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链霉菌M-Z18膜蛋白ε-聚赖氨酸降解酶的分离纯化、酶学性质及应用被引量：6: 2014年; 【目的】研究链霉菌Streptomyces sp.M-Z18ε-聚赖氨酸降解酶(Pld)的分离纯化及其生理生化特性,并利用该酶制备低聚合度ε-聚赖氨酸(ε-PL)。【方法】菌体细胞经超声破碎、NaSCN溶解和HiTrapTMButyl HP疏水层析制备到Pld,随后研究了其酶学性质、动力学和降解ε-PL过程,最后利用常量稀释法比较了不同聚合度范围ε-PL的最小抑菌浓度。【结果】从Streptomyces sp.M-Z18细胞膜上分离纯化到Pld,纯化倍数为80.4倍,回收率达到59.3%。以L-赖氨酰对硝基苯胺为底物,酶促反应的最适温度为37℃,最适pH为7.0,动力学常数Km为0.621 mmol/L,Vmax为701.16 nmol/min·mg;酶活在pH 7.0-10.0和50℃以下稳定。降解ε-PL实验发现,纯化到的Pld以内切方式降解ε-PL。抑菌实验表明,高聚合度ε-PL(30-35)对细菌的抑制效果较好,而低聚合度ε-PL(8-20)更有利于抑制酵母菌的生长,各种聚合度ε-PL对霉菌的生长抑制均较差。【结论】从ε-PL产生菌中分离纯化到内切型ε-PL降解酶,发现不同聚合度范围ε-PL对微生物的抑制能力存在显著差异。; 刘庆瑞陈旭升曾昕韩岱毛忠贵; 关键词：链霉菌分离纯化最小抑菌浓度

碳源和氮源流加方式对ε-聚赖氨酸补料-分批发酵过程的影响被引量：5: 2013年; 摘要为实现Streptomycessp．M—Z18补料一分批发酵甘油生产ε-聚赖氨酸（ε-PL）的自动流加碳源和解决因发酵中后期菌体生长速率下降／停滞引起ε-PL合成速率下降的问题，该文首先借助DO-stat反馈补料方法，考察了补料阶段甘油控制在不同浓度范围内对ε-PL合成的影响；然后，通过在发酵中期分别流加牛肉膏和酵母粉，研究了2种有机氮源对发酵中后期菌体生长和ε-PL合成的影响；最后，在2阶段pH调控策略基础上，评价了上述最优控制条件下对Streptomycessp．M—Z18合成ε-PL的促进作用。实验结果表明，依靠DO—stat反馈补料方式将补料阶段甘油浓度稳定控制在0～10g／L，并在发酵96h开始流加酵母粉和（NH4）2SO4混合液，结合pH值2阶段调控策略（3．5—3．8），经过192h发酵，可以实现ε-PL产量达到38．77g／L，产率达到4．85g／（L·d）。基于碳源和氮源流加方式的优化，建立的DO—stat反馈流加甘油策略和提出的发酵中期流加酵母粉和（NH4）2SO4混合液的方法是提高ε-PL发酵水平的有效方法之一。; 陈旭升董难毛忠贵; 关键词：Ε-聚赖氨酸

发酵过程流加L-谷氨酸提高ε-聚赖氨酸的产量被引量：5: 2013年; 为了提高Streptomyces sp.M-Z18合成ε-聚赖氨酸(ε-PL)能力,在考察L-谷氨酸添加浓度和添加时机基础上,提出发酵过程中流加L-谷氨酸的策略。结合甘油补料-分批发酵方式,该策略实现174 h内ε-PL发酵产量和产率分别达到31.65 g/L和4.36 g/(L·d),较原发酵工艺分别提高49.2%和43.9%。实验结果表明,发酵过程流加L-谷氨酸是提高ε-PL发酵水平的有效策略之一。; 董难陈旭升任喜东曾昕孙启星张建华毛忠贵; 关键词：STREPTOMYCES SP

