上海市科学技术发展基金(024119037)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：赵永波沈原赵圣杰刘功禄吴云成更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院上海交通大学附属第一人民医院上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
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- 人α-突触核蛋白基因慢病毒稳定转染PC12细胞系的建立及其凋亡检测被引量：2
- 2011年
- 目的构建及鉴定人野生型和突变型α-突触核蛋白（SNCA和SNCAmu）基因慢病毒表达载体，并观察在体外大鼠嗜铬细胞瘤细胞中的表达。方法在引物合成后采用PCR技术扩增目的基因，并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒[pGC—FU，含绿色荧光蛋白（GFP）基因]中，构建SNCA基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCA—GFP）和SNCAmu基因慢病毒载体表达质粒（pGC—FU—SNCAmu—GFP），通过酶切、测序验证后，将pGC—FU—SNCA—GFP、pGC—FU—SNCAmu—GFP质粒和包装质粒pHelper1．0、pHelper2．0共同转染大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PCI2细胞），获得稳定转染。结果通过检测标签蛋白GFP和目的蛋白，进一步验证pGC—FU—SNCA—GFP和pGC—FU—SNCAmu—GFP在靶细胞中的表达。通过噻唑蓝比色法检测稳定转染后细胞凋亡水平，稳定表达SNCA组（OE组）、SNCAmu组（OEm组）、不加慢病毒质粒的空白对照组（CON组）和加pGC—FU—GFP空载体对照组（NC组）共4组细胞，病毒转染后不同时间（1、2、3、4、5d）细胞增殖变缓（F=4．534、196．285、411．829、1282．049、3135．559，均P〈0．05）。碘化丙锭单染法检测细胞周期，CON组、NC组、OE组和OEm组G1期、G2期和M期细胞百分比差异有统计学意义（F=885．79、45．03、207．11，均P〈0．05），其中G1期细胞百分比（％）较高（CON组：59．10±0．35、NC组：68．24±0．60、OE组：71．73±0．11、OEm组：74．66±0．35）。结论人SNCA和SNCAmu基因转染到PC12细胞中，成功建立稳定表达的细胞系，并且对细胞凋亡水平和细胞周期有一定程度的改变。
- 沈原赵永波刘功禄赵圣杰
- 关键词：Α突触核蛋白慢病毒属转染PC12细胞
- α-突触核蛋白的表达与氧化应激水平的相互影响被引量：5
- 2011年
- 目的探讨氧化应激与在稳定转染α-突触核蛋白(-αsynuclein)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)中α-突触核蛋白表达的相互影响。方法测定未转染、转染空质粒、已稳定转染野生型(WT)及突变型(A53T)α-突触核蛋白的PC12细胞的活性氧(ROS)水平,并以实时定量PCR法和免疫印迹(Western blot)法检测分析经0、50、100和250 nmol/L H2O2处理的WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达。结果 (1)α-突触核蛋白转染PC12细胞后,细胞内ROS水平增加,按未转染的PC12细胞、转染空质粒的PC12细胞、WT型PC12细胞、A53T型PC12细胞顺序ROS水平依次增加(P<0.05)。(2)经不同浓度H2O2处理后,WT型和A53T型PC12细胞α-突触核蛋白mRNA表达水平均无明显改变,WT型及A53T型PC12细胞不同浓度组组间差异均无统计学意义(均P>0.05);在Western blot检测中,50、100和250 nmol/L H2O2组WT型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组减少,且不同浓度组组间差异均有统计学意义(P<0.05);50、100和250nmol/L H2O2组A53T型PC12细胞α-突触核蛋白表达较0 nmol/L H2O2组增加,且不同浓度组两两比较差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论α-突触核蛋白可引起PC12细胞氧化应激损伤,且不同氧化应激水平对WT型和A53T型PC12细胞中的α-突触核蛋白表达有不同程度的影响。
- 沈原赵永波刘功禄赵圣杰
- 关键词：Α-突触核蛋白活性氧氧化应激PC12细胞
- NA干扰及其在神经变性性疾病研究中的应用被引量：4
- 2004年
- RNA干扰 (RNAi)是指生物体内利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS)的现象 ,它可以通过抑制蛋白表达模拟基因敲除技术。RNAi主要通过dsRNA被核酸酶Dicer切割成 2 1～ 2 5nt的小干扰RNA(siRNA) ,由siRNA介导识别并靶向切割同源mRNA分子而实现。随着研究的不断深入 ,RNAi的作用机制将逐步被阐明 ,其技术也将日趋完善和成熟 ,并将得到广泛的应用。本文就RNAi技术的研究进展及其在阿尔茨海默病。
- 吴云成赵永波
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA神经变性性疾病阿尔茨海默病帕金森病
- 双侧丘脑底核电刺激治疗帕金森病临床研究
- 2005年
- 王乔树孙伯民赵永波王晓平
- 关键词：帕金森病
- SNCA基因过表达慢病毒质粒构建及稳定转染293T细胞系被引量：2
- 2011年
- 目的构建SNCA基因过表达慢病毒质粒,转染293T细胞,建立稳定转染细胞系。方法应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,并对阳性克隆进行基因测序鉴定。pGC-FU-SNCA-GFP重组质粒包装293T细胞,转染24小时后,用荧光显微镜观察标签GFP绿色荧光蛋白的表达,并用West blotting法测定目的蛋白的表达。结果成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP慢病毒过表达质粒,获得了稳定转染的293T细胞株。结论人SNCA基因过表达慢病毒载体成功,构建和稳定转染293T细胞系的建立,为进一步体外研究α-突触核蛋白的功能奠定了基础。
- 沈原赵永波
- 关键词：Α-突触核蛋白转染BLOTTING
- 帕金森病的干细胞移植及其基因治疗研究进展被引量：1
- 2004年
- 随着神经干细胞研究的发展以及分子生物学技术的进步 ,神经干细胞移植及基因治疗已成为帕金森病治疗的主要研究方向。本文回顾了帕金森病的治疗现状、移植神经干细胞的来源、相关的修复机制及神经干细胞联合基因治疗帕金森病的进展作一综述。
- 吴云成赵永波
- 关键词：帕金森病干细胞移植基因治疗胶质细胞源性神经营养因子酪氨酸羟化酶
