国家自然科学基金(30672292)
- 作品数：10 被引量：32H指数：4
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- 高浓度葡萄糖体外对人晶状体上皮细胞整合素连接激酶表达的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:观察体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04在高浓度葡萄糖条件下细胞的增殖活性及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达变化。方法:用人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液,使糖浓度分别为5.5mmol/L(正常对照组),15.5mmol/L,30.5mmol/L和50.5mmol/L,并设立5.5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇组(甘露醇对照组)。细胞经过处理0,6,12,24,48,72h后,用MTT法检测晶状体上皮细胞的增殖活性,并用Western blot法检测细胞在30.5mmol/L葡萄糖处理6,12,72h后ILK蛋白表达量的变化。结果:高糖作用下晶状体上皮细胞的增殖活力高于正常对照组和甘露醇组,在30.5mmol/L组最为明显,而且随高糖暴露时间的延长,在48,72h时细胞的增殖活力增加更显著。30.5mmol/L葡萄糖作用6,72h,晶状体上皮细胞ILK蛋白的表达明显增高,分别是正常组的1.25和1.28倍,而甘露醇并不引起ILK的表达增加。结论:高浓度的葡萄糖促进人晶状体上皮细胞的增生,使细胞中ILK的表达量增加,这些变化并不依赖于高糖引起的高渗透压改变。
- 杜倩周健惠延年张自峰张乐关小荣
- 关键词：人晶状体上皮细胞高浓度葡萄糖整合素连接激酶
- Na^+-K^+-ATP酶活性及其α_1催化亚基在鸡晶状体中的分布被引量：1
- 2009年
- 目的对Na+-K+-ATP酶催化亚基蛋白在鸡晶状体的上皮层、周边部和中央部纤维的分布和酶活性进行检测和比较。方法将部分胚胎第10天(E10)的鸡晶状体显微解剖为晶状体上皮部、周边部纤维和中央部纤维3个部分,剩余部分制备冰冻切片。利用免疫荧光染色和Western blot方法检测Na+-K+-ATP酶催化亚基(α)在晶状体各部分的表达,通过检测哇巴因敏感的ATP水解率测定Na+-K+-ATP酶的活性。结果在晶状体切片上,α1催化亚基蛋白在晶状体上皮细胞(LECs)膜上有很强的表达,而在晶状体纤维细胞膜的表达明显减弱,在周边部上皮细胞的表达有明显的极性,而在中央部上皮细胞中未见表达。Western blotting检测也再次证实α1催化亚基蛋白在LECs中的表达明显高于在晶状体纤维中的表达。上皮层Na+-K+-ATP酶的活性是周边部纤维酶活性的2倍,是中央部纤维酶活性的11倍。结论Na+-K+-ATP酶α1催化亚基蛋白在鸡晶状体的上皮细胞和纤维上表达;在鸡晶状体上Na+-K+-ATP酶及其活性的分布是不均一的。
- 何芳周健
- 关键词：NA+-K+-ATP酶晶状体
- 用BrdU标记滞留细胞联合Sox2表达检测晶状体干细胞
- 2013年
- 目的检测小鼠晶状体上皮细胞中可能存在的晶状体干细胞及其分布位置。方法 60只(60眼)Balb/c小鼠随机分为BrdU标记组和生理盐水对照组,每组各30只(30眼)。BrdU标记组以150mg·kg-1剂量的10g·L-1BrdU每天2次腹腔注射,连续注射10d。生理盐水对照组以15mL·kg-1生理盐水每天2次腹腔注射,连续注射10d。在BrdU或生理盐水注射结束后0周、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周、12和14周分别处死3只小鼠,制备眼球冰冻切片。通过免疫荧光化学染色观察晶状体上皮BrdU标记细胞的量和分布变化。在BrdU标记组,通过免疫荧光化学染色观察0周、4周、8周、12和14周晶状体上皮细胞Sox2蛋白的表达及分布规律。通过BrdU-Sox2双标记免疫荧光染色观察BrdU-Sox2双标阳性细胞。结果 BrdU标记组在完成BrdU标记时(0周),晶状体上皮中央区和赤道区BrdU标记率均达100%;随着时间延长,中央区和赤道区的BrdU标记率逐渐下降,至12周时降至最低,中央区和赤道区分别为14.23%、5.86%(P=0.000);14周时中央区和赤道区分别为14.97%、6.11%(P=0.000),分别与12周时两区比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。