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大鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对骨髓基质细胞的影响: 2010年; 目的研究缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)形态、活力、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、电生理和神经营养因子(NTFs)表达情况的影响。方法将体外培养的大鼠BMSCs分别置于实验组、假手术组及空白对照组培养条件中,采用组织学、台盼蓝染色、免疫组织化学、膜片钳、半定量RT-PCR等方法,观察细胞形态改变,测定活性,鉴定NSE表达,记录全细胞膜电流,检测NGF、GDNF、BDNF和bFGF在各时间点mRNA表达情况。结果实验组细胞形态发生神经元样改变,细胞活力良好,NSE阳性率、外向K+电流峰值及电流密度、NTFs的表达水平高于其他组,但未引出动作电位。结论大鼠BMSCs在脑缺血再灌注损伤的细胞微环境中生长良好,可以诱导分化为神经元样细胞,但无神经元的电生理特征,NTFs的表达能力明显增强。; 王禹罗俊生霍晓川; 关键词：骨髓基质细胞神经营养因子

Ghrelin抑制TNF-α诱导的HBMEC细胞PAI-1 mRNA表达: 2010年; 目的探讨ghrelin对TNF-α诱导的HBMEC人脑微血管内皮细胞PAI-1 mRNA的影响及意义。方法培养HBMEC人脑微血管内皮细胞,加入不同浓度的TNF-α(0.1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml),采用逆转录-聚合酶链反应测定(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PAI-1 mRNA的水平;ghrelin单独作用(1ng/ml,10ng/ml)或预处理1h后,加入TNF-α(1ng/ml)检测相应指标的变化。结果 TNF-α(0.1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml)浓度依赖地增高人脑微血管内皮细胞PAI-1 mRNA的表达;而给与ghrelin单独作用(1ng/ml,10ng/ml)或预处理(10ng/ml)的人脑微血管内皮细胞PAI-1 mRNA的表达减低。结论 Ghrelin在HBMEC人脑微血管内皮细胞可抑制TNF-α诱导的PAI-1 mRNA表达,证实ghrelin在脑血管疾病的治疗中可能起重要作用。; 郭闻师丁丽颖罗俊生; 关键词：纤溶酶原激活物抑制剂-1 人脑微血管内皮细胞 GHRELIN

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响被引量：2: 2011年; 目的探讨不同浓度辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响。方法以50 nmol/L佛波酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型,通过不同浓度辛伐他汀干预后,油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇和胆固醇酯含量,W estern b lot检测SR-A蛋白的表达。结果与ox-LDL组比较,辛伐他汀处理组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内胆固醇酯含量均显著减少(P均<0.01),同时SR-A蛋白表达明显下降(P<0.01),呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,可能与辛伐他汀抑制SR-A的表达,从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取有关。; 李晨光罗俊生冯旭霍小川关宁; 关键词：辛伐他汀单核细胞泡沫细胞清道夫受体

人胆固醇酯水解酶重组腺病毒载体的构建被引量：4: 2011年; 目的构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)基因重组腺病毒载体,并在人胚肾细胞(HEK293)中扩增。方法将hCEH基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hCEH,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组质粒pAd-hCEH,酶切后用脂质体转染HEK293,包装成重组体腺病毒Ad-hCEH,经扩增和纯化得到高滴度重组病毒。采用PCR法进行鉴定,绿色荧光蛋白(GFP)追踪,荧光显微镜下观察并计算Ad-hCEH病毒滴度。结果重组穿梭质粒及其载体经鉴定后,电泳结果与预期相符。Ad-hCEH-EGFP感染HEK293后,随时间增加,HEK293表达绿色荧光的量也增加。hCEH碱基序列经测序与Genebank中已知序列完全吻合。Ad-hCEH电泳结果显示1 700 bp附近有一条带,与目的片段相符合。最终测得Ad-hCEH滴度为1.2×1010 pfu/ml。结论成功构建了携带hCEH基因的重组腺病毒载体。; 张兴海罗俊生霍晓川顾立学关宁冯旭; 关键词：腺病毒质粒人胚肾细胞

