国家自然科学基金(30972177)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 喜树碱对NIH／3T3细胞TLR3表达及活化的影响
- 2012年
- 为研究喜树碱(CPT)对小鼠成纤维细胞NIH/3T3中Toll样受体3(TLR3)的表达及活化的影响,本实验利用CCK-8试剂盒测定了CPT在不同浓度下、不同作用时间对NIH/3T3细胞的毒性作用,并确定CPT对NIH/3T3细胞的基本无毒浓度为1μg/mL。通过流式细胞术检测CPT作用NIH/3T3细胞表明,TLR3平均荧光强度与对照组相比显著增强,表明TLR3表达增加。此外,ELISA试剂盒检测结果显示CPT作用后IFN-β表达量增加,并高于阳性对照组,差异极显著(p<0.01)。本研究表明CPT对NIH/3T3细胞的TLR3具有显著的激动作用。
- 刘学张馨月吴秀萍白雪李慧萍郭恒孙树民王学林刘明远
- 关键词：喜树碱激动剂
- 旋毛虫A200711蛋白的原核表达、纯化及其对H7402细胞增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的原核表达旋毛虫抗肿瘤基因A200711,并纯化该蛋白,CCK-8检测其对H7402人肝癌细胞的生长抑制作用。方法 PCR获得A200711基因片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-A200711,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)。SDS-PAGE及Western blot检测IPTG诱导后重组菌,采用Ni-NTA亲合层析柱纯化并柱上复性目的蛋白。细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测A200711蛋白对H7402细胞的生长抑制作用。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-A200711,目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE及Western blot分析显示,相对分子量约22KD处出现目的蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲合层析柱获得了高纯度可溶性的A200711蛋白;H7402细胞增殖抑制率与A200711蛋白浓度存在量效关系,同时随作用时间的延长增殖抑制率也明显增加。结论成功克隆、表达并纯化了旋毛虫A200711蛋白。A200711蛋白可抑制H7402细胞的增殖,且呈现时效和量效关系,本研究表明旋毛虫A200711蛋白作为潜在的抗肝癌生物制剂有进一步研究的价值。
- 李慧萍刘学张馨月郭恒赵丽晶刘攀孙树民褚丽新刘娟刘明远王学林
- 关键词：旋毛虫抗肿瘤原核表达
