国家高技术研究发展计划(2001AA215161)
- 作品数：21 被引量：67H指数：4
- 相关作者：邹全明曾韦锟沙建平薛耀明陈炫更多>>
- 相关机构：第三军医大学南方医科大学南方医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- siRNA干扰胰岛新生相关蛋白表达对胰岛细胞株INS-1细胞增殖的抑制作用
- 2009年
- 目的探讨靶向胰岛新生相关蛋白(INGAP)基因RNAi对胰岛细胞增殖的抑制效应。方法设计合成siRNA,通过脂质体转入胰岛细胞株INS-1中,研究其对靶基因的抑制效应,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪、Western-blot法分别检测转染后的INS-1细胞中INGAP mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果结果显示siRNA6序列对细胞增殖有明显的抑制效应,INGAP mRNA及蛋白表达明显降低,INS-1细胞增殖受到抑制,P<0.05。结论干扰INGAP基因的表达能有效抑制胰岛细胞的增殖,INGAP有可能成为治疗β细胞严重减少或损害的重要新靶点。
- 沙建平薛耀明陈炫龙可梁华晟桑丹毛睿睿林占
- 关键词：RNAI胰岛新生相关蛋白
- 血清特异性免疫复合物在幽门螺杆菌感染诊断中的意义
- 2006年
- 目的:建立一种血清幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)特异性免疫复合物的检测方法,并评价其在Hp感染诊断中的作用。方法:利用抗Hp单克隆抗体捕获Hp特异性免疫复合物,再用酶标羊抗人免疫球蛋白对其进行检测,并对其特异性和敏感性进行分析,同时与临床常用的血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养5种方法进行了比较,并对药物根除效果进行了评价。结果:血清可溶性Hp抗原检测方法敏感性和特异性分别为86.0%和96.0%,此方法明显优于血清特异性抗体检测、快速尿素酶试验、涂片镜检和细菌培养,与14C尿素呼气试验差异无显著性,药物治疗前后血清Hp特异性免疫复合物含量差异无显著性。结论:血清Hp特异性免疫复合物检测方法是一种简便、高敏感性和特异性的检测Hp感染的方法,但不能用于Hp感染药物根除效果的评价。
- 王缚鲲吴亚男邹全明冉向阳时兰春安黎云王宪灵
- 关键词：免疫复合物单克隆抗体
- 重组人胰岛新生相关蛋白的高水平表达与纯化被引量：3
- 2007年
- 通过RT-PCR体外扩增目的基因胰岛新生相关蛋白(isletneogenesis associated protein,INGAP),并将其克隆入原核表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,洗涤杂蛋白后用尿素溶解,经Heparin Agrose亲合柱层析分离后,再用Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化。纯化后的INGAP皮下注射免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA评价INGAP的免疫活性。结果显示INGAP表达量高达菌体总蛋白的40%左右,经HPLC测定,分离纯化后的目标蛋白纯度达到98.81%,且具有良好的免疫原性。
- 沙建平薛耀明陈炫朱永红李时升王晓勤卓凤婷曾展军
- 关键词：胰岛新生相关蛋白纯化免疫原性
- 幽门螺杆菌重组腺病毒双价疫苗的构建及免疫学评价被引量：4
- 2004年
- 幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表达目标抗原 .以血清中IgG和新鲜粪便中sIgA ,评价其免疫效果 ,结果显示 。
- 刘秀丽刘纯杰陶好霞李淑琴李勣张兆山
- 关键词：幽门螺杆菌重组腺病毒尿素酶B热休克蛋白A体液免疫
- 中国香港地区幽门螺杆菌毒力基因型与十二指肠溃疡关系的研究被引量：19
- 2003年
- 目的 研究幽门螺杆菌 (Hp)的重要毒力因子vacA ,cagA ,iceA及插入序列IS在中国香港地区分离菌株中的分布特征及其与十二指肠溃疡的关系。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot方法 ,对 72例证实为Hp感染的胃十二指肠疾病患者的胃黏膜标本直接进行检测。结果 72例患者中 ,69例 (95 .8% )感染的Hp菌株为vacAs1c型 ,3例 (4.2 % )为s1a型 ;2 3例(31 .9% )为vacAm1b型 ,46例 (63 .9% )为vacAm2型 ;6例 (8.3 % )为混合型。 63 .9% (46/72 )的患者感染菌株为iceA1型 ,2 9.2 % (2 1 /72 )为iceA2型。cagA的阳性率为88.9% (64/72 )。结论 Hp毒力因子vacA ,cagA和iceA在香港菌株中的分布有自己的特点 ;未发现特定cagA 。
