新乡医学院省级重点学科开放课题(ZD200909)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：杨达胜毕凌云赵德安郭金岗梁斌更多>>
- 相关机构：新乡医学院第一附属医院厦门大学新乡市中心医院更多>>
- 发文基金：新乡医学院省级重点学科开放课题河南省医学科技攻关计划项目河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂肪源间充质干细胞对小鼠急性肾损伤后干细胞因子及其受体表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)对急性肾损伤(AKI)的治疗作用,并探讨ADMSCs治疗小鼠AKI可能的机制。方法 30只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组,每组10只。应用腹腔注射顺铂建立AKI模型,治疗组于注射顺铂12 h后尾静脉注射ADMSCs悬液,模型组于注射顺铂12 h后尾静脉注射等量生理盐水。注射顺铂7 d后处死小鼠,通过测定血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平及观察小鼠肾组织形态学改变判断肾损伤情况;免疫组织化学法检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、干细胞因子受体(c-KIT)及干细胞因子(SCF)表达情况。结果与模型组比较,治疗组BUN、Scr和NGAL水平显著下降(P<0.01),肾小管坏死(ATN)评分显著降低(P<0.01),c-KIT、SCF表达显著增加(P<0.01);与正常对照组比较,模型组c-KIT、SCF表达亦显著增加(P<0.01)。结论在AKI小鼠模型中,外源性ADMSCs可能通过旁分泌SCF、c-KIT,并激活SCF/c-KIT信号通路来促进肾小管细胞的修复,继而达到保护受损肾脏的作用。
- 周龙豪谢遂亮毕凌云杨达胜
- 关键词：脂肪源间充质干细胞中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白干细胞因子干细胞因子受体
- 动员自身骨髓干细胞与缺血再灌注肾损伤细胞的凋亡与增殖被引量：1
- 2013年
- 背景:骨髓干细胞具有多项分化潜能,可分化为肾组织固有细胞、修复损伤肾组织。目的:探讨粒细胞集落刺激因子联合干细胞因子动员自身骨髓干细胞对大鼠缺血再灌注肾损伤细胞凋亡与增殖的影响。方法:160只大鼠尿筛阴性后随机均分为正常对照组、模型组、细胞因子治疗组、治疗对照组。模型组和细胞因子治疗组建立大鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤模型;细胞因子治疗组和治疗对照组于造模后24 h开始皮下注射粒细胞集落刺激因子(50μg/kg,1次/d)和干细胞因子(200μg/kg,1次/d),连续5 d;模型组不给药,正常对照组不予干预。TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组织化学法(SABC法)检测肾组织CD34+细胞、Caspase-3、Bcl-2、细胞增殖核抗原表达情况。结果与结论:细胞因子治疗组肾组织内CD34+细胞较正常对照组、模型组明显增多(P<0.05)。不同时间点模型组和细胞因子治疗组凋亡指数、Capase-3表达量均高于正常对照组和治疗对照组(P<0.05),且模型组均显著高于细胞因子治疗组(P<0.05)。不同时间点模型组和细胞因子治疗组Bcl-2阳性表达细胞均高于正常对照组和治疗对照组(P<0.05)。细胞因子治疗组显著高于模型组,然后随着时间推移Bcl-2表达量明显减少(P<0.05)。模型组和细胞因子治疗组均可见细胞增殖核抗原阳性表达细胞;模型组于第24天增殖指数达峰值,后逐渐下降。细胞因子治疗组在第10天即达到高峰,持续至第17天,然后逐渐下降。说明粒细胞集落刺激因子联合干细胞因子动员自身骨髓干细胞可以促进肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞的增殖和减少细胞凋亡,从而有利于肾小管损伤的恢复。
- 毕凌云杨达胜赵德安梁斌张瑞霞白海涛
- 关键词：干细胞缺血再灌注干细胞因子粒细胞集落刺激因子
- 动员骨髓干细胞对大鼠缺血再灌注肾损伤缺氧诱导因子～1α和表皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的 观察干细胞因子（SCF）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员自体骨髓干细胞对急性肾小管坏死大鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及表皮生长因子（EGF）表达的影响,探讨SCF和G-CSF治疗大鼠缺血再灌注肾损伤的可能机制.方法 160只8 ～ 10周龄雄性SD大鼠随机分4组：对照组（A组）、缺血再灌注组（B组）、SCF＋ G-CSF治疗组（C组）、SCF＋ G-CSF对照组（D组）.