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卫生部科学研究基金(WKJ2005-2-026)

作品数：20 被引量：69H指数：6
相关作者：郑骏年毛立军温儒民刘俊杰李望更多>>
相关机构：徐州医学院附属医院南开大学徐州医学院更多>>
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相关领域：医药卫生生物学理学更多>>

文献类型

  • 20篇中文期刊文章

领域

  • 17篇医药卫生
  • 3篇生物学
  • 1篇理学

主题

  • 10篇基因
  • 9篇肾癌
  • 9篇腺病
  • 9篇腺病毒
  • 8篇RNA干扰
  • 7篇细胞
  • 5篇KI67基因
  • 4篇溶瘤
  • 4篇溶瘤腺病毒
  • 4篇肿瘤
  • 4篇克隆
  • 3篇增殖
  • 3篇肾细胞
  • 3篇肾细胞癌
  • 3篇细胞癌
  • 3篇发夹
  • 3篇白细胞介素
  • 3篇白细胞介素1...
  • 3篇G250
  • 2篇单克隆

机构

  • 20篇徐州医学院附...
  • 6篇南开大学
  • 4篇徐州医学院
  • 2篇天津市泌尿外...

作者

  • 20篇郑骏年
  • 16篇毛立军
  • 12篇温儒民
  • 11篇李望
  • 11篇刘俊杰
  • 10篇郑宏祥
  • 6篇孔德领
  • 6篇孙晓青
  • 6篇陈家存
  • 4篇裴冬生
  • 4篇郝林
  • 3篇薛松
  • 3篇孙方浩
  • 3篇郑典宝
  • 2篇武艺
  • 2篇韩瑞发
  • 2篇马腾骧
  • 2篇刘晓筠
  • 2篇史震
  • 2篇王军起

传媒

  • 11篇中华实验外科...
  • 3篇徐州医学院学...
  • 1篇医学综述
  • 1篇高等学校化学...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇肿瘤防治研究
  • 1篇中国肿瘤临床
  • 1篇国际肿瘤学杂...

