国家自然科学基金(30571374) 作品数:11 被引量:60 H指数:4 相关作者: 朱国强 姚丰华 张钰 夏芃芃 刘轶 更多>> 相关机构: 扬州大学 中国药科大学 教育部 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 转基因生物新品种培育专项 江苏省属高校自然科学基础研究项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
细菌Ⅵ型分泌系统结构与调控的研究进展 被引量:4 2013年 VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)具有转运效应蛋白分子到多种类型靶细胞的能力,广泛存在于革兰氏阴性菌,其结构复杂。当前T6SS结构模型表明其装置至少包含两个复合物:细胞膜跨膜相关装置和动态的噬菌体样结构。本文主要围绕T6SS分泌装置的结构、结构元件相互作用功能以及影响装置表达和活性的条件和信号来进行简要综述。 姚丰华 张钰 朱国强大肠杆菌K88ac菌毛操纵子fae全基因的克隆、表达及生物学活性初步研究 被引量:3 2008年 目的:在体外克隆和表达猪肠产毒性大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛操纵子fae结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。方法:利用长PCR技术以猪ETECK88ac株C83902基因组DNA为模板扩增编码K88菌毛操纵子fae基因,克隆入表达质粒载体pBR322,构建和筛选重组质粒pBR322-fae,转化至不含任何菌毛的大肠杆菌EP株;电镜观察重组菌表面菌毛表达情况;用热抽提法提纯表达的重组菌毛;用纯化菌毛免疫小鼠制备高效价抗血清;用SDS-PAGE和Westernblot检测重组菌毛的抗原性,用细胞黏附和黏附抑制试验检测其生物学活性。结果和结论:在电镜下观察到重组菌表面大量表达K88ac菌毛,该重组菌与兔抗K88ac菌毛单因子阳性血清、鼠抗K88ac菌毛单克隆抗体均产生凝集反应;纯化菌毛经SDS-PAGE,结构单位菌毛呈单一的相对分子质量约26×103的蛋白条带;纯化菌毛免疫小鼠后可制备出高效价的鼠抗血清,玻板凝集试验和Westernblot结果表明体外表达的K88ac菌毛具有与K88ac野生菌毛相同的抗原性;猪小肠上皮细胞系黏附和黏附抑制实验结果表明重组EP菌和野生菌株一样具有较强的黏附猪小肠上皮细胞系的能力,而且提纯重组菌毛制备出的鼠抗血清能有效抑制上述重组菌或野生菌株对猪小肠上皮细胞系的黏附结合。 朱春红 朱国强关键词:克隆 生物活性 基于Red同源重组和高效自杀性载体系统构建肠炎沙门菌突变株方法的比较 前言:采用Red同源重组和高效自杀性载体系统敲除肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)SEF14菌毛sefD/sefA基因,并对两个系统进行比较。Red同源重组系统是将一段携带与靶基因两翼各有40~6... 朱春红 孙晓庆 何素芬 朱国强文献传递 细菌Ⅵ型分泌系统研究进展 被引量:3 2012年 病原体在感染的过程中,不仅要努力寻找外在的基本营养物质,又要避免被宿主免疫系统清除。这些过程大多都依赖于某些特殊的蛋白质,这些蛋白质由细菌自身合成及释放,或存在于细菌表面,或释放到细菌的外环境中,或者是注入到宿主细胞内。 周虹 朱国强关键词:细菌 分泌系统 营养物质 免疫系统 病原体 细胞内 细菌Ⅴ型分泌系统研究进展 被引量:7 2007年 目前已知革兰阴性(G-)细菌的分泌系统至少有5种类型,即Ⅰ~Ⅴ型。其中Ⅴ型分泌系统为G-菌外膜通道转运蛋白系统中最大的一个家族,该系统又称自主转运蛋白系统,它首先通过Sec依赖的分泌通路跨内膜转运,到达外周质间隙后,又通过自身的C端在外膜上形成一个β折叠桶实现跨外膜转运。Ⅴ型分泌系统的分泌装置最为单一,且该系统分泌的蛋白在跨外膜转运过程中似乎不需要能量和辅助因子(蛋白)的参与。随着对运用Ⅴ型分泌系统在G-菌表面展示异源性多肽/蛋白质的深入研究,该系统在生物技术领域已展示出巨大的应用前景。 原志伟 朱国强关键词:革兰阴性细菌 肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因缺失株的毒力相关功能研究 被引量:3 2014年 为研究肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因在肠炎沙门菌感染中的毒力作用,利用Red同源重组系统对2株肠炎沙门菌(国内标准株50336和国际参考株SD-2)SPI-19的Hcp基因进行敲除,成功构建了50336ΔHcp和SD-2ΔHcp基因缺失株,并构建了回补株50336ΔHcp/pHcp和SD-2ΔHcp/pHcp。