国家自然科学基金(90606007)
- 作品数：12 被引量：32H指数：3
- 相关作者：滕皋军麦筱莉陈骏马占龙张宇更多>>
- 相关机构：东南大学徐州医学院第二附属医院南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金东南大学优秀博士学位论文基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内皮祖细胞种植支架在经颈静脉肝内门体分流术中应用的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的评价内皮祖细胞（EPC）种植支架在经颈静脉肝内门腔分流（TIPS）家猪动物模型中减少分流道再狭窄的疗效。方法体外分离、培养、鉴定家猪外周血内皮祖细胞，并构建内皮祖细胞种植支架。15头家猪行TIPS介入手术，采用随机区组设计分为EPC种植支架组9头（实验组），裸支架组6头（对照组）。术后14d行直接门静脉造影，然后处死动物，作病理分析及免疫组织化学检查，记录分流道狭窄及阻塞率，并用图像处理软件计算TIPS分流道假性内膜厚度及面积。计数资料用Fisher精确概率法，计量资料行t检验，作统计学分析。结果15头猪TIPS手术均成功。实验组分流道通畅5头，狭窄2头（狭窄率50％、70％），阻塞2头（共9头）。对照组狭窄1头（狭窄率80％），阻塞5头（共6头）。2组通畅率差异有统计学意义（P=0．03）。实验组假性内膜增生的厚度（肝静脉、肝实质、门静脉段）显著小于对照组[分别为（1．0±0．6）、（0．9±0．5）、（1．0±0．4）mm和（1．2±0．4）、（1．3±0．5）、（1．5±0．4）mm，P值均〈0．05]。免疫组织化学显示实验组中通畅的分流道有完整的内皮形成；再狭窄分流道的假性内膜主要由胶原纤维组成，而通畅分流道的假性内膜主要由细胞成分组成。结论体外构建EPC种植支架是可行的，置入后促进了家猪模型TIPS分流道内皮化形成，可以提高分流道的通畅性。
- 石红建滕皋军曹爱红陈骏邓钢
- 关键词：门体分流术干细胞
- 小鼠脾源性内皮祖细胞培养及7．0T磁共振单细胞成像初探被引量：2
- 2010年
- 目的建立一种小鼠脾源性内皮祖细胞的培养方法，探讨7．0T磁共振（7．0TMR）系统对磁标记单细胞成像的可行性。方法密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞，诱导培养得到内皮祖细胞（EPC）。免疫化学、荧光染色鉴定细胞特性。Fe2O3-PLL标记细胞，普鲁士蓝染色，MTT法评价Fe2O3-PLL对细胞生长的影响，邻菲哕啉法定量分析细胞内铁含量。7．0TMR不同序列体外单细胞成像。结果小鼠脾脏单个核细胞经体外诱导培养呈内皮细胞形态，表达EPC表面标志物CD31、CD34、vWF，显示内吞乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）、结合凝集素1（UEA-1）等内皮细胞的功能。MTT检测Fe2O3-PLL标记对细胞增殖活力影响不明显，标记组与未标记组吸光度（A）值比较第4天至第7天差异均无统计学意义（第4天，t=2．81；第5天，t=-1．87；第6天，t=-0．298；第7天，t=-0．115；P均〉0．05）。磁标记单细胞能够在7．0TMR检测中成像，自旋回波序列（MSME）图像中标记细胞显示灰度高于梯度回波序列（2D-FLASH），MSME序列图像标记细胞平均导致信号缺失体素个数为20．2个，而2D—FLASH序列图像为30．1个，差异具有统计学意义（t=15．2，P〈0．05）。结论小鼠脾脏单个核细胞可诱导分化为EPC。在7．0TMR检测中Fe2O3-PLL标记的EPC能够实现体外单细胞成像。
- 贾振宇陈骏滕皋军
- 关键词：干细胞细胞培养技术磁共振成像
- 血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的MRI实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的通过动物实验，探讨血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的可行性。方法分离、鉴定并培养新西兰大白兔外周磁粒子标记血管内皮祖细胞（EPCs），制备氧化铁（Fe2O3）-多聚左旋赖氨酸（PLL）并体外标记EPCs。用2．5F球囊扩张并损伤兔右侧颈动脉血管内皮，对损伤血管进行局部EPCs移植，A组8只，移植Fe：O，-PLL标记的EPCs；B组3只，移植荧光标记的EPCs；C组5只为空白对照，局部注射生理盐水。细胞移植后4d，所有实验兔用1．5TMR仪进行活体颈动脉扫描，并任意选A、B、C组各1只，取受损伤血管做病理组织学检查，并与MRI信号变化进行对比分析，其余所有实验兔继续高脂饲料喂养，15周后对损伤血管做MR及病理组织学检查。结果EPCs的Fe2O3-PLL标记率〉95％，A组标记细胞移植后4d，MR T2·WI显示损伤血管壁呈明显低信号区，而B组和C组无明显异常信号改变；病理学检测显示A组损伤血管内膜有普鲁士蓝染色阳性细胞黏附，B组损伤血管内皮有强荧光表达，C组损伤血管内皮无表达。15周后，A、B组动脉粥样硬化形成（3／9）明显低于C组（4／4）。结论活体MR技术可示踪并检测EPCs在损伤血管内皮的黏附及分布；血管内皮祖细胞局部移植可预防动脉粥样硬化的形成。
