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国家现代农业产业技术体系建设项目(NYCYTX-49-17): 作品数：11 被引量：57H指数：5; 相关作者：杨先乐胡鲲安健姜有声黄宣运更多>>; 相关机构：上海海洋大学广东省水生动物疫病预防控制中心连云港市海洋与水产科学研究所更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项上海市科技兴农重点攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

嗜水气单胞菌国内分离株的毒力因子分布与致病性相关性分析被引量：16: 2011年; 为了研究分析国内致病性嗜水气单胞菌的毒力因子的分布及与致病性的相关性及其防治,选取5种主要毒力因子气溶素(aerA)、溶血素(hlyA)、丝氨酸蛋白酶(ahpA)、抗金属蛋白酶(ast)、肠毒素(altA)设计5对特异性引物,用PCR方法进行检测,采用急性毒性实验方法测定菌株对异育银鲫的半数致死量(50%lethal dose,LD50),细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的敏感性,结果显示:除菌株Hong12的LD50约为109 cfu,毒力弱外,其他毒力均较强,LD50均在106 cfu左右。aerA、ahpA、hlyA、altA、ast 5种毒力基因的携带率分别为77.8%、88.9%、100%、100%、77.8%。通过比较嗜水气单胞菌毒力基因的分布情况与其对鲫鱼致病性试验结果可以发现,aerA、ahpA为嗜水气单胞菌致病的主要毒力因子,与致病性存在相关性,ast与致病力存在一定相关性,但不是主要毒力因子,hlyA、altA与致病性不存在相关性。9株嗜水气单胞菌对青霉素、羧苄青霉素、万古霉素不敏感,对复合磺胺、头孢噻肟、利福平中毒敏感,对呋喃妥因、氯霉素、四环素、氧氟沙星高度敏感。; 付乔芳邱军强胡鲲杨先乐安健; 关键词：嗜水气单胞菌毒力因子

2种不同无色孔雀石绿单克隆抗体的制备: 2011年; 【目的】制备无色孔雀石绿（LMG）单克隆抗体,并分析其生物学特性,为建立LMG残留的免疫学检测方法奠定基础。【方法】通过改进的碳二亚胺法制备无色孔雀石绿-牛血清白蛋白偶联物（LMG-BSA）与副品红-牛血清白蛋白偶联物（PA-BSA）,用紫外扫描、质谱法方法鉴定偶联物。利用制备的LMG-BSA与PA-BSA作为免疫原,免疫4~5周龄Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备LMG单克隆抗体,并对其效价、亲和力、灵敏度和特异性等进行分析。【结果】LMG-BSA与PA-BSA的偶联比率分别为7∶1和37∶1;经间接酶联免疫吸附（ELISA）法筛选,由LMG-BSA和PA-BSA抗原各获得1株杂交瘤细胞,分别命名为L-1、P-1。这2株细胞株分泌的单克隆抗体纯化后,经测定效价分别为1.25×105和6.25×106,亲和力常数分别为4.92×109和1.44×108L/mol,半抑制质量浓度（IC50）分别达8.03和10.5μg/L。L-1分泌的单克隆抗体仅与孔雀石绿存在交叉反应,交叉反应率为100%;P-1分泌的单克隆抗体与孔雀石绿及副品红均存在交叉反应,交叉反应率分别为80%与100%。【结论】成功获得了2株LMG单克隆抗体,其均可用于水产品中LMG残留的快速检测。; 陈力胡鲲姜有声黄宣运安健杨先乐; 关键词：半抗原抗体免疫

中华绒螯蟹病害的流行态势及其对产业持续发展的思考被引量：9: 2010年; 中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)养殖业是我国水产养殖支柱产业之一。随着中华绒螯蟹养殖产业飞速发展,病害问题也愈加严重,并逐渐成为了产业发展的"瓶颈"问题。本文就我国近年来中华绒螯蟹病害流行的态势、病害流行原因以及应对措施进行剖析,以期为推动该产业的持续发展提供相应的参考。; 杨先乐黄志华陈力; 关键词：病害

噬菌蛭弧菌颗粒剂制备条件的优化被引量：4: 2010年; 试验采用海藻酸钠包埋法对噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)进行固定化,制备得到噬菌蛭弧菌颗粒。以噬菌蛭弧菌活菌数为考核指标,优化噬菌蛭弧菌固定化条件。通过单因素试验和正交试验,评价了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)、玉米油浓度、包埋温度、搅拌时间、搅拌速度和交联时间对噬菌蛭弧菌固定化的影响。结果表明,作为载体配方优化因素的海藻酸钠浓度和玉米油浓度对活菌数具有显著性影响,而氯化钙浓度和蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)影响不显著;作为过程优化因素的温度和搅拌速度对活菌数具有显著性影响,而搅拌时间和交联时间影响不显著。在海藻酸钠浓度1.5%、氯化钙浓度6.5%、蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)50%、玉米油浓度4.5%、包埋温度47.5℃、搅拌时间40min、搅拌速度450r/min和交联时间36h的条件下,制得的固定化蛭弧菌颗粒活菌数对数值达到7.51。本方法经济、安全、保存效能好,适合在水产养殖中应用。; 张小能杨先乐曹海鹏胡鲲安健黄志华; 关键词：噬菌蛭弧菌颗粒剂

