广西省自然科学基金(0728047)
- 作品数：17 被引量：65H指数：7
- 相关作者：施开创屈素洁郑敏李军李向涛更多>>
- 相关机构：广西动物疫病预防控制中心广西大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金广西科技创新能力与条件建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 猪脑心肌炎病毒感染对iNOS mRNA转录水平的影响
- 2012年
- 为研究iNOS在猪脑心肌炎病毒(EMCV)致病机制中的作用,本研究将猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠、仔猪,观察临床症状和病理变化,检测心、脑组织中iNOS mRNA转录水平。试验结果表明,小鼠和仔猪感染EMCV后均出现明显的临床症状、剖检及组织病理学变化显示心、脑组织的病理炎症分值显著增加;心、脑组织中的iNOS mRNA转录水平显著上调,并且转录水平上调的峰值与感染小鼠、仔猪出现明显临床症状、严重病理损害及小鼠死亡高峰存在明显的时间相关性,与心、脑组织的病理炎症分值成线性正相关。表明组织中iNOS的过量表达与感染动物的发病和死亡密切相关,iNOS在EMCV致病机制中发挥重要作用。
- 施开创覃芳芸陆文俊屈素洁黄胜斌李军
- 关键词：脑心肌炎病毒INOS致病机制
- 外加营养源对氯氰菊酯降解菌GF31降解特性的影响被引量：4
- 2009年
- 利用本实验室保存的一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)GF31,考察了外加不同的碳、氮源对菌株降解氯氰菊酯特性的影响。实验结果表明:适量浓度的碳、氮源对降解有明显的刺激作用,外加碳源中葡萄糖的刺激作用最为明显,外加0.8g/L的葡萄糖,氯氰菊酯降解率提高了13.7%;外加氮源中以蛋白胨对微生物的促进作用最突出,当外加5.0g/L蛋白胨时,氯氰菊酯降解率从27.5%提高到70.0%;降解5d后,氯氰菊酯的降解已基本趋于平衡。
- 周茂钟刘幽燕李青云卢清光钟善锦曹红军
- 关键词：营养源农药氯氰菊酯生物降解
- 猪脑心肌炎病毒GXLC株的分离及其3D基因分子特征的分析被引量：7
- 2011年
- 采集临床疑似脑心肌炎死亡仔猪的组织作为接种材料,接种于BHK-21细胞系,观察细胞病变（CPE）,并用RT-PCR和间接荧光抗体试验（IFA）进行鉴定,证实分离到1株脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）,命名为GXLC株。应用RT-PCR方法扩增GXLC株的3D基因,扩增产物克隆入pMD18-T载体后进行测序,对获得的3D基因序列进行分析。序列分析结果表明,GXLC株3D基因全长1380 nt,编码460个氨基酸,含有7个抗原表位。同源性分析结果表明,GXLC株与国内外其它EMCV分离株3D基因核苷酸序列的同源性在84.7%~99.7%之间,氨基酸序列的同源性在96.1%~99.6%之间。遗传进化分析结果表明,基于3D基因核苷酸序列绘制的系统进化树可将所有EMCV分离株分成2个群：Ⅰ群和Ⅱ群,Ⅰ群可再细分为Ⅰa亚群和Ⅰb亚群,其中猪源EMCV在Ⅰ群和Ⅱ群中均有分布,而鼠源EMCV分布在Ⅰ群,人源EMCV分布在Ⅱ群;GXLC株与其它中国分离株均属于Ⅰa亚群。
- 陈进喜施开创黄胜斌陆文俊屈素洁郑敏李军
- 关键词：脑心肌炎病毒3D基因分子特征
- 一株产碱杆菌DN25中降氰酶的提取和特性研究被引量：7
- 2008年
- 从实验室自行保藏的一株高效降氰菌株——产碱杆菌Alcaligenes sp.DN25中提取降氰酶,并研究其降解特性。通过分别测定胞内酶、胞外酶和细胞碎片对氰化物的降解率,初步判断该菌株降氰酶主要分布在细胞内。所提取的降氰酶具有较好的保存稳定性和pH稳定性,降解最适条件为温度35℃、pH7.0,并测得该降氰酶的米氏常数Km和最大反应速率分别为267.8mg/L和6.71mg/(L·min)。检测出该酶降解氰化物的产物之一为NH3,降解完全;尿素对酶活有抑制作用,初步可断定此酶中存在氰水合酶。
- 刘幽燕鄢恒宇李青云覃益民许露钟善锦苏小茜
- 关键词：酶提取
- 猪促炎细胞因子多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2012年
- 为建立及应用定量检测猪促炎细胞因子mRNA表达水平的方法,从分子水平研究脑心肌炎病毒(EMCV)的致病机制,分别构建含有猪促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及管家基因β-actin基因片段的重组质粒标准品,建立了检测IL-1β/β-actin、IL-6/β-actin、TNF-α/β-actin的多重TaqMan real-time PCR检测方法。标准曲线的相关系数均达到0.998以上;初始模板的检出下限均达到10拷贝/μL;只有以目标cDNA为模板,并加入特异性引物和探针的反应才能检测到荧光信号;组内与组间的变异系数均小于2%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株感染仔猪心肌中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达水平进行检测。结果表明,所建立的多重TaqMan real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于猪IL-1β、IL-6、TNF-α基因的检测及定量分析。
- 施开创梁媛陈芳芳屈素洁莫胜兰李军
- 关键词：促炎细胞因子脑心肌炎病毒TAQMAN探针
- 猪脑心肌炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：12
- 2011年
- 为了建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)的检测方法,根据GenBank中EMCV 3D基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了该病毒的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。该方法线性关系好,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数达到0.998;敏感性高,检测下限为10copies/μL,比普通PCR敏感100倍;特异性强,只有EMCV呈阳性,而与猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、BHK-21正常细胞均无交叉反应;重复性好,组内与组间的变异系数均小于1.5%。应用所建立的检测方法,对猪源EMCV GXLC株人工感染小鼠的脑、心、脾中的病毒载量进行了检测,同时对临床采集的153份可疑病料进行了检测。结果表明,本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的检测及定量分析。
- 施开创陈宏备覃芳芸李向涛胡杰郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒TAQMAN探针
- 猪脑心肌炎病毒SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立
- 针对猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)VP1基因序列设计并合成一对引物,构建含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green I re...
- 施开创陈进喜屈素洁许瑞胜熊毅刘棋陈汉忠李刚
- 关键词：脑心肌炎病毒荧光定量PCR
- 文献传递
- 小鼠IL-1β、TNF-α TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及脑心肌炎病毒感染小鼠的检测被引量：7
- 2011年
- 为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深入研究EMCV的致病机制,本研究分别建立了检测小鼠IL-1β、TNF-α和管家基因β-actin 的 TaqMan real-time PCR 检测方法。该方法标准曲线的相关系数均达到0.998以上,检出下限均达到10copies/μL质粒标准品,组内与组间的变异系数均小于2%。应用该方法对猪源 EMCV GXLC 株人工感染小鼠的脑、心、脾中IL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平进行检测,发现感染后第4dIL-1β、TNF-α mRNA 的转录水平达到峰值,并且与小鼠发病死亡高峰存在明显的时间相关性。本研究所建立的TaqMan real-time PCR 检测方法为小鼠促炎细胞因子的检测及定量分析提供了技术手段。
- 陈宏备施开创李向涛郑敏郑喜邦李军
- 关键词：脑心肌炎病毒小鼠促炎细胞因子荧光定量RT-PCR
- 公猪精液CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV的PCR检测被引量：8
- 2008年
- 应用PCR技术对采自广西6市12个种猪场的441头(份)公猪精液进行CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV的带毒情况检测,结果有75%的猪场公猪精液存在带毒现象,被CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV和PPV污染的精液样品阳性率分别为10.20%、2.04%、7.48%、0.45%和0.45%,总阳性率为20.63%,表明精液传播病毒仍然是当前母猪繁殖障碍的重要原因之一,因此,要加强对公猪精液的管理和公猪疫病的控制与净化,从源头控制传染源。
- 黄夏陈义祥覃芳芸磨龙春胡丽萍黄胜斌陈芳芳赵国明
- 关键词：公猪精液病原学调查
- 猪脑心肌炎病毒SYBR GreenⅠ real-time PCR检测方法的建立被引量：7
- 2009年
- 针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%。应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性。表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析。
- 施开创陈进喜屈素洁许瑞胜熊毅刘棋陈汉忠李刚
- 关键词：脑心肌炎病毒荧光定量PCRSYBR