- 马占龙滕皋军麦筱莉陈骏孙军辉张洪英余辉李国昭
- 关键词：内皮内皮细胞动脉硬化细胞移植
- 兔颈动脉粥样硬化模型的构建及MR成像的初步实验被引量：2
- 2009年
- 目的:联合高脂饮食及球囊扩张右侧颈动脉制作新西兰兔动脉粥样硬化模型,应用磁共振动态观测动脉粥样硬化形成过程。方法:高脂饮食联合球囊扩张右侧颈动脉制作新西兰兔动脉粥样硬化模型,于球囊扩张前及扩张后2、4、8和12周取静脉血检测血脂改变情况;行颈部MR成像,观察并记录颈动脉血管壁及管腔的变化情况,测量颈部血管的对比度噪声比(CNR)及血管腔内信噪比(SNR),同时行颈动脉病理学检查。结果:高脂饮食后第2、4、8和12周血浆胆固醇、甘油三酯水平呈进行性增加;MRI显示高脂喂养后4周(球囊扩张后3周)可见血管壁增厚,差异具有统计学意义(P<0.001),高脂喂养8周后可见血管腔狭窄,差异有统计学意义(P<0.05);增厚的血管壁于各成像序列上均呈不均匀高信号,颈部CNR测量结果显示,质子密度加权像(PDWI)的CNR最高,最利于颈部血管的显示;血管腔内的SNR测量结果亦显示PDWI的SNR最高,成像质量最好。病理学检测示高脂喂养、球囊损伤后内膜破坏、血管平滑肌增厚,第12周可见典型的粥样斑块形成。结论:高脂饮食加球囊扩张可成功制作兔动脉粥样硬化损伤模型,临床应用型1.5T MRI可动态观察这一病理过程,与病理检测结果有很好的相关性。
- 麦筱莉滕皋军朱斌陈骏朱光宇李国昭
- 关键词：动脉粥样硬化颈动脉动物磁共振成像
- 磁性氧化铁纳米颗粒与脂质体介导EGFP基因转染内皮祖细胞的比较研究被引量：1
- 2008年
- 目的评价精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(nano-Fe2O3-arginine)及脂质体作为基因载体在针对外周血来源的内皮祖细胞转染中的可行性,并对两者的转染效率进行比较。方法将nano-Fe2O3-arginine及LipofectamineTM2000作为基因载体连接绿色荧光蛋白pcDNA3.1(+)/EGFP质粒在体外转染兔外周血来源的内皮祖细胞,荧光显微镜观察转染结果并计算转染效率;转染后48h采用MTT比色法测定这两种载体对内皮祖细胞增殖和功能的影响以了解其细胞毒性。结果LipofectamineTM2000作为基因载体将报告基因转染至兔外周血内皮祖细胞内并成功表达,用荧光显微镜可观察到发绿色荧光的细胞,转染效率达38.3%;而nano-Fe2O3-arginine转染组在荧光显微镜仅能观察到少量绿色荧光细胞,转染效率不到5%;两种载体对内皮祖细胞的增殖活性未见明显影响。结论脂质体作为载体转染内皮祖细胞的效率明显高于精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒,脂质体可较为有效安全地转染基因至内皮祖细胞,从而为内皮祖细胞联合基因治疗疾病奠定了基础。
- 聂芳滕皋军张宇葛玉卿
- 关键词：超顺磁性氧化铁脂质体内皮祖细胞基因载体绿色荧光蛋白
- 外周血内皮祖细胞磁探针标记及体外磁共振成像的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的应用纳米磁探针三氧化二铁（Fe2O3）-多聚赖氨酸（PLL）复合物体外标记兔外周血内皮祖细胞（EPCs），磁共振（MR）对标记细胞成像。方法合成Fe2O3-PLL复合物。分离兔外周血单个核细胞，贴壁法筛选出EPCs，传代培养，Fe2O3-PLL标记祖细胞，普鲁士蓝染色、电子显微镜显示细胞内铁，四氮噻唑蓝（MTT）比色试验评价不同浓度Fe2O3-PLL标记EPCs后对细胞生长状况的影响，流式细胞分析检测标记、未标记细胞的细胞周期、细胞凋亡，应用MR的不同序列进行细胞群成像。结果普鲁士蓝染色、电镜观察均可见铁颗粒位于细胞质内，标记率接近100％，MTT比色试验示10μg／ml至200μg／ml7个铁浓度组，Fe2O3-PLL标记后细胞的光吸收值与未标记者比较，差异无统计学意义，流式细胞分析结果显示Fe2O3-PLL标记后细胞周期、细胞凋亡与未标记细胞间差异无统计学意义。磁共振成像（MRI）显示标记Fe2O3-PLL的细胞群较未标记者信号降低，以T2^＋加权像（FWI）信号强度变化率最大；标记后7d的信号强度变化率均较标记1d者下降。结论Fe2O3-PLL可以有效标记兔外周血EPCs，其对细胞的活力、增殖等生物学特性无明显影响。临床应用型1．5TMR可在体外进行标记细胞群成像，间接反映于细胞的数量和分裂增殖状态。
