国家自然科学基金(30971003)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：李鸿钧孙茂盛严敏谢天宏王文举更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嵌合Neurturin在恒河猴脂肪间充质干细胞中的表达及定向诱导作用被引量：1
- 2012年
- 该研究通过重组腺病毒传递嵌合型Nerve growth factor(NGF)/Neurturin(NTN)至恒河猴脂肪间充质干细胞(rhesus adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价嵌合型NGF/NTN在诱导该细胞为神经元细胞中的作用,为进一步探讨ASC-NTN体内修复帕金森氏病猴模型潜能提供实验基础。用带有NGF/NTN嵌合基因的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及ELISA检测重组NTN在rASCs的表达及产物定位,在外源化学诱导剂协同作用下对rASCs进行诱导。rAd-NGF/NTN感染rASCs后检测到NGF/NTN转录产物,表达产物可分泌到细胞外,分泌出的NTN蛋白在体外能够促进鸡胚背根神经节长出神经突起,维持胎鼠中脑神经元的存活。rASCs在内外源性诱导因素诱导下可向神经元样细胞分化。利用rAd-NGF/NTN可将NGF-NTN传递至rASCs中并表达,rASCs能够被定向诱导为具有分泌NTN作用的神经元样细胞。这些研究结果为将来rASCs-NTN移植进入帕金森氏病猴模型进行帕金森氏病治疗提供了重要依据。
- 周艳孙茂盛李鸿钧王晚璞谢天宏
- 关键词：NEURTURIN脂肪间充质干细胞重组腺病毒体外活性帕金森氏病
- Neurturin嵌合神经营养因子重组腺病毒的构建及体外活性测定被引量：2
- 2010年
- Neurturin是神经营养因子家族成员,研究发现体外表达的重组Neurturin能够促进多巴胺能神经元的存活,对帕金森氏病的基因治疗有重要意义。但有研究指出野生型Neurturin在细胞中不能完成加工进而不能被分泌到胞外。因此实验对野生型Neurturin进行改造,将NGF的信号肽与Neurturin的成熟肽进行拼接,形成一种嵌合的NGF/NTN基因,并将该基因插入重组腺病毒基因组中,在AD-293细胞中包装获得重组腺病毒。通过免疫荧光和Westernblotting证实Neurturin能够在胞内表达,并且能够对其进行加工最后分泌至胞外。最后通过鸡胚背根神经节培养实验证明该嵌合基因能够表达具有明显活性的Neurturin。
- 王文举孙茂盛严敏李鸿钧
- 关键词：NEURTURIN嵌合基因重组腺病毒体外活性帕金森氏病
- 表达神经营养因子Neurturin的骨髓间充质干细胞的构建及体外活性检测被引量：1
- 2012年
- 研究神经营养因子Neurturin(NTN)在由于神经元损伤而造成的神经退行性疾病中对神经元的保护和修复作用。利用重组腺病毒载体将NTN基因转入恒河猴骨髓间充质干细胞(rMSC),通过RT-PCR、IF及Western blot方法检测NTN的转录和表达,并采用鸡胚背根神经节体外培养实验和胚胎大鼠中脑多巴胺能神经元存活实验对NTN进行体外活性检测。结果表明NTN在rMSC中稳定表达和分泌,并具有体外生物学活性,为由于神经元损伤造成的神经退行性疾病的干细胞移植治疗奠定了一定的基础。
- 王晚璞孙茂盛李鸿钧谢天宏严敏周艳尹娜
- 关键词：重组腺病毒神经营养因子NEURTURIN活性检测
- 酪氨酸羟化酶重组腺病毒在293细胞中的表达及体外活性测定被引量：4
- 2010年
- 目的构建一种能够携带酪氨酸羟化酶(TH)进入帕金森氏病动物模型体内的重组腺病毒,该病毒能够使TH基因转录并且能够翻译成具有活性的功能蛋白。方法将TH基因插入穿梭质粒,重组穿梭质粒与腺病毒基因组在BJ-5183中进行同源重组,将重组成功的腺病毒基因组转染293细胞,使其在293细胞中包装出重组腺病毒,RT-PCR和免疫荧光检测目的基因的转录和表达。利用毛细管电泳法检测L-DOPA的生成。结果成功构建能够表达TH基因的重组腺病毒,RT-PCR能够扩增目的插入片段,毛细管电泳能够检测到L-DOPA的生成。结论该重组腺病毒能够在体外很好地表达具有活性的酪氨酸羟化酶,为利用该基因对帕金森氏病动物模型进行基因治疗打下基础。
- 王文举孙茂盛严敏谢天宏张光明李鸿钧
- 关键词：酪氨酸羟化酶重组腺病毒帕金森病毛细管电泳
