国家自然科学基金(30672296) 作品数:5 被引量:1 H指数:1 相关作者: 赵素萍 章华 卿菁 蒋卫红 胡璟 更多>> 相关机构: 中南大学 宁波市第一医院 浙江省宁波市第一医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中肿瘤特异性分析研究 被引量:1 2013年 目的探讨BARF1基因的启动子活性及其在鼻咽癌细胞中是否具有肿瘤相对特异性。方法结合启动子预测软件结果(TRANSFAC和MATINSPECTOR)及引物设计软件(Primer premier 5.0),设计BARF1基因的启动子序列,验证其启动子活性,并比较该启动子在NP69细胞和CNE-2细胞中的的启动子活性的差异,验证其肿瘤相对特异性。结果测序和酶切结果证明所设计的BARF1基因的启动子的序列完全正确,其在CNE-2细胞中具有启动子活性,而在NP69细胞中不具备启动子活性,且该启动子在CNE-2细胞中的启动子活性远高于NP69细胞,差异有统计学意义(<0.05)。结论本研究设计的BARF1基因的启动子具有启动子活性,且该启动子具有肿瘤相对特异性。 卿菁 赵素萍 蒋卫红 章华关键词:BARF1基因 启动子活性 靶向性 E6.BARF1p调控自杀基因CD/UPRT.UL49的表达对鼻咽癌细胞的体外杀伤效应 2013年 目的体外实验观察及检测E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49/5-Fc系统对鼻咽癌上皮细胞系2(nasopharyngeal carcinoma epithelial-2,CNE-2)的杀伤效应。方法用高效液相色谱法测定γ射线干预对前体药物5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-Fc)转换效率的影响;用相对存活率表示γ射线联合前体药物5-Fc对转染自杀基因E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49的CNE-2细胞和野生型CNE-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测γ射线联合前体药物5-Fc对转染自杀基因E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49的CNE-2细胞的杀伤作用及旁杀效应。统计分析采用SPSS10.0软件进行t检验及方差分析,P<0.05表示有统计学意义。结果转染自杀基因E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49的CNE-2细胞在接受放射治疗联合前体药物5-Fc的作用后,其生长受到不同程度的抑制。即使仅有10%的CNE-2细胞成功转染了自杀基因E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49,亦可因旁杀效应而杀死37.46%的肿瘤细胞。结论 E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49/5-Fc自杀基因/前体药物系统对鼻咽癌CNE-2细胞具有直接杀伤和旁杀效应。 卿菁 赵素萍 蒋卫红 章华关键词:流式细胞术 融合自杀基因对鼻咽癌细胞的体内杀伤作用 2013年 [目的]研究融合自杀基因对鼻咽癌细胞的体内杀伤作用。[方法]培养鼻咽癌CNE-2细胞,建立裸鼠荷瘤模型。随机分为6组,每组5只,A组:脂质体包裹质粒瘤内注射瘤内组;B组:脂质体包裹质粒瘤内注射+肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)组;C组:脂质体包裹质粒瘤内注射+腹腔注射5氟胞嘧啶(5-Fc)组;D组:脂质体包裹质粒瘤内注射+肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)+腹腔注射5-Fc组;E组:肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)+腹腔注射5-Fc,以及空白对照组。记录肿瘤体积变化;计算各组肿瘤抑制率,绘制肿瘤生长曲线;取肿瘤组织进行病理观察;鉴定肿瘤组织中CD/UPRT.UL49基因。肿瘤体积变化的比较采用单向方差分析,组间多重比较采用LSD法。[结果]成功建立鼻咽癌裸鼠荷瘤模型,生长曲线显示:5组瘤体积差异有统计学意义(F=720.684,P<0.01),测序结果证实,除E组外,其余各处理组均检测到目的基因,且Western blot检测结果示:B和D组肿瘤组织内自杀基因的表达高于其余各组。病理切片证实肿块为低分化鳞癌,其中D组肿瘤组织在干预作用下出现明显坏死。[结论]E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49自杀基因载体联合前药5-Fc在放射线的作用下,可明显抑制鼻咽癌移植瘤的生长,转染该融合自杀基因可增强放疗敏感性,为鼻咽癌的基因—放射治疗开辟了新思路。 卿菁 赵素萍 蒋卫红 章华关键词:鼻咽肿瘤 动物模型 自杀基因 建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株 2014年 目的:建立稳定表达融合自杀基因CD/UPRT.UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株。方法:构建表达载体pcDNA3.1(-)E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49,经脂质体法转染CNE-2细胞,G418和前体药物5-氟胞嘧啶筛选出阳性克隆细胞并扩大培养。抽提阳性克隆细胞总蛋白质,Western-blotting检测目的基因表达。结果:融合自杀基因CD/UPRT.UL49在CNE-2转染细胞内稳定表达。结论:本组通过脂质体转染技术,成功地建立了稳定表达融合CD/UPRT.UL49基因的CNE-2细胞株。 卿菁 赵素萍 蒋卫红 章华关键词:自杀基因 CNE-2细胞 放射诱导型增强子E6可提高hTERTp的放射敏感性 2009年 目的:构建融合启动子E6.hTERTp,以探讨放射干预后放射敏感启动子片段E6对人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)启动活性以及对鼻咽癌靶向调控的影响。方法:通过Overlap PCR法合成融合启动子E6.hTERTp,连接至PGL3 basic质粒。构建含EGR-1启动子(EGR-1p)以及hTERTp的PGL3 basic载体做对照。使用Lipo2000将报告载体以及pRL-SV40质粒共转染正常人成纤维细胞HDF以及人鼻咽癌CNE-2细胞,并给予不同剂量放射干预,双荧光素酶法检测其启动活性。t检验分析不同细胞系中不同放射条件下各启动子启动活性差别。结果:在正常HDF细胞系内,无论放射与否,hTERTp组以及E6.hTERTp组的启动活性均很低;而在CNE2细胞系中,三种启动子启动活性均随放射剂量增加而增加,其增长幅度从大到小分别是EGR-1p组、E6.hTERTp组、hTERTp组。在相同放射剂量干预下,EGR-1P组、E6.hTERTp组与hTERTp组三组间的启动活性两两之间均有统计学差别(p<0.01)。结论:放射诱导型增强子E6能够明显提高hTERTp放射敏感性,且不影响其在鼻咽癌中靶向性调控作用,为该类肿瘤的放射-基因治疗提供了新的思路。 胡璟 胡可锦 赵素萍 唐瑶云关键词:HTERT启动子