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多重实时定量PCR同时检测人全血中大肠杆菌与白念珠菌基因方法的建立: 2015年; 目的建立多重实时定量PCR（MRQ—PCR）同时快速检测血中大肠杆菌与白念珠菌DNA的方法，以评估肠屏障损伤可能导致的移位微生物的种类和程度并提供针对性用药的建议。方法选择大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因作为检测大肠杆菌的靶基因设计引物和探针，选择白念珠菌ITS2基因设计引物和探针。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit试剂盒提取大肠杆菌与白念珠菌基因组DNA；建立25μlTaqMan探针MRQ-PCR反应体系；对18份模拟血标本及10份外科发热患者临床标本进行MRQ—PCR检测。结果引物和探针特异性好，大肠杆菌与白念珠菌标准曲线相关系数分别在0．994—0．999和0．994～0．998，扩增效率分别为0．894～1．022和0．905～1．028。标准样品检测限分别为大肠杆菌13．9拷贝／μl和白念珠菌0．8cfu／μl，两种菌的检测灵敏度分别为100％和99．69％，特异度分别为100％和94．73％，标准品中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为（101．89±5．69）％和（103．74±4．64）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（13．14±10．27）％和（19．18±8．54）％，批间变异系数分别为（14．35±9．34）％和（18．31±10．25）％。全血标本中大肠杆菌与白念珠菌特异基因的检出限分别为12455．2拷贝／ml和800．3cfu／ml，平均回收率分别为（111．60±11．06）％和（99．96±6．16）％，两种菌基因检测的批内变异系数分别为（11．02±5．65）％和（8．14±7．29）％，平均批间变异系数分别为（12．88±7．59）％和（18．62±9．14）％。结论多重实时定量PCR可以同时快速、灵敏、特异地定量检测人全血标本中大肠杆菌与白念珠菌基因，准确度高、重复性好、节省血标本用量及检测成本、总检测时间缩短，在临床全血标本的真菌与细菌快速鉴别检测、抗微生物药物的针对性应用及疗效评估、肠屏障�; 房嘉宾康军仁马恩陵郭广亮崔希增; 关键词：大肠杆菌白念珠菌全血

肠内营养中碳水化合物及脂肪比例对糖尿病患者血糖及感染率的影响:Meta-分析被引量：1: 2003年; 目的评价肠内营养中不同碳水化合物及脂肪比例对糖尿病患者血糖及感染率的影响。方法检索中国生物医学文献数据库、Cochrane图书馆、Medline光盘数据库,鉴定有关随机对照试验(randomized clinical trial,RCT),采用RevMan4.1统计软件进行Meta-分析。结果纳入4个符合入选标准的研究,比较含不同碳水化合物及脂肪比例的肠内营养(EN)对糖尿病患者血糖及感染率的影响。低碳水化合物高脂肪的EN比高碳水化合物低脂肪的EN,对应激状态糖尿病患者血糖影响的加权均数差值(weighted mean difference,WMD)为-1.47,95％CI为[-3.22,0.27],P=0.10;对感染率影响的相对危险度(Relative Risk,RR)为0.90,95％CI为[0.59,1.39],P=0.60。结论糖尿病患者(尤其在应激状态下)接受低碳水化合物高脂肪的EN(糖尿病适用型)后,血糖较接受高碳水化合物低脂肪普通En的患者有降低倾向;感染率虽有下降趋势,但无统计学差异。; 马恩陵江华王秀荣蒋朱明; 关键词：血糖感染率肠内营养

实时定量PCR在细菌移位研究中的潜力被引量：6: 2006年; 实时定量PCR(RQPCR)是一种新型核酸定量技术,具有实时监测、快速、灵敏、精确、特异等特点。与原有PCR技术相比,其最主要的优势是能对待测样本起始PCR反应模板进行准确定量,扩大了PCR的应用范围。目前在细菌移位研究中,对肠黏膜屏障损伤的早期诊断一直没有很理想的方法。RQPCR能准确定量外周血中细菌DNA,有利于对肠黏膜屏障损伤的早期诊断和损伤程度评估。; 李云玖马恩陵张立阳; 关键词：实时定量PCR 细菌移位肠屏障

肠黏膜屏障的研究进展被引量：2: 2006年; 胃肠黏膜固有屏障正常稳态的维持,对于防止胃肠腔内细菌、食物抗原、酶和化学药物等直接与黏膜裸露面接触引起的相关疾病至关重要。本文就胃肠黏膜固有屏障的关键结构、成分和功能、调节因素等方面研究进展予以综述。; 温泉马恩陵; 关键词：粘膜屏障细胞因子三叶肽

