确定线粒体提纯物的质量;将线粒体制备成蛋白样品,经双向电泳分离、染色、扫描获得二维蛋白斑点图后,切取含蛋白斑点的胶块处理后进行基质辅助的飞行时间生物质谱分析,所得数据经检索匹配识别出蛋白信息。获得的大鼠海马组织线粒体提纯物在透射电子显微镜下呈现为大量形态完整、典型的线粒体,夹杂少量其它成分和线粒体碎片;免疫印迹结果显示线粒体提纯物蛋白中含有大量稳定表达的线粒体标志蛋白COX-IV;线粒体提纯物中没有检测到细胞核标志蛋白histone-1。双向电泳分离得到的二维蛋白斑点图谱匹配率为77.54%±5.51%,并成功鉴定识别出胶中的线粒体蛋白丙酮酸脱氢酶alpha亚基。上述结果表明已经成功建立了缺血敏感脑区海马组织的线粒体蛋白质组学分析方法,所得线粒体纯度高、蛋白样品重复性高、电泳分离效果好、与生物质谱鉴定技术匹配良好,为开展脑缺血的线粒体蛋白质组学研究打下了基础。 陈亮 严华成 王璞 李树基 朱心红 高天明关键词:蛋白质组学 缺血性脑卒中 线粒体 海马 BNIP3干扰质粒的构建及鉴定 被引量:1 2010年 目的构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响。方法利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM_053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序。将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测对目的基因的干扰情况。结果构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达。结论成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础。 陈明 张兴梅 李勃兴 孙红宇 李晓文 高天明关键词:BNIP3 RNA干扰 HEK293 氧化还原对成年大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道的调控作用 被引量:2 2011年 采用膜片钳内面向外式记录技术,研究急性分离成年大鼠海马CAl区锥体神经元外向整流氯离子通道的氧化还原调控。发现细胞内侧给予氧化剂DTNB(5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid),可显著减弱氯通道的活动,IC50值为(28.05±2.42)μmol/L;还原剂DTT(dithiothreitol)对氯通道没有明显影响,但可逆转DTNB引起的抑制效应。说明DTNB不改变通道电导,其引起的通道活动减弱是由氯通道关闭时间延长而开放时间缩短所致。研究还发现,另一对氧化型和还原型谷胱甘肽具有与DTNB和DTT同样的效应。本研究结果显示,成年大鼠海马CA1区锥体神经元外向整流氯通道可以被细胞内氧化还原剂所调控。 李建国 乔健天 高天明关键词:海马 膜片钳 BK8644对河豚毒素引起的大鼠海马锥体神经元AMPA受体介导的微小兴奋性突触后电流频率和幅度的影响 被引量:3 2008年 目的观察L-型钙通道(LTC)开通剂BK8644对河豚毒素(TTX)引起的大鼠海马锥体神经元α-氨基-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸(AMPA)受体介导的微小兴奋性突触后电流(mEPSCAMPA)的影响,探讨LTC是否作为神经环路兴奋性的感受器在调节突触稳态中发挥作用。方法建立培养海马神经元的稳态可塑性离体模型,并采用膜片钳全细胞模式记录突触内自发的mEPSC。结果TTX组mEPSCAMPA的频率显著高于对照组(P<0.05),而mEPSCAMPA电流幅度无显著差异(P>0.05);BK8644组和TTX+BK8644组与对照组比较,mEPSCAMPA的频率和幅度均无显著差异(P>0.05);TTX+BK8644组与TTX组比较,mEPSCAMPA频率降低(P<0.05),电流幅度无显著差异(P>0.05)。结论BK8644可对抗TTX引起的mEPSCAMPA频率升高,提示L-型钙通道可能参与稳态突触可塑性的调节。 揭艳玲 李树基 行艳丽 龚芝 朱心红 高天明关键词:L-型钙通道 海马神经元