- 尹焱张建中王振宇夏华向林兆鑫
- 关键词：幽门螺杆菌十二指肠溃疡
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位W/O/W型复乳剂的研制被引量：2
- 2003年
- 目的 制备重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(rUreB)复乳剂,研究其物理性质及免疫效率。方法 设计处方采用二步法制备复乳,显微镜观察乳滴结构及粒径分布,以电导法测定包封率,以经典法、离心法及电导法观察复乳的稳定性,免疫印迹观察抗原制备成复乳剂后免疫反应性的变化,以动物实验观察rUreB复乳的免疫效率。结果 制备的rUreB复乳性质稳定、包封率98.3％、粒径大小主要在2～10μm,免疫印迹及小鼠口服免疫后特异性抗体测定结果表明,该复乳具有良好的免疫原性,剂量小、免疫效率高。结论 将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位制备成复乳剂可得到高效、廉价、使用方便的疫苗,复乳是一个很有潜力的黏膜疫苗传送系统。
- 高志刚邹全明郭刚郭桐生曾韦锟
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位复乳
- 重症急性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶和益活清胰汤的干预作用
- 目的：研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌 NF-κB 的活化及葡激酶的干预作用。方法：63只 SD 大鼠随机分为假手术组（n=9）、对照组（n=27）、葡激酶合用益活清胰汤治疗组（n=27）。SAP 模型采用...
- 沙建平祝彼得张新胜陈卫银陈志伟赵艳胡蓉冯本华
- 关键词：重症急性胰腺炎葡激酶
- 文献传递
- 重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究被引量：12
- 2003年
- 目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。结果:rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高,与对照组相比较差异显著(P<0.01)。20μg剂量组与10μg剂量组相比较,仅血清特异性IgG水平增高,其它黏膜特异性IgA的水平未见增高。大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强,卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平。结论:CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂。HprUreB鼻黏膜接种,不仅可诱导血清特异性抗体反应,而且能引起多个黏膜部位的免疫应答,是一种方便、有效、廉价的免疫途径。
- 高志刚邹全明郭刚郭桐生曾韦锟解庆华
- 关键词：疫苗鼻腔免疫
- 人胰岛新生相关蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化被引量：1
- 2010年
- 目的将在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物实验。方法通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之问,Sal Ⅰ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Western blottmg鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K,筛选得到3个阳性转化子,表达产物具有良好的抗原活性。结论实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达及纯化。
- 沙建平薛耀明陈炫罗祥蓉关美萍曾展军何飞英王玲魏民
- 关键词：胰岛新生相关蛋白毕赤酵母分泌表达纯化
- 幽门螺杆菌vacA基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2002年
- 空泡毒素是幽门螺杆菌产生的已知的唯一蛋白毒素,该毒素与感染者胃肠上皮损伤和溃疡形成密切相关,同时也是幽门螺杆菌免疫预防和免疫治疗的重要候选组分。从幽门螺杆菌NCTC11637染色体DNA中经PCR方法获得了2.9kb的该基因成熟肽全长序列,将该基因克隆至载体pET22b+,经PCR扩增和酶切鉴定后序列分析表明,该基因与已知序列完全一致。
- 刘纯杰张兆山陶好霞李淑琴李眅刘秀丽段海清黄翠芬
- 关键词：幽门螺杆菌克隆测序VACA基因