ε-聚赖氨酸发酵过程污染微生物的分离与鉴定: 2015年; 【目的】研究ε-聚赖氨酸发酵过程中污染微生物的种类。【方法】采用稀释涂布法、划线法、环境胁迫法和液体营养富集法等对污染样本进行微生物的分离与纯化,通过菌落形态和显微观察,再结合16S r RNA基因序列分析,确定分离菌株的系统发育地位,并对分离菌株的ε-聚赖氨酸耐受性进行考察。【结果】液体营养富集法实现了污染微生物的分离,通过16S r RNA基因序列分析鉴定其为一株Acinetobacter bereziniae,并证实该菌能在高浓度ε-聚赖氨酸条件下生长。【结论】Acinetobacter bereziniae是ε-聚赖氨酸发酵过程中的主要污染微生物,这为后期发酵污染防治提供了一定的指导作用。; 田波陈旭升任喜东毛忠贵; 关键词：链霉菌 ACINETOBACTER

ε-聚赖氨酸提取工艺中活性炭脱色条件研究被引量：4: 2013年; ε-聚赖氨酸(ε-PL)作为一种新型安全高效的生物食品防腐剂,已被用于食品保鲜和防腐领域,因此研究ε-PL提取与精制方法对工业化生产ε-PL具有重要意义。为有效去除ε-PL发酵液中的色素杂质,本文考察了7种不同型号活性炭对ε-PL离子交换洗脱液的脱色效果和ε-PL吸附情况。实验结果表明,活性炭LT-720具有ε-PL吸附量小和色素去除能力强的特性。通过脱色条件的优化,确定LT-720脱色条件为:活性炭用量2%(w/v),脱色温度85℃,pH4.0,脱色时间120min。在该条件下,实现ε-PL回收率达到93.8%,色素去除率为75%;洗脱液外观颜色也由橘红色变成淡黄色。全波长扫描结果显示,LT-720能够有效去除吸收峰在300nm 700nm的色素。上述研究结果为ε-PL产品的进一步纯化提供了参考依据。; 陈旭升艾婷婷甑斌韩岱毛忠贵; 关键词：Ε-聚赖氨酸色素活性炭脱色

链霉菌Streptomyces sp. M-Z18转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸的研究被引量：1: 2013年; 目的:考察不同细胞培养方式对Streptomyces sp.M-Z18转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸过程的影响。方法:利用两阶段细胞培养和发酵过程流加方式,建立了两阶段细胞培养转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸以及转化前体L-赖氨酸耦合甘油发酵生产ε-聚赖氨酸的策略。结果:(1)两阶段细胞培养转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸策略实现ε-PL积累15 g/L,转化L-赖氨酸3 g/L;(2)转化前体L-赖氨酸耦合甘油发酵生产ε-聚赖氨酸策略使得ε-PL产量达到33.76 g/L,单位菌体的合成能力提高37.8%,转化L-赖氨酸4 g/L。这表明,上述两种方式下前体L-赖氨酸都能够被Streptomyces sp.M-Z18转化合成ε-聚赖氨酸,但转化效率还有待进一步提高。意义:揭示了Streptomyces sp.M-Z18合成ε-聚赖氨酸的限速步骤在于初级代谢产物L-赖氨酸的合成,这为后续利用代谢工程手段改造菌株提供了方向。; 陈旭升任喜东曾昕董难毛忠贵; 关键词：L-赖氨酸 Ε-聚赖氨酸生物转化链霉菌 STREPTOMYCES

基于pH调节和有机氮源流加调控补料分批发酵过程提高ε-聚赖氨酸产量被引量：6: 2015年; 为了解决ε-聚赖氨酸(ε-PL)补料分批发酵过程中后期ε-PL产率下降的问题,提出了在补料阶段利用调节p H值和流加有机氮源(酵母粉)两种手段来提高ε-PL产率。利用上述两种策略,实现ε-PL平均产率分别达到4.62 g/(L·d)和5.16 g/(L·d),较未调控补料分批发酵(典型补料分批发酵)分别提高了27.3%和42.15%;同时,实现ε-PL产量分别达到36.95 g/L和41.32 g/L,较未调控补料分批发酵分别提高了27.4%和42.48%。进一步细胞活性染色和关键酶活性分析发现,两种策略均能显著提高细胞活力和关键酶活性。该研究结果表明,在发酵中后期通过调节p H值和流加酵母粉两种措施能够显著增强细胞活性和产生菌代谢能力,从而达到提高ε-PL产率和产量的目的。; 孙启星陈旭升任喜东郑根成毛忠贵; 关键词：Ε-聚赖氨酸细胞活力补料分批发酵

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