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NA-1株鹅源副粘病毒糖蛋白基因在原核及真核表达系统中的表达: 前言鹅副粘病毒(GPMV)病是1997年开始在我国江苏、广东、吉林等许多地区流行,并造成严损失的一种新的烈性传染病,具有很高的发病率和死亡率。F和HN是两个重要的囊膜糖蛋白,是病毒毒力的决定因素。F蛋白具有促进病毒囊膜与...; 马爱霞丁壮李娜宋子运徐明宣华; 文献传递

拯救NA-1株鹅源新城疫病毒转录载体的构建: 前言本研究用反向遗传操作技术拯救NA-1株鹅源副粘病毒,用PVAX-1载体作骨架,构建了包含病毒两个末端序列及丁肝病毒核酶的的转录载体。1材料与方法PVAX-1载体购自Ivitrogen公司,BamHI、Hin- dII...; 李少丽王昌庆丁壮丛彦龙尹仁福; 文献传递

NA-1株鹅源新城疫病毒微型基因组的构建: 近年来在分子病毒学研究领域新兴起的"反向遗传操作技术"(又称"病毒拯救")在分子水平对负链RNA病毒进行功能基因组研究提供了一种有效方法。它是在RT-PCR和体外转录技术基础上建立起来的病毒全长感染性cDNA克隆技术。由...; 李娜丁壮常爽徐明; 关键词：RACE 病毒拯救; 文献传递

鹅源新城疫病毒F基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立被引量：1: 2008年; 参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株F基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增F基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-F,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为0.21μg/孔,建立了检测鹅源新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法。; 刘新鑫孟轲音尹仁福丁壮; 关键词：鹅源新城疫病毒 F基因原核表达间接ELISA

猪源副黏病毒JL-1株全基因获得及遗传变异分析被引量：2: 2009年; 利用本实验室分离保存的猪源副黏病毒JL-1株来提取病毒基因组RNA。参考GenBank发表的相关禽副粘病毒Ⅰ型（Avian paramyxovirus serotype1，APMV-1）基因组序列，设计了8对特异性引物，RT—PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段，并将各目的基因片段回收纯化，将纯化后的PCR产物进行测序。测定结果得到NP、P、M、F、HN、La、Lb、Lc8段基因序列，利用DNAMAN软件进行拼接得到基因组全长cDNA序列（GenBank登录号：EU546165）。序列分析结果表明，PPMV JL—1株与各地代表株核苷酸同源性87．85％～99．78％，与鹅源新城疫（GPMV）ZJ-1、NA-1株核苷酸同源性分别为83．31％、83．46％，同时根据各毒株F基因开放阅读框前389个核苷酸序列绘制出系统发育进化树，结果表明PPMV JL-1株与LaSota同属于基因Ⅱ型，不同于基因Ⅶ型的ZJ-1和NA-1株的鹅源毒株。; 吴昊孟轲音丁壮尹仁福毕玉海丛彦龙李志杰王昌庆刘美邱蜜蜜李少丽; 关键词：新城疫病毒全基因组

NA-1和F48E9病毒受体在不同禽类组织水平的研究: 前言新城疫病毒可以利用唾液酸α-2,3连接的半乳糖和唾液酸α-2,6连接的半乳糖作为受体。不同物种唾液酸分布的种类和数量存在差异,这种差异决定了许多病毒的组织嗜性和宿主范围,也是某些病毒跨越种间传播的分子基础。鸡的体内新...; 宋战昀冯新丁壮韩文瑜; 文献传递

鹅副粘病毒与鹅细小病毒主要免疫原性基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的共表达及其免疫被引量：10: 2008年; 根据测得的鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株F基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的含F基因的质粒pGF为模板,PCR扩增F基因片段(去除终止密码子),与转座载体pFastBac连接,构建重组质粒pFastBac-F,并进行测序鉴定;根据测得的鹅细小病毒(GPV)GD-01株VP3基因序列,设计1对特异性引物,用作者构建的重组质粒pGVP3为模板,PCR扩增出有Linker的VP3基因(命名为LVP3)。再将重组质粒pFastBac-F与LVP3片段连接,构建重组转座载体pFF-LVP3,转化到DH10Bac宿主菌,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得重组Bacmid F-L-VP3转染Sf9昆虫细胞,所表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,特异蛋白分子质量约123 000。将表达蛋白免疫雏鹅,经抗体测定证明,表达的F-VP3重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。; 毕玉海曹璐李志杰母连志徐明丁壮; 关键词：鹅副粘病毒鹅细小病毒 F基因 VP3基因杆状病毒

NA-1株鹅源副粘病毒M、F和HN蛋白基因的真核表达: 2008年; 目的获得鹅源副粘病毒(GPMV)NA-1株M、F和HN基因真核表达蛋白。方法将NA-1株GPMV经SPF鸡胚增殖、纯化,提取病毒基因组RNA。参考GenBank登录的NA-1株GPMV基因组序列,设计3对特异性引物,利用RT-PCR法,分别扩增M、F和HN基因开放阅读框(ORF),将目的基因克隆至pMD18-T-Simple载体,并进行酶切和序列测定。将目的片段克隆至pCI-neo表达载体,酶切鉴定正确的重组质粒,分别命名为pCI-M、pCI-F和pCI-HN。将重组表达质粒分别转染Vero细胞,用间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达。结果RT-PCR法分别扩增出M、F和HN基因,大小与预期一致。克隆载体及表达载体酶切及测序鉴定正确;重组真核表达质粒转染Vero细胞后,荧光显微镜下可见特异性荧光。结论利用pCI-neo真核表达载体在Vero细胞中成功表达了NA-1株GPMV M、F和HN基因,为下一步研究该病毒的出芽机制以及各结构蛋白的功能奠定了基础。; 马爱霞袁洁丁壮宣华宋子运徐明; 关键词：鹅源副粘病毒 M基因 HN基因真核表达

RNAi靶向新城疫病毒M和P基因在CEF细胞中抑制新城疫病毒复制的研究: 前言新城疫(Newcastle disease,ND)是由副黏病毒科腮腺炎病毒属的禽副黏病毒Ⅰ型(即新城疫病毒)引起的高度接触性禽类烈性传染病。以呼吸道症状为特征,同时伴发神经症状、胃肠道病变和头部肿大。国际兽疫局(Of...; 尹仁福刘新鑫丁壮刘美王昌庆李少丽吴昊邱蜜蜜; 文献传递

NA-1株鹅源新城疫病毒基因组cDNA感染性克隆的获得: 结合鹅源新城疫在我国许多省、市和地区的流行和发生,同时在我国还未有新城疫病毒弱毒株用于疫苗的制备等方面研究的报道。因此在研究NA-1株基因组功能的同时,研究其减毒机理,针对鹅源新城疫病毒NA-1株人工构建弱毒疫苗候选株,...; 常爽丁壮李娜徐明; 关键词：病毒拯救; 文献传递

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