公益性行业科研专项(200903037)
- 作品数：4 被引量：21H指数：2
- 相关作者：王志亮龚振华阮洋秦峻岭王承宇更多>>
- 相关机构：中国动物卫生与流行病学中心吉林农业大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒H基因的真核表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因真核表达载体,并对其表达能力及免疫活性进行鉴定,为后期疫苗的研制提供基础。方法根据GenBank上公布的PPRV(China/Tib/Gej/07-30株)H基因的序列进行引物设计并进行扩增,纯化回收后将其克隆到pMD-18T载体中,将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pCAGGS上。结果成功构建了含有PPRV H基因的真核表达载体pCAGGS-H。通过脂质体介导质粒pCAGGS-H转染DK细胞,经间接免疫荧光及Western blot证实,表达蛋白分子质量单位为68.8 ku,能与PPRV阳性血清发生特异性反应。结论 pCAGGS-H在真核细胞内可有效表达。
- 阮洋秦峻岭高玉伟黄海楠孙玮杨松涛王承宇王铁成黄耕王志亮夏咸柱
- 关键词：小反刍兽疫H基因WESTERNBLOT
- 非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用被引量：11
- 2013年
- 本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白,并进一步将其用于ELISA试验研究。参考非洲猪瘟病毒Con09/Bzz020株P54基因(E183L)的核苷酸序列,通过序列优化后合成P54基因,克隆至表达载体pET-30c(+),构建重组质粒pET-30c(+)-p54。结果显示,pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架,可高效表达分子量约20.7ku的p54蛋白,该蛋白表达稳定,具有可溶性,易于纯化,纯度高达900μg·mL-1,所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020株p54蛋白氨基酸序列相同;Western blot试验显示,表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应;ELISA试验显示,p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67。研究结果证实p54蛋白表达产量高,易于纯化,具有较好的抗原性,可用于非洲猪瘟ELISA诊断。
- 龚振华王丽萍臧京帅张康刘春菊吴晓东张启迪秦晓冰陈琳琳单虎王树双王志亮
- 关键词：非洲猪瘟病毒ELISA
- 小反刍兽疫病毒N基因的原核表达被引量：9
- 2011年
- 目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-28a-N。阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度。通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性。扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达载体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应。
- 阮洋秦峻岭高玉伟孙玮张涛杨玉姣杨松涛王承宇王铁成黄耕夏咸柱
- 关键词：原核表达SDS-PAGE电泳WESTERN-BLOT
- 非洲猪瘟病毒K205R蛋白基因原核表达的研究
- 2010年
- 本研究合成非洲猪瘟的K205R基因,将K205R基因克隆至pET-30c(+)质粒,构建重组原核表达质粒pET30C-K205R。该重组质粒的阅读框架正确,表达的融合蛋白的N端和C端均带6×组氨酸。pET30C-K205R-BL21菌株经培养和诱导表达后,可生产K205R可溶性蛋白,K205R可溶性蛋白可用Ni柱纯化。纯化表达K205R蛋白的ELISA试验证明,表达的K205R蛋白与猪阳性非洲猪瘟血清具有较好的特异性反应。
- 龚振华莫正芬李葳李玉清刘开成史红刘国庆王君玮蒋正军王志亮
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达