分析比较缺失株与野生株对人肠上皮细胞系Caco-2黏附和侵袭能力,以及在鸡巨噬细胞HD11的存活能力。结果显示:缺失Hcp基因后,肠炎沙门菌50336对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降39.1%和47.9%;SD-2对Caco-2细胞黏附和侵袭数量分别下降46.5%和58.9%。吞噬作用2h后,50336ΔHcp和SD-2ΔHcp与野生株相比在HD11的存活量下降了35.7%和37.2%,差异显著。通过Real Time-PCR试验分析,与野生株相比,Hcp基因缺失后fliC、sefA、ompA,ompC这4个重要粘附因子编码基因的表达量显著下降。试验表明,肠炎沙门菌SPI-19编码的Hcp基因对肠炎沙门菌的毒力具有增强作用。 姚丰华 张钰 朱国强关键词:肠炎沙门菌 毒力 动物细胞培养及微载体技术研究进展 被引量:22 2007年 动物细胞培养作为生化工程学科领域中迅速发展起来的生物技术与化学工程结合的新型学科,无论在基础研究和应用研究方面都越来越受到生物技术界的重视,现已成为生化工程学科主要前沿学科之一。文中介绍了动物细胞培养技术,并就微载体细胞培养进行了详细的论述。 刘轶 朱国强关键词:动物 细胞培养 微载体 生化工程 猪产肠毒素大肠杆菌987P蛋白受体的鉴定 被引量:1 2008年 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)定植于仔猪肠道的第一步是通过987P菌毛与小肠上皮细胞表面刷状缘大分子(BBV)结合。对分离的BBV进行SDS-PAGE和Ligand blot分析表明,在32~35KDa区域内有一条带能被987P菌毛探针所识别和结合,所结合的条带经胰蛋白酶消化后,通过微内径反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离出多条主要峰带蛋白峰带,采用衬质辅助激光解吸与电离质谱法(MALDI-MS)对主要峰带进行分析,结合多肽氨基酸测序和Blast同源性比较,得到3个氨基酸基序(AETAP、ALAAAGYDVEK和LGLK),其序列与人和鼠源的组蛋白H1高度同源;来源于仔猪小肠上皮细胞BBV的H1蛋白与BBV一样都能特异性结合纯化的987P菌毛蛋白。上述结果表明,仔猪小肠上皮细胞BBV的组蛋白H1是987P菌毛蛋白的受体。 朱国强 王建业 朱晓芳关键词:产肠毒素大肠杆菌 受体 磷霉素分子耐药机制研究进展 被引量:3 2015年 由于作用机制独特、抗菌谱广、突变耐药发生率低、且与其他抗生素具有良好的协同作用优点等,磷霉素成为临床抗多药耐药菌感染的良好选择,而值得注意的是,耐药性尤其是获得耐药性的产生和发展将成为近年来磷霉素抗多药耐药菌感染的障碍。为此,本文综述了由肽聚糖生物合成酶MurA突变、磷霉素转运摄取系统障碍及磷霉素耐药修饰酶引起磷霉素耐药的3种分子耐药机制,并重点对获得性分子耐药机制磷霉素耐药修饰酶的出现及种类、临床流行特点、分子遗传背景及传播特点、亲缘关系及进化进行了阐述,旨在为临床合理应用磷霉素、减缓耐药性的发生和传播、开发抗耐药菌感染新药及新制剂提供新思路。 陈琳 区炳明 宋玉洁 朱国 强关键词:磷霉素 肠道免疫的安全靶向载体:大肠杆菌Nissle1917 被引量:5 2013年 长期以来,如何激发高效的肠道黏膜免疫应答来预防肠道感染始终是较为棘手的问题。本文旨在对大肠杆菌(Escherichia coli)Nissle 1917作为肠道黏膜免疫的安全靶向载体,调理胃肠道菌群紊乱、缓解溃疡性结肠炎以及利用益生菌固有特性或优化特性进行治疗的可能性等相关研究进展作一综述。大肠杆菌Nissle1917(EcN)是一株可口服的优良益生菌,也可作为生物载体活苗候选株,兼有较强的肠道局部定殖能力和无免疫原性的特性。该菌株还可以作为载体靶向递呈TAT—凋亡素融合蛋白治疗结肠直肠癌,并在研发靶向递呈防御素治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病上具有重要的功能。其基因修饰株能够原位递呈特定的抗原分子,有效激发特异性的黏膜免疫应答。重组大肠杆菌Nissle-HA110-120具有体外表达特异性抗原的能力,但EcN菌体本身不会引起黏膜免疫应答,也不影响对自身抗原的外周免疫耐受。同时,EcN具有很好的安全性,尤其是因炎症导致肠道防御屏障破坏的时候,重组大肠杆菌Nissle-HA110-120在健康或患有急性结肠炎的小鼠体内都没有迁移、克隆扩增和激活特异性CD4+T淋巴细胞的作用。 夏芃芃 朱军 朱国强关键词:T细胞应答