基于单克隆抗体的酶联免疫法与高效液相色谱法检测水产品中环丙沙星残留的比较被引量：2: 2010年; 为了快速、灵敏地检测禁用药物环丙沙星在水产品中的残留,建立了基于单克隆抗体的间接竞争酶联免疫法(competitive indirect ELISA,ci-ELISA),并比较了其与高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography,HPLC)在灵敏度、准确性和重现性等方法学参数上的差异。实验结果显示,经过浓缩、净化等前处理过程,ci-ELISA与HPLC的检测灵敏度分别可以达到10μg/kg和1μg/kg,回收率分别为79.28%～92.92%和86.27%～97.32%,相对标准偏差分别在3.21%～8.88%和2.66%～5.52%。前者经济、高效,适合作为初筛方法大批量筛选样品;后者灵敏度、重现性更好,适于在实验室条件下作为验证方法。; 胡鲲黄宣运姜有声方伟朱泽闻杨先乐; 关键词：环丙沙星水产品高效液相色谱法

嗜水气单胞菌毒力基因在传代过程中的稳定性研究被引量：10: 2011年; 为了解嗜水气单胞菌毒力基因在传代过程中的稳定性,对传代前后嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,A.hy-drophila)的毒力和毒力基因进行测定和检测。采用急性毒性试验方法测定10株嗜水气单胞菌原代、第10代及第20代的菌株对异育银鲫(Carassais auratus gibebio)的半数致死量,通过聚合酶链式反应(PCR)检测原代、第10代及第20代的菌株中5种毒力基因aerA、hlyA、ahpA、altA及ast的变化情况。试验结果表明,嗜水气单胞菌在传代过程中毒力基因分布相对较稳定。但是ahpA基因极易发生变异,在培养基上连续多次传代后,毒力逐渐减弱甚至消失。可推知,ahpA基因与毒力相关性最大,并易受传代影响。; 付乔芳邱军强胡鲲杨先乐安健; 关键词：嗜水气单胞菌传代毒力基因稳定性

一株具水霉抑制特性的芽孢杆菌筛选及其分子生物学鉴定被引量：5: 2012年; 以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株试验,结果显示菌株BA1对水霉菌株6#、10#、S2也有明显的抑制作用(P<0.05)。通过测定菌株BA1的16 S rDNA,利用BLAST软件进行同源性比对,发现与蜡样芽孢杆菌的同源性在99%以上。由此推测,菌株BA1为蜡样芽孢杆菌菌株,且具有明显抑制水霉菌作用,可以作为水产养殖上水霉病防治的生物制剂使用。; 宋增福范斌佘林荣唐磊赵世林吕利群杨先乐; 关键词：抑菌试验分子生物学鉴定

应用改良的碳二亚胺法制备无色孔雀石绿完全抗原及鉴定: 2011年; 为完善无色孔雀石绿的免疫检测方法,通过改良的碳二亚胺法,改造无色孔雀石绿结构类似物副品红半抗原。经过紫外分光法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、质谱法鉴定,偶联反应成功,且偶联比最高达37∶1。以副品红—牛血清白蛋白偶联物为完全抗原免疫Balb/c小鼠,产生针对无色孔雀石绿的多克隆抗体,效价可达6.25×105;取抗体与无色孔雀石绿进行竞争抑制测定,IC50可以达到11.8 mg/L。该抗体与孔雀石绿及副品红存在交叉反应,交叉反应率均为100%。; 陈力胡鲲姜有声黄宣运安健杨先乐; 关键词：偶联多克隆抗体

草鱼体外培养细胞中β-萘黄酮对CYP1A基因表达的诱导被引量：3: 2010年; 为了建立以CYP1A cDNA为探针的水环境毒理学细胞模型,以β-萘黄酮(BNF)作为诱导剂,通过半定量PCR技术研究CYP1A在草鱼不同细胞系及其对应组织中的诱导表达情况。在半定量PCR反应参数研究中,对关键的退火温度和循环次数进行了优化,结果显示退火温度为57℃,循环次数为30次较为合适,该条件下Gauss迹量的CYP1A/ACT比值能更准确的反映CYP1A的表达水平。对照组和诱导组草鱼细胞中ACT和CYP1A cDNA扩增结果表明,细胞中CYP1A的基础表达量较低,而BNF诱导使GCL、CIK和CO细胞中CYP1A的表达水平得到显著的提高。GCL、CIK和CO细胞三者之间诱导后CYP1A的表达水平有显著差异(P<0.05),诱导表达量大小顺序为GCL>CIK>CO。草鱼细胞系的相应组织中ACT和CYP1A cDNA扩增以及电泳的结果与细胞中较为相似,组织中CYP1A诱导表达量大小顺序也与相应的细胞相同:肝>肾>卵巢。比较分析的结果表明,CYP1A在体内与体外的诱导表达水平具有一定的相关性。; 林茂杨先乐纪荣兴; 关键词：草鱼细胞 CDNA

副溶血性弧菌7种保藏方法比较被引量：2: 2012年; 采用7种不同方法对副溶血性弧菌的保藏效果进行研究,以菌种的保藏时间、存活率、生物学特性及毒力指标比较保藏效果。结果表明:保藏时间由长到短依次为:冷冻真空干燥保藏法>-20℃脱脂牛奶保藏法>室温液体石蜡保藏法>4℃液体石蜡保藏法>-20℃甘油保藏法>室温斜面保藏法>4℃斜面保藏法。7种方法保藏前后,副溶血性弧菌革兰氏染色,氧化酶,0 NaCl、4%NaCl及10%NaCl盐度生长试验,TCBS培养基上生长性状及溶血性试验等基本生物学特性均无影响。冷冻真空干燥法毒力稳定,其他保藏方法超过12个月后毒力出现不同程度的下降。采用室温斜面法保藏2个月,菌种生物学特性和毒力均稳定,操作最简便,适宜短期保藏;采用冷冻真空干燥法保藏24个月以上,或采用-20℃脱脂牛奶法保藏20个月,菌种生物学特性均稳定,这2种方法适宜长期保藏。; 张永华李怡范斌宋增福张庆华; 关键词：副溶血性弧菌保藏方法存活率毒力

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