免疫组织化学法（SP法）检测肾组织HIF-1α和链霉素亲和素-生物素-过氧化物酶（SABC）法检测肾组织CD34＋细胞、EGF的表达；RT-PCR检测肾组织中EGF mRNA的表达.结果 1.术后B组、C组肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落,随时间推移,肾小管逐渐修复,但C组修复程度明显好于B组.各时间点C组大鼠病理学评分均低于B组,差异有统计学意义（P＜0.05）.2.A组、D组CD34＋细胞表达差异无统计学意义；术后5 d,B组、C组肾组织中CD34＋细胞表达明显增高,与A组、D组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,C组与B组比较增高明显（P＜0.05）,随时间推移逐渐下降.3.B组、C组术后5 d最高,而后逐渐降低,C组各时相与A组、B组、D组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.4.EGF蛋白表达：B组在第17天达高峰,显著高于A组（P＜0.05）；C组在第10天达高峰,显著高于A组、B组和D组（P＜0.05）.B组和C组表达量达到高峰后随时间推移逐渐降低.5.肾组织EGF mRNA检测：A组、D组可见少许EGF表达.B组、C组于术后5 d增强,C组显著高于B组,差异有统计学意义（P＜0.05）.术后10 d,C组表达最明显,显著高于A组、B组和D组（P＜0.05）.术后17 d,B组表达达到高峰,高于A组和D组（P＜0.05）.术后24 d,B组、C组表达均降低；术后31d,B组、C组表达降至接近正常,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）.6.HIF-1α表达与下游基因产物EGF呈正相关（r=0.815,P＜0.01）.结论 SCF联合G-CSF动员足量的骨髓干细胞“
- 郭金岗杨媚杨达胜白海涛
- 关键词：骨髓干细胞缺氧诱导因子-1Α
- 干细胞因子和粒细胞集落刺激因子动员自身骨髓干细胞治疗缺血再灌注肾损伤被引量：11
- 2012年
- 背景:骨髓干细胞可分化为肾脏组织固有细胞、修复损伤肾组织。正常情况下,外周血干细胞数目较少,骨髓干细胞动员剂可提高外周血干细胞数目。目的:观察动员自身骨髓干细胞对缺血再灌注损伤肾脏修复作用及对缺氧诱导因子1α系统的影响,分析骨髓干细胞修复损伤肾脏的机制。方法:SD大鼠随机分为4组。对照组不作处置;模型组制备肾缺血再灌注模型;治疗组给予缺血再灌注模型大鼠皮下注射骨髓干细胞动员剂干细胞因子200μg/(kg·d)及粒细胞集落刺激因子50μg/(kg·d),治疗对照组给予正常大鼠皮下注射与治疗组相同的药物,连续5d。于术后5,10,17,24,31d观察大鼠肾脏病理改变、骨髓干细胞表面抗原标记CD34+细胞表达以及缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、血红素加氧酶1的表达变化。结果与结论:①联合应用骨髓干细胞动员剂能明显增加损伤肾组织骨髓干细胞的数量,减轻肾组织损伤程度。②骨髓干细胞能促进肾组织缺氧诱导因子1α系统的表达,缺氧诱导因子1α系统及其靶基因产物血管内皮生长因子、血红素加氧酶1表达增加是骨髓干细胞促进急性肾损伤修复的可能机制之一。③骨髓干细胞动员剂对缺氧诱导因子1α系统的表达有一定的增强作用。
- 毕凌云郭金岗张瑞霞赵静丽梁斌赵德安杨达胜
- 关键词：缺氧诱导因子1Α肾脏缺血再灌注损伤骨髓干细胞血红素氧化酶1
- 小鼠脂肪源间充质干细胞的培养鉴定及增强绿色荧光蛋白-慢病毒载体转染被引量：3
- 2013年
- 目的探索脂肪源间充质干细胞（ADMSCs）的分离培养方法、生长特性及筛选出慢病毒载体感染间充质干细胞的最佳感染指数（MOI），并鉴定其感染后的增殖能力，为ADMSCs移植治疗急性肾小管损伤提供实验依据。方法取4周龄昆明小鼠腹股沟脂肪组织，差速贴壁法培养分离昆明小鼠脂肪源间充质干细胞。经细胞培养液洗涤、离心后接种于细胞培养瓶，放置体积分数5％CO2孵箱中培养，24h后换液，以后每3d更换培养基，待细胞融合达到约90％时，传代培养。取第3代ADMSCs用流式细胞术（FCM）检测其表型、茜素红染色及油红O染色鉴定其多向分化潜能；用携带增强绿色荧光蛋白（EGFP）的慢病毒载体（LV）感染ADMSCs，FCM检测病毒感染效率，四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色法检测感染后的细胞活力。结果（1）差速贴壁法培养分离7-11d时细胞融合达80％以上。原代细胞融合达80％～90％进行1：4传代，细胞贴壁和生长速度快于原代细胞培养。第3代及再传代细胞形体趋于一致，细胞呈梭形。细胞连续传代10次，生长速度未见明显减缓；（2）FCM检测第3代细胞CD29阳性表达98．93％，CD34阳性表达0．17％；（3）第3代细胞成脂诱导14d油红O染色阳性，成骨诱导14d茜红染色阳性；（4）当MOI=25感染第3代细胞72h后，共聚焦荧光显微镜观察细胞EGFP阳性表达60％～70％，细胞活力不受影响；（5）MrIT法显示重组慢病毒转染细胞与未转染慢病毒细胞比较，细胞增殖能力无差异。结论从昆明小鼠腹股沟脂肪组织