人胆固醇酯水解酶在RAW 264.7巨噬细胞内瞬时表达对胆固醇代谢的影响被引量：4: 2010年; 目的:以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为研究对象,探讨人胆固醇酯水解酶(Human cholesteryl ester hydrolase,hCEH)在鼠巨噬细胞内瞬时表达,对细胞内胆固醇代谢产生的影响。方法:利用FuGENE HD转染试剂将pEGFP-N1-hCEH质粒,转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞。24 h后将巨噬细胞与氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oX-LDL)(100 mg/L),共同孵育48 h。荧光显微镜观察及Western blot检测细胞内CEH的表达,油红O染色观察细胞内脂滴堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇(Free cholesterol,FC)和胆固醇酯(Cholesterol esters,CE)含量。结果:转染72 h后,荧光细胞数最多,转染率接近40%。Western blot检测显示,hCEH蛋白在鼠巨噬细胞内大量表达并部分抑制鼠胆固醇酯水解酶(Cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达。转染hCEH组与ox-LDL诱导组相比,油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量明显下降。结论:hCEH基因在RAW264.7小鼠单核巨噬细胞内成功表达,减少细胞内胆固醇水平,抑制泡沫细胞的形成。; 冯旭罗俊生关宁霍晓川王瑞; 关键词：氧化低密度脂蛋白泡沫细胞胆固醇代谢

人胆固醇酯水解酶真核表达载体的构建及U937细胞系的转染被引量：1: 2011年; 目的构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-hCEH,并观察其转染单核巨噬细胞株U937后,细胞中hCEH的表达情况。方法以人肝细胞L-O2总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCEH编码区序列,将扩增片段插入到pMD19-T载体中,回收、纯化目的片段后亚克隆到pEGFP-N1真核表达载体上,经双酶切、测序鉴定后,转染U937,观察U937中绿色荧光蛋白的表达情况。结果 RT-PCR扩增hCEH基因的编码区序列获得1条约1.7 kb的片段,与预期片段大小相符;以pEGFP-N1为载体,成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-hCEH,该质粒可以在U937中表达。结论成功构建pEGFP-N1-hCEH,用其转染U937后,细胞中pEGFP-N1-hCEH大量表达。; 顾立学罗俊生王瑞冯旭关宁霍晓川; 关键词：真核表达载体单核巨噬细胞 U937细胞转染

原发性胃癌患者术后疲劳综合征的药物治疗方案研究被引量：7: 2016年; 目的探讨原发性胃癌患者术后疲劳综合征的药物治疗方案。方法选取住院接受治疗的100例胃癌术后患者,分为实验和对照组各50例组。实验组患者采取磷酸肌酸钠药物治疗方案,对照组患者采取相同体积的生理盐水注射治疗。记录两组患者实验数据,比较两组结果,并进行统计学分析。结果两组患者的体质量、三头肌皮褶厚度(Triceps skinfold,TSF)、上臀肌围(Gluteal muscle circumference,AMC)、血清总蛋白(Total protein,TP)和前白蛋白(Prealbumin,PA)水平均具有显著差异,实验组患者手术后1、3、5天的(Visual Analogue Scale,VAS)评分优于对照组,实验组患者治疗的有效率为88.0%,对照组患者治疗的有效率为64.0%。以上各项指标均有统计学意义(P<0.05)。结论磷酸肌酸钠药物治疗方案对原发性胃癌患者术后疲劳综合征的治疗具有重要意义。磷酸肌酸钠可以提高患者术后体质量、TSF、AMC、TP和PA水平,患者术后VSA评分也明显降低,可明显提高患者治疗有效率,可在临床广泛应用。; 杨皓张广元殷朔罗俊生; 关键词：胃癌疲劳综合征磷酸肌酸钠术后

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国家自然科学基金(30971023)

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