国家自然科学基金(30571180)
- 作品数：6 被引量：26H指数：2
- 相关作者：庄伟建蔡宁波黄湘文潘建菁张君诚更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 应用抑制消减杂交技术构建花生果皮差异表达文库被引量：1
- 2007年
- 为构建花生果皮差异表达基因消减文库，分离花生果皮差异表达cDNA片段，本研究采用抑制消减杂交技术，以花生种仁cDNA为Driver，果皮cDNA为Tester，进行两次消减杂交和两次抑制性PCR，将第二次PCR产物与pGEM-TEasy载体相连，电击转化大肠杆菌，成功构建果皮差异表达cDNA文库。所长出菌落中89．2％为白色克隆。采用PCR法对重组子进行鉴定，发现其中单一扩增条带的克隆约占83．5％，片段大小集中分布于250～750bp之间。
- 蔡宁波潘建菁黄湘文庄伟建
- 关键词：CDNA文库抑制消减杂交
- 花生果种皮发育相关特异基因的克隆和表达分析(英文)被引量：1
- 2009年
- 本实验从花生果皮种仁抑制消减文库中筛选出了一个255bp的EST序列并进行了研究。构建了花生果种皮全长cDNA库并从中筛选出该基因的全长，命名为AhPSG8。此基因全长1118bp，开放阅读框第33～833个碱基，编码266个氨基酸残基组成的多肽。由生物信息学分析表明该基因编码多个活性位点蛋白，可能与细胞内DNA的转录有关；结构分析揭示出AhPSG8具有一个跨膜区，N端是一个由20个氨基酸组成的信号肽;该基因与已发表的基因序列没有明显的同源性，为一新基因；RT—PCR研究该基因在花生中的表达，结果显示该基因在果种皮中特异表达，10～40d果皮中丰富表达，推测为与花生果种皮发育相关基因。
- 张国林蔡宁波陈华曾建斌黄湘文庄伟建
- 关键词：特异基因克隆
- 花生种仁特异表达基因的初步筛选被引量：1
- 2007年
- 应用抑制消减杂交技术,以花生种仁cDNA作为消减杂交的试验方(tester),以花生果皮cDNA作为驱动方(driver)进行消减杂交。经过两轮抑制PCR后,将第2次PCR产物与pGEM-TEasy载体相连,电击转化大肠杆菌,成功构建种仁特异表达cDNA文库。所长出菌落中91.2%为白色克隆,采用PCR法对阳性克隆进行鉴定,发现其中单一扩增条带的克隆约占86.5%,片段大小集中分布于200～800 bp之间。用花生种仁cDNA探针和果皮cDNA探针分别对文库高密度杂交点阵膜进行反向Northern杂交检测。根据杂交结果,初步从文库中挑取出254个差异点。花生种仁特异表达基因的初步筛选,为了解花生产量、品质形成相关的重要功能基因,也为将来应用植物基因工程手段改良花生产量和品质奠定基础。
- 蔡宁波赵永莉潘建菁黄湘文张君诚庄伟建
- 关键词：花生种仁消减杂交基因筛选
- 花生种子全长cDNA文库的构建和鉴定被引量：21
- 2007年
- 以花生品种闽花5号各发育时期的种子为材料分离mRNA，利用SMART技术合成双链eDNA。利用限制性内切酶sfiⅠ酶切。将经过分级分离得到的cDNA连接到质粒载体pDNR-LIB，成功构建花生种子全长cDNA文库。将所得到初级文库扩增后进行保存，检测扩增文库滴度为1．7×10^9efu／mL。PCR鉴定重组子，发现重组率接近100N，插入片段集中分布在0．5～2．0kb。插入片段的平均大小在1000bp左右，这说明该文库既可以满足低丰度基因的筛选，也可保证获得全长cDNA。
- 蔡宁波黄湘文庄伟建
- 关键词：花生种子CDNA文库SMART技术
- 花生果种皮特异表达基因AhPSG13的克隆和表达研究被引量：3
- 2010年
- 为了克隆在花生果种皮中特异表达的基因,本实验从花生果皮种仁抑制消减文库中筛选出一个277bp的EST序列并进行研究,通过构建花生果皮全长cDNA文库,获得此目的基因G13的全长为1369bp,开放阅读框从第28个碱基始至1122个碱基止,预测分子量为39865.59,等电点5.73。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白具有4个跨膜结构域和多个活性位点,可能与细胞内DNA转录有关;该蛋白与多种豆科作物的半胱氨酸蛋白酶具有较高同源性,推测为花生半胱氨酸蛋白酶相关基因;RT-PCR研究该基因表达,结果显示该基因在果种皮中特异表达,于30d果皮中表达量最大。本研究克隆的AhPSG13基因序列已经登陆到GenBank,登录号为FJ475061。
- 张国林石新国蔡宁波赵永莉庄伟建
- 关键词：花生特异表达基因克隆
- 花生果种皮特异表达基因候选片段的分离
- 2007年
- 应用改良的琼脂糖凝胶电泳展示DDRT-PCR产物的方法分离花生果种皮特异表达基因,共分离出24条差异表达片段.经测序后排除重复,最终得到8条差异片段.其中1条为花生上已知基因片段,余下7条均为花生上尚未报道过的基因.此7个片段序列已登录Genbank,其登录号分别为DQ450065、DQ450066、DQ450067、DQ450068、DQ450069、DQ450070、DQ450071.同时本研究还对应用琼脂糖电泳分离DD-PCR产物的方法进行了探讨.
- 蔡宁波张君诚兰岚庄伟建赵永莉李毓
- 关键词：花生特异基因
