安徽省高校省级自然科学研究项目(2005KJ045ZD)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
- 相关作者：沈际佳赵志荣王晓楠雷黎刘淼更多>>
- 相关机构：安徽医科大学马鞍山市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 光学显微镜下日本血吸虫成虫生殖系统形态学观察被引量：3
- 2007年
- 目的在光学显微镜下观察日本血吸虫雌雄成虫生殖系统的组织形态结构特征。方法感染性钉螺逸出尾蚴,经腹部皮肤感染小鼠,感染7周后解剖获得血吸虫成虫,经10%甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片和苏木素-伊红(HE)染色后在光镜下观察。结果光镜下日本血吸虫雌雄成虫睾丸、卵巢、输卵管、卵黄腺、卵黄管、子宫等生殖器官的组织结构和细胞形态清晰。结论日本血吸虫成虫经石蜡切片和HE染色后,雌雄成虫各生殖器官在光镜下清晰可见,为血吸虫形态学教学和血吸虫生殖生物学研究提供了简便的方法。
- 王晓楠吴正升杨枫沈际佳
- 关键词：日本血吸虫成虫生殖系统光学显微镜形态学
- 日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因功能的研究
- 2011年
- 目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分电击转染的童虫作体外培养,在培养后第1、3和5天以TRIzol法同时提取其总RNA和总蛋白。实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测Mago nashi基因和蛋白表达产物。电击转染的童虫注射入6只BALB/c小鼠体内,每鼠约1 000条,6周后取出虫体,盐酸卡红染色,在激光共聚焦显微镜下观察虫体内部各器官形态特征,测量虫体相关指标。结果在电击转染后的第1、3和5天,SjMago nashi dsRNA组目的基因的转录水平较阴性对照组分别下降了22%、69%和80%,蛋白质水平较阴性对照组分别下降了12%、39%和56%。激光共聚焦显微镜观察发现,SjMago nashi dsRNA组中的雄虫睾丸内有较多精子,呈泛雄性化表现,而雌虫的卵巢和卵黄腺无明显特征变化。与阴性对照组相比,SjMago nashi dsRNA组的雄虫的体宽、睾丸长和睾丸宽,雌虫的体宽、卵巢长和卵巢宽均明显缩小(P<0.05)。结论 SjMago nashi dsRNA可特异性抑制日本血吸虫靶基因及其编码蛋白的表达,SjMago nashi基因为日本血吸虫生殖相关基因,在生殖系统器官的正常发育中起一定作用。
- 张薇娜张鹏刘淼任翠平黄大可沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖双链RNARNA干扰
- RNA干扰技术及其在寄生虫学研究中的应用被引量：1
- 2005年
- 随着1998年RNA干扰在秀丽隐杆线虫中的发现,RNA干扰作为一项在分子生物学及细胞生物学研究的新技术得到了快速发展。该文就近几年来RNA干扰的机制、基因功能研究和基因治疗以及在寄生虫方面的研究进展作一综述。
- 赵志荣沈际佳
- 关键词：RNA干扰技术寄生虫学基因治疗疟原虫血吸虫
- Tsunagi蛋白调节日本血吸虫成虫生殖器官及虫卵的发育
- 目的鉴定日本血吸虫Tsunagi蛋白在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Tsunagi基因的双链RNA,将其电穿孔转染入日本血吸虫童虫体内。电转后部分童虫进行体外培养,于培养后第1、3、5天收集童虫,提取童...
- 任翠平张鹏张薇娜刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖生物学蛋白质功能
- 文献传递
- 日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的获得、表达及初步鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定。方法应用简并引物PCR和5’端、3’端锚定PCR,扩增得到日本血吸虫Tsunagi基因的完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白。用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western Blotting对表达蛋白进行初步鉴定。结果获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的完整ORF,序列全长为531bp,编码177个氨基酸。构建的重组质粒pET28a-SjTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达;以重组蛋白免疫小鼠获得效价为1∶51 200的多克隆抗体,Western Blotting证实抗体可特异性识别目的蛋白。结论成功获得日本血吸虫Tsu-nagi蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了Tsunagi基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础。
- 王晓楠雷黎赵志荣朱绍春刘淼沈际佳
- 关键词：日本血吸虫克隆基因表达多克隆抗体
- 日本血吸虫Mago nashi基因RNA干扰系统的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。
- 赵志荣刘淼雷黎朱绍春汪学龙沈际佳
- 关键词：日本血吸虫SIRNASHRNA
- 日本血吸虫成虫生殖系统的激光共聚焦显微镜形态学观察被引量：3
- 2008年
- BALB/c小鼠经皮感染日本血吸虫尾蚴(40±2条/只)35d后剖杀,获取成虫,经固定、染色、脱色、脱水、透明和封片等处理制成整装玻片标本,用激光共聚焦显微镜观察。显微镜下日本血吸虫的整体形态以及雄虫生殖系统中的睾丸、贮精囊和生殖孔,雌虫生殖系统中的卵巢、卵黄腺、输卵管、卵黄管、受精囊、卵模、梅氏腺、子宫、雌性生殖孔以及虫卵等形态结构清晰。激光共聚焦显微镜技术可较好地观察日本血吸虫虫体各器官组织和细胞结构。
- 张薇娜黄大可张鹏任翠平王晓楠张云霞沈际佳
- 关键词：日本血吸虫生殖系统细胞学
- 日本血吸虫Mago nashi基因的表达及其抗体的制备
- 2008年
- 目的获得日本血吸虫Mago nashi（sjMago）基因的原核表达蛋白并制备多克隆抗体。方法以童虫cDNA文库为模板，PCR方法扩增该基因，将其亚克隆人原核表达载体pET28a（＋）中，IFrG诱导表达重组蛋白，用含重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔，制备该蛋白的多克隆抗体，分别用Western blot和ELISA法鉴定抗体的特异性和效价。结果成功重组SjMago基因的原核表达质粒，经IPTG诱导表达相对分子质量约17×10^3的目的蛋白，免疫家兔获得多克隆抗体，用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1：40960，Westernblot证实有特异性目的蛋白条带存在。结论成功获得了原核表达的SjMago基因，制备出特异性的多克隆抗体，为进一步研究其功能奠定了基础。
- 赵志荣雷黎沈际佳
- 关键词：基因表达克隆抗体