- 麦筱莉滕皋军马占龙孙军辉张宇顾宁
- 关键词：单个核细胞内皮祖细胞磁共振成像
- 磁探针标记人内皮型一氧化氮合酶基因修饰的内皮祖细胞及其体外磁共振成像实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的人内皮型一氧化氮合酶（heNOS）基因体外修饰兔外周血来源的内皮祖细胞（EPC）后，应用纳米磁探针三氧化二铁（Fe2O3）一精氨酸（arginine）复合物体外标记基因修饰的EPC，磁共振（MR）进行标记细胞成像。方法制备Fe2O3-arginine复合物。分离兔外周血单个核细胞，贴壁法筛选出EPC，传代培养，用脂质体Lipofectamine^TM 2000体外转染heNOS基因至EPC，转染后48h对基因修饰EPC进行磁探针标记，普鲁士蓝染色显示细胞内铁，Western blot检测heNOS基因表达情况，四氮噻唑蓝（MTT）比色试验评价磁探针标记基因修饰EPC后对细胞生长状况的影响，流式细胞分析检测标记、未标记细胞的凋亡，应用磁共振的T，W、T2WI、T2 WI3个序列进行细胞群成像。结果普鲁士蓝染色可见铁颗粒位于细胞质内，标记率与标记的未修饰基因组EPC相似，都接近100％。MTT比色试验示Fe2O3-arginine标记后第3、4、5天，标记的基因修饰细胞组、未修饰基因细胞组的吸光度值与未标记者比较，差异无统计学意义。流式细胞分析结果显示Fe2O3-arginine标记后细胞凋亡与未标记细胞间差异无统计学意义。磁共振成像显示标记的基因修饰细胞群信号强度的变化与标记的未修饰基因细胞相似，两者之间差异无统计学意义，且两者均较未标记细胞群信号低，以T2WI的信号强度变化率最大，标记后7d的信号强度变化率均较标记后1d者下降。结论使用脂质体可以成功地将外源heNOS基因转染进兔外周血EPC中并在某中有效表达，Fe2O3-arginine可以有效标记heNOS基因修饰的EPC，其对细胞的活力、增殖等生物学特性无明显影响。临床应用型1．5TMR可在体外进行标记细胞群成像，间接反映干细胞的数量和分裂增殖状态。
- 聂芳麦筱莉陈骏顾宁石红建曹爱红葛玉卿张宇滕皋军
- 关键词：内皮祖细胞基因转染磁共振成像
- 纳米磁粒子复合物标记对内皮祖细胞生物学特性影响的实验研究被引量：6
- 2008年
- 目的探讨超顺磁性纳米磁粒子复合物Fe2O3-多聚赖氨酸（PLL）标记外周血内皮祖细胞（EPCs）后对细胞生物学特性的影响，为标记细胞的体内外MRI提供实验基础。方法合成Fe2O3-PLL复合物。分离兔外周血单个核细胞，贴壁法筛选出EPCs，25mg／L的Fe2O3-PLL标记EPCs，普鲁士蓝染色、电子显微镜观察细胞内铁，四氮噻唑蓝（MTT）比色试验比较未标记、标记细胞间生长曲线的差异，流式细胞分析检测标记、未标记细胞的细胞周期变化、细胞凋亡、表面标记物表达情况，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测标记、未标记细胞的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、KDR、血管性假血友病因子（vWF）基因在mRNA水平上的差异，激光共聚焦显微镜下观察并分析标记、未标记细胞的Ca^2＋浓度、膜流动性变化。实验所得数据，计量资料多组比较采用方差分析，两组间比较采用两样本t检验。结果Fe2O3-PLL对细胞的标记率接近100％，铁颗粒位于细胞质内。25mg／LFe2O3-PLL标记细胞，其生长曲线、细胞周期[G0—G1期为（93.74±3，52）％]、细胞凋亡[早期凋亡率为（12．89±1．81）％]与未标记细胞[细胞周期为（94．57±3．66）％，细胞凋亡率（11．67±1.18）％]相比，差异无统计学意义（t值分别为0．283、0．977、P值均〉0．05）；eNOS、KDR、vWF基因的相对表达量及CD34、CD106、CD146、KDR等细胞表面标记物的表达水平相比差异也无统计学意义（P值均〉0，05）；对Ca^2＋通道影响小，细胞膜流动性无明显变化。结论25mg／L的Fe2O3-PLL对兔外周血EPCs的标记率接近100％，并且对细胞的生物学特性无明显影响，可用于进一步MRI的研究。
- 麦筱莉滕皋军马占龙孙军辉张宇顾宁
- 关键词：干细胞免疫酶技术动物