0周、4周、8周、12周和14周时,中央区Sox2阳性细胞率分别为3.74%、3.47%、4.23%、4.09%和3.70%,赤道区Sox2阳性细胞率分别为0.66%、0.37%、0.47%、0.33%和0.51%,各时间点中央区与赤道区Sox2阳性细胞率差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Sox2在晶状体上皮细胞内表达稳定,主要分布于中央区。部分BrdU阳性细胞表达Sox2,即BrdU-Sox2双标阳性细胞,集中分布于晶状体上皮中央区。结论表达Sox2的标记滞留细胞可能是晶状体干细胞,主要分布于晶状体上皮中央区。
- 王潆周健
- 关键词：BRDUSOX2标记滞留细胞
- 高压氧治疗在眼病治疗中的应用进展被引量：2
- 2009年
- 高压氧治疗在临床上已被用于多种眼科疾病的治疗,其中包括伴有视觉症状的动脉气体栓塞和减压病、视网膜血管阻塞性疾病、眼及眼周的气性坏疽、鼻眼脑型毛霉菌病、眼周坏死性筋膜炎、有视觉症状的一氧化碳中毒后遗症、放射性视神经病变、放射线或者丝裂霉素C所致的巩膜坏死等。本文就高压氧治疗对眼部疾病治疗的原理、适应证和有效性进行综述。
- 宋毅果周健
- 关键词：高压氧治疗眼病适应证
- ILK siRNA对高浓度葡萄糖诱导的人LECs增生和上皮向间质转化的抑制作用被引量：6
- 2009年
- 目的探讨整合素连接激酶(ILK)对高浓度葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和转化的作用。方法将体外培养的人LECs系SRA01/04细胞分别培养在含葡萄糖5.5mmol/L(正常对照组)和30.5mmol/L(高糖组)的培养液中,用RT-PCR检测培养0、6、24h后ILK mRNA的表达;用ILK siRNA脂质体转染细胞,转染6h后,加入2组培养液处理24h,检测ILK、细胞增生核抗原(PCNA)、LECs转化指标α-SMA和FN在mRNA水平的表达。结果高糖组培养6h和24h,SRA01/04细胞ILK mRNA是正常对照组的2.48倍和2.32倍(P<0.01),刺激后24h,SRA01/04细胞PCNA、α-SMA、FN的mRNA表达分别是正常对照组的1.75、1.96和1.75倍(P<0.01)。ILK siRNA干扰后,正常对照组ILK的表达是非转染细胞的30%,高糖组转染细胞ILK mRNA水平(P<0.01)是非转染细胞的21%(P<0.01),转染细胞PCNA、α-SMA和FN的表达分别是非转染细胞的29%、33%和39%(P<0.01)。结论高浓度葡萄糖可诱导LECs增生、上皮向间质转化及ILK表达上调,抑制ILK的高表达能阻止这些过程。
- 储昭节周健惠延年
- 关键词：整合素连接激酶细胞增生晶状体上皮细胞
- Src-家族酪氨酸激酶对皮质性白内障晶状体中缝隙连接蛋白的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨抑制Src-家族酪氨酸激酶的异常激活在皮质性白内障的形成中对晶状体缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法分离10d的鸡胚胎全晶状体并在M199培养液中培养10d为对照组;加入0.1nmol/LSFK特异性抑制剂PP1作为PP1组。观察2组晶状体的混浊程度、计算晶状体的混浊面积百分比。对培养1、5、10d的晶状体细胞进行WGA、DAPI免疫荧光染色,观察晶状体组织学改变及Cx43分布和表达量的变化。在晶状体前囊膜上进行Lucifer Yellow染料负荷试验,测量染料弥散距离,评价缝隙连接的功能。结果对照组晶状体的混浊面积百分比在4d、10d分别为26%和50%,而PP1组为20%和14%(P<0.01)。培养5d、10d对照组晶状体上皮细胞(LECs)出现死亡,Cx43主要在LECs间表达;PP1组LECs死亡明显减少,Cx43的表达在上皮与纤维的交界面明显增强。在培养后1d、10d,对照组染料弥散距离与PP1组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论在体外培养鸡胚晶状体模型中,PP1可能通过保护Cx43缝隙连接功能以保持晶状体上皮组织结构正常,减缓皮质性白内障的发生。
- 裴瑞周健
- 关键词：缝隙连接蛋白43晶状体白内障