不同置放途径中心静脉导管的临床效果研究被引量：11: 2003年; 目的对比两种经不同途径置放中心静脉导管的临床效果及并发症。方法选择需长期输液治疗的患者80例,分为A、B两组,每组各40例。A组应用双腔或单腔中心静脉导管(美国Arrow公司)经锁骨下静脉穿刺至上腔静脉置管,B组应用“经外周静脉置入中心静脉导管”(美国B-D公司PeripherallyInsertedCentralCatheter,简称PICC)经外周静脉置入中心静脉,观察2组置管成功率、流速及导管相关并发症30天。结果置管成功率相近(P=0.5562):PICC导管置管成功97.5%(39例);锁骨下静脉穿刺成功100%(40例)。导管堵塞率有明显差别(P=0.0231):PICC9例(22.5%),锁骨下静脉穿刺2例(5%)。锁骨下静脉置管流速明显快于PICC(P=0.0001)。其他导管相关并发症两组无明显差异(P=0.1521～0.5562)。气、血胸并发症:PICC未发生,锁骨下静脉穿刺1例(2.5%)。动脉损伤:PICC未发生,锁骨下静脉穿刺1例(2.5%)。导管易位:PICC2例(5%),锁骨下静脉穿刺1例(2.5%)。静脉炎:PICC2例(5%),锁骨下静脉穿刺未发生。导管感染:PICC未发生,锁骨下静脉穿刺2例(5%)。大多数PICC置管可由护士完成,而锁骨下静脉置管全部由医师操作。结论经锁骨下静脉置入的中心静脉导管流速大,是抢救危重患者的首选导管。PICC导管穿刺更安全、易推广;导管堵塞或感染后,能进行原地置换;是长期输?; 王秀荣马恩陵郭惠琴; 关键词：并发症双腔中心静脉导管经外周静脉置入中心静脉导管

实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法被引量：22: 2006年; 目的建立实时定量PCR(RQPCR)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurePCRTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQPCR反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQPCR检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQPCR是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。; 李云玖马恩陵廉东波张立阳王秀荣何桂珍蒋朱明; 关键词：实时定量PCR 肠黏膜屏障发热体液

实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性被引量：3: 2006年; 目的建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0．5麦氏单位，采用不加抗生素的标本作为生长对照组，加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组，37℃震荡培养，分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA，以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针，对标本进行实时定量PCR检测。结果实时定量PCR方法有较好的重复性（CT值变异系数0．26％～1．56％）和精确度（大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43．6％，在血中为26．7％），标准曲线线性关系好（R^2≥0．998）。培养1～3小时后，耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长，在LB液体培养基中增至约19～120倍，在新鲜全血中增至约6～11倍；敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势，在LB液体培养基中减至0．22～0．12倍，在新鲜全血中为1．29～0．14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。; 马恩陵廉东波李云玖张立阳谢秀丽徐英春蒋朱明; 关键词：实时定量PCR 大肠埃希菌

外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA实时定量PCR检测与体征及血细胞计数的相关性被引量：2: 2006年; 目的定量检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA含量，研究其与体征及皿细胞计数之间的相关性，并比较不同检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异。方法以实时定量PCR（RQ-PCR）定量检测40份健康人静脉血标本，确定临床阳性检测限。31例发热患者共72份血标本同时进行常规细菌培养及大肠埃希菌DNA定量检测，比较两种检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异，两个取血时间点间大肠埃希菌DNA含量的变化，并计算大肠埃希菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间的相关性。结果 RQ-PCR定量检测大肠埃希菌DNA阳性率为52．78％（38／72），显著高于细菌培养阳性率2．78％（2／72）（P=0．000）。同一患者两个时间点血标本检测结果显示，静脉血中大肠埃希菌DNA在2～6小时内的升降变化达10～20倍。血中大肠埃希菌DNA含量与体温和心率之间均显著相关（P=0．000），相关程度中度密切（，值分别为0．565和0．546），与白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间无显著相关关系。结论 RQ-PCR检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌阳性率远高于血培养。血中大肠埃希菌DNA拷贝数变化速度较快。血细胞计数不能很好反映血中大肠埃希菌的含量，而体温心率的影响因素较多，因此RQ-PCR能更及时准确反映大肠埃希菌血症的严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行评估。; 马恩陵李云玖廉东波张立阳康军仁王秀荣蒋朱明; 关键词：大肠埃希菌 DNA 肠黏膜屏障发热

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