国家自然科学基金(30471Z95)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 重组虎源H5N1流感病毒HA基因犬2型腺病毒的构建与实验免疫研究被引量：1
- 2006年
- H5N1流感病毒可以对虎和猫产生致死性感染，为研制可用于预防猫科动物流感的新型疫苗，构建了重组虎源H5N1流感病毒HA基因的犬2型腺病毒。将A／Tiger／Harbin/01／2003（H5N1）的HA基因克隆人pVAX1载体中，然后将含有HA基因的表达盒（CMV＋HA＋PolyA）克隆人pVAXAE3的SSPⅠ酶切缺失处，获得含有HA表达盒的穿梭载体pAEHA。用SalⅠ＋NruⅠ分别对pAEHA和pPoly-2-CAV2进行双酶切，将含有HA表达盒的SalⅠ＋NruⅠ片段克隆人pPoly2-CA V2，获得了在E3区缺失处插入HA表达盒的重组质粒pCAV-2／HA。释放CAV-2／HA重组基因组转染MDCK细胞，获得了重组活病毒CAV2／HA，经Western blot分析表明重组表达产物可被流感病毒HA单克隆抗体3A13所识别。使用该重组病毒免疫猫可以产生效价为1：8—1：16的抗H5亚型流感病毒血凝抑制抗体。
- 高玉伟夏咸柱王立刚刘丹黄耕
- 关键词：HPAIV血凝素基因犬2型腺病毒
- 虎源高致病性禽流感病毒H5N1在实验小鼠体内分布与含量测定被引量：4
- 2006年
- 将本实验室分离、鉴定的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株第3代鸡胚尿囊液进行10-3倍稀释,接种小鼠,待小鼠死亡后无菌采取心、肝、脾、肺、肾、脑六种脏器分别研磨制成乳剂,接种MDCK细胞,以细胞病变为判定指标,计算病死小鼠不同脏器内病毒含量。同时用RT-PCR、血凝-血凝抑制试验以及电镜负染的方法进行鉴定和观察。结果显示,可在小鼠的肺脏、肝脏、肾脏、脑组织中检出所接种的病毒,肺脏中的病毒含量最高,脑中的病毒含量次之,肝脏和肾脏中的病毒含量最少。可在肺、肝、肾、脑组织与感染细胞培养物中扩增出与理论值一致的核酸条带,肺乳剂上清液感染细胞培养物中可检出1∶23的血凝效价,电镜观察在肺乳剂上清液及其感染细胞培养物中可见到典型的流感病毒颗粒。
- 常爽郑晓一杨松涛邹啸环丁壮夏咸柱
- 关键词：小鼠
- 高致病性禽流感病毒人工感染小鼠组织病理学研究
- 本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger／Harbin／01／2003 (H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36／0．05ml,经气管接种人工感染小鼠,对感染致死的小鼠和对照...
- 常爽丁壮杨松涛高玉伟王承宇邹啸环王铁城夏咸柱
- 关键词：小鼠组织病理学免疫组织化学
- 文献传递
- 虎源流感病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用研究
- 2006年
- 为临床上能快速诊断虎流感,通过对已分离获得的虎源H5N1流感病毒和GenBank中报道的A型H5N1亚型流感病毒的NP、HA、NA序列,设计合成各个基因的特异性PCR扩增引物和A型流感病毒通用反转录引物。通过优化反应体系及条件,建立一步法可同时扩增出3个基因的联合RT-PCR检测方法。将该方法用于临床病料检测,并与电镜负染、HA/HI及病毒分离等方法进行比较。结果,NP、HA、NA基因的扩增片段大小分别为464bp、581bp、173bp,其检测的敏感性约100个TCID50。该方法的检出率和病毒分离结果相符,高于电镜负染和HA/HI试验。结果显示,该方法可用于虎源流感病毒的临床或实验室检测。
- 贺文琦高玉伟夏咸柱杨松涛王立刚刘丹
- 关键词：H5N1RT-PCR
- 虎源流感病毒HA基因的系统发生分析及其在杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2006年
- 通过对虎源流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)的HA基因进行克隆与序列测定,证明该基因全长为1731bp,读码框由1707个碱基组成,编码568个氨基酸。对HA基因的进化分析表明,该基因与H5亚型流感病毒的HA基因同源性最高,其HA裂解位点由6个碱性氨基酸插入序列(RRRKKR)组成,符合高致病性禽流感病毒的分子特征。将HA基因克隆入杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ,构建重组质粒pFastBacHA;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒BacmidHA;将BacmidHA转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。经Westernblotting检测,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。用感染重组病毒的sf9细胞免疫小鼠,2次免疫后2周可诱导小鼠产生1∶8～1∶16的血凝抑制抗体,表明虎源流感病毒的HA基因在重组杆状病毒系统中得到了正确表达。
- 高玉伟夏咸柱侯小强鞠会艳王承宇王铁成黄耕邹啸环
- 关键词：流感病毒HA基因重组杆状病毒
- 虎源H5N1亚型高致病性禽流感病毒人工感染家猫的病理学研究被引量：2
- 2007年
- 经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36/0.05 mL,经气管接种途径人工感染家猫,对感染致死的家猫和对照组家猫心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器进行组织病理学观察和免疫组织化学染色,同时采集咽拭子和各脏器乳剂上清液进行RT-PCR检测,对耐过家猫与对照组家猫进行HI抗体测定。结果表明:剖检感染的死亡家猫以肺脏的损害最为明显,肺叶上有大片暗红色实变灶,呈多病灶融合性肺损伤。组织学光镜观察,病毒对家猫的损害主要见于肺脏,呈融合性炎性病变,浸润的主要为单核细胞,肺泡腔内可见较多量巨噬细胞浸润及少量蛋白样浆液渗出。免疫组织化学染色发现在支气管上皮细胞、少数肺泡上皮细胞和单核细胞胞浆中可见到该病毒的抗原阳性染色颗粒。RT-PCR检测结果在咽拭子以及肺、肾、心、脑组织中均扩出与理论值一致的464bp核酸条带,耐过家猫血清H5N1亚型流感病毒HI抗体效价为1∶32。
- 常爽丁壮杨松涛高玉伟邹啸环王铁成夏咸柱
- 关键词：家猫组织病理学