年份

  • 8篇2008
  • 8篇2007
  • 4篇2006
共 20 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
基于单克隆抗体G250修饰的肿瘤细胞靶向基因载体研究被引量：5
2008年
用宫颈癌细胞Hela表面高表达G250抗原的单克隆抗体G250修饰非病毒基因载体,获得肿瘤靶向基因载体.通过注射G250杂交瘤细胞于小鼠腹腔,制备富含G250mAb的腹水,用正辛酸-硫酸铵沉淀法和Protein A Agarose分离纯化,获得高纯度的G250mAb.通过二硫键将PEI与G250mAb偶联,得到修饰的基因载体G250mAb-PEI,研究其转基因靶向性.结果表明,G250mAb-PEI对Hela细胞的基因转染具有显著的靶向性,对Hela细胞的转基因效率是肝癌细胞HepG2(G250阴性)的2倍;而对正常血管平滑肌细胞(SMC)的基因转染效率比Hela低近20倍,G250mAb修饰与否对SMC没有靶向性;对3T3细胞的毒性显著低于未修饰的PEI,表明G250mAb-PEI是一种高效、低毒和具有靶向性的基因载体.
韩素芳段亚君王燕铭郑骏年武艺蔡荣欧来良孔德领俞耀庭
关键词：聚乙烯亚胺肿瘤靶向HELA细胞基因治疗
表达小干扰RNA的条件增殖腺病毒与肿瘤
2007年
RNA干扰（RNAi）是一种由双链RNA介导的基因沉默现象。RNAi作为强有力的研究工具正在基因功能组学领域掀起一场真正的革命，也成为当今肿瘤基因治疗研究的热点。条件增殖腺病毒（CRAd）是一类仅在肿瘤细胞内特异增殖新型腺病毒载体，通过CRAd介导的小干扰RNA（siRNA）可以靶向肿瘤细胞，且随着病毒增殖反复表达siRNA，进一步加强siRNA介导的癌基因沉默效果。因此，siRNA-CRAd模式开辟了肿瘤基因治疗的新途径。
毛立军郑骏年
关键词：RNA干扰肿瘤基因疗法
荷载hTERT-siRNA的溶瘤腺病毒对人肾癌细胞增殖的抑制作用被引量：5
2008年
目的研究荷载hTERT-siRNA的溶瘤腺病毒（ZD-hTERT）对肾癌Ketr-3细胞增殖抑制作用。方法ZD-hTERT、溶瘤腺病毒ZD-EGFP、表达hTERT-siRNA的增殖缺陷腺病毒Ad-hTERT感染人肾癌Ketr-3细胞。Westernblot检测E1A表达；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot检测hTERT表达；原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡；噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活；结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果感染ZD-hTERT、ZD-EGFP的Ketr-3细胞表达E1A；抑制hTERT表达作用依次为ZD-hTERT〉Ad-hTERT〉ZD-EGFP。感染ZD-hTERT、ZD-EGFP、Ad-hTERT的Ketr-3细胞凋亡率（％）分别为（65．9±1．4）、（26．5±2．8）、（16．3±3．2）。感染ZD．hTERT、ZD-EGFP、Ad-hTERT的Ketr-3细胞存活率（％）分别为（30．9±3．6）、（51．6±3．8）、（87．9±3．1），每种病毒之间差异有统计学意义（P〈0．01）；对Ketr-3细胞的细胞毒作用ZD-hTERT〉ZD-EGFP〉Ad-hTERT。结论表达hTERT-siRNA的溶瘤腺病毒具有显著的抑制。肾癌Ketr．3细胞hTERT基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用。
陈仁富郑骏年李望刘艳华毛立军刘俊杰温儒民孙方浩裴冬生
关键词：溶瘤腺病毒HTERT基因RNA干扰肾癌
抗人肾癌G250单克隆抗体的制备及其功能鉴定
2008年
目的大量制备、纯化抗人G250单克隆抗体（G250-McAb），并鉴定其与G250合成多肽及细胞天然抗原的结合特异性。方法将抗人G250杂交瘤细胞接种BALB／C小鼠腹腔，大量制备G250-McAb。采用正辛酸-硫酸铵沉淀法获得粗制抗体，然后经蛋白A亲和层析柱纯化抗体。采用荧光激活细胞分类术及免疫组织化学法鉴定G250-McAb与抗原结合特异性。结果成功制备抗人G250-McAb，腹水经纯化后，获得了高纯度抗人G250单克隆抗体，蛋白浓度达4．78g/L。荧光激活细胞分类术及免疫组织化学结果显示G250-McAb与G250表达阳性的Ketr-3细胞特异性结合，而不与G250表达阴性的ACHN细胞结合。结论成功制备并纯化G250-McAb，为进一步开展G250-McAb介导的肾癌诊断、治疗奠定了基础。
朱海涛郑骏年李望郑宏祥温儒民刘晓筠刘俊杰裴冬生孔德领
关键词：肾细胞癌单克隆抗体细胞结合肾癌诊断
Ki67基因RNA干扰腺病毒表达载体的构建及其抗结肠肿瘤作用研究被引量：3
2007年
目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考。方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA13,构建Ki67-siRNA表达质粒pCA13-Ki67。鉴定正确后,将pCA13-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染至293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒Ad-Ki67。大量扩增Ad-Ki67,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。Ad-Ki67感染人结肠癌细胞,结晶紫染色法检测细胞病理作用,MTT法检测细胞存活,Western印迹法检测Ki67表达。结果:酶切分析、测序鉴定表明pCA13-Ki67构建成功,PCR分析表明Ad-Ki67含有Ki67-siRNA序列。Ad-Ki67可显著抑制Ki67蛋白表达及结肠癌细胞生长。结论:含有Ki67-siRNA的重组腺病毒构建成功,其能抑制人结肠癌细胞Ki67基因表达和生长。
毛立军郑骏年郑宏祥刘俊杰温儒民陈家存孙晓青
关键词：KI67基因RNA干扰腺病毒载体
表达白细胞介素18的条件增殖腺病毒的构建被引量：3
2008年
目的构建表达白细胞介素（IL）-18的条件增殖腺病毒。方法以质粒pJW-IL18为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增获得全长IL-18基因并改变其包含的酶切位点BglⅡ。将IL-18克隆至pCA13质粒，构建重组质粒pCA13-IL18。用BglⅡ从pCA13-IL18酶切出包含CMV启动子的IL-18表达框，并克隆进条件增殖腺病毒质粒pZD55，构建重组质粒pZD55-IL18。将pZD55-IL18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞，9～12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA，PCR鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD55-IL18。大量扩增，氯化铯梯度离心纯化，测病毒滴度。结果成功构建了表达IL-18的条件增殖腺病毒。结论成功构建的ZD55-IL18为肿瘤靶向治疗奠定基础。
李望郑骏年毛立军郝林郑宏祥刘俊杰裴冬生印晓星
关键词：腺病毒克隆
增殖及非增殖腺病毒载体介导的RNA干扰对肾癌细胞杀伤作用被引量：6
2007年
目的比较荷载Ki67基因小于扰RNA(Ki67-siRNA)的增殖腺病毒ZD55-Ki67及非增殖腺病毒Ad-Ki67对肾癌细胞的杀伤作用。方法MOI=10的ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染肾癌786-0细胞,2d后收集细胞,蛋白印迹法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹法、免疫细胞化学法检测Ki67表达;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡。4 d后噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,7 d后结晶紫染色法检测细胞毒性作用。结果感染ZD55-Ki67的786-0细胞表达E1A,感染Ad-Ki67的细胞不表达E1A。ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染的786-0细胞Ki67 mRNA表达率分别为(37.9±2.3)%、(64.1±1.9)%;Ki67蛋白表达率分别为(42.5±2.4)%、(60.1±2.2)%;Ki67染色阳性率分别为(20.8±2.8)%、(32.3±2.5)%;786-0细胞存活率分别为(22.2±3.0)%、(60.4±3.4)%;凋亡率分别为(53.0±3.7)%、(35.3±2.5)%,两种病毒处理之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论ZD55-Ki67抑制786-0细胞Ki67表达及增殖、诱导凋亡及细胞毒性作用均显著优于Ad-Ki67。增殖腺病毒介导的RNA干扰杀伤肾癌细胞作用优于非增殖腺病毒。
郑骏年毛立军温儒民刘俊杰李望薛松孙晓青韩瑞发马腾骧
关键词：腺病毒RNA干扰肾癌
端粒酶与肿瘤治疗研究进展被引量：6
2007年
由于端粒酶特异地表达于大部分肿瘤细胞,并且为大多数肿瘤细胞持续分裂所必需,因此抑制端粒酶活性就成了一种治疗肿瘤的特异靶点。随着对端粒酶研究的深入,应用靶向端粒酶的方法治疗肿瘤成为热点,并取得了较多的新进展,本文针对端粒酶在肿瘤中的表达调控和靶向端粒酶的肿瘤寡核苷酸治疗、基因治疗、免疫治疗、联合治疗以及干细胞治疗的研究进展进行综述。
杨春华毛立军郑骏年刘彦群
关键词：肿瘤端粒酶端粒
hTERT基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用被引量：4
2007年
目的观察针对hTERT基因的短发夹状RNA(shRNA)表达载体pSilencer-hTERT对人肾癌细胞及移植瘤生长的抑制作用。方法(1)pSilencer-hTERT转染人肾癌Ketr-3细胞,1、3、5、7d后逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹技术检测hTERT mRNA、蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,原位末端标记法检测凋亡。(2)BALB/C-nu裸鼠接种Ketr-3细胞成瘤,瘤内分别注射pSilencer- hTERT(50μg)、空质粒pSilencer 1.0-U6(50μg)及等体积(100μl)生理盐水,隔日1次,共7次。治疗结束后第3天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积,免疫组织化学染色检测hTERT表达。结果(1) pSilencer-hTERT转染3 d后Ketr-3细胞hTERT mRNA表达(43.2±4.4)%、蛋白表达(42.6±5.6)%最低,细胞增殖抑制率(37.3±6.6)%、凋亡细胞阳性率(30.5±4.7)%最高,分别与空质粒对照组[(98.8±4.7)%、(98.0±3.7)%、(3.3±0.9)%、(10.4±2.4)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)pSilencer-hTERT处理组小鼠肿瘤体积(62.4±36.5)mm^3减小,hTERT表达率(65.7±4.7)%降低,分别与空质粒对照组(83.2±38.7)、(90.7±4.2)%比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人肾癌Ketr-3细胞及裸鼠肾癌移植瘤生长。
温儒民郑骏年李望毛立军孔德领
关键词：肾癌短发夹状RNAHTERT基因
G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性被引量：2
2008年
目的克隆G250启动子并插入pGL3-Basic真核表达载体，探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性。方法提取宫颈癌Hela细胞总DNA作为模板，设计两对引物进行PCR，获取两段不同长度的G250启动子片段。测序后分别将获取的551bp和218bp启动子片段克隆到pGL3-Basic载体中，构建双荧光素酶检测质粒pGLB-G551和pGLB-G218。将pGL3-Basic、pGLB-G551、pGLB-G218各μg转染G250阳性宫颈癌Hela细胞、肾癌Ketr-3细胞。运用双荧光素酶检测技术，确定G250启动子的转录活性。结果电泳与测序结果显示，两段G250启动子片段与报道序列一致。酶切与测序结果显示，质粒pGLB-G551、pGLB-G218构建成功。转染pGLB-G551、pGLB-G218的Hela细胞相对荧光素酶活性分别为pGL3-Basic的11．07倍、10．36倍。Ketr-3细胞分别为pGL3-Basic的5．17倍、4．13倍。与空载体pGL3．Basic比较，pGLB-G551和pGLB-G218的相对荧光素酶活性均明显增强（P〈0．05）。pGLB-G551和pGLB-G218比较，相对荧光素酶活性差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功克隆出肾癌特异性G250启动子，并证明具有良好转录活性，218bp的启动子片段已具有G250启动子的所有启动效果。
薛松郑骏年温儒民郝林毛立军孔德领
关键词：启动子克隆肾细胞癌
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