国家高技术研究发展计划(2004AA21221)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：朴建华田园王锐卓勤杨晓光更多>>
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- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
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- 转基因作物标记蛋白HPT融合表达载体构建、纯化及复性研究被引量：2
- 2007年
- 目的潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础。方法将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到该基因的融合表达载体pET41EK/HPT,将pET41EK/HPT载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,沉淀中的包涵体进行了稀释复性、柱上复性和N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解稀释复性等复性研究及活性测定、标签切除、N端测序等工作。结果融合蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,各复性方法表明SKL溶解稀释复性得到的蛋白在活性及产率方面明显高于其他两种方法,利用该方法每升培养物可获得78mg活性HPT融合蛋白,纯度约为93%,经肠激酶切割后,得到的蛋白与天然HPT蛋白N端氨基酸序列完全相同。结论利用本研究方法可得到在活性、分子量及氨基酸序列等方面与天然HPT蛋白一致的目的蛋白。
- 卓勤田园王锐朴建华杨晓光
- 关键词：安全性评价包涵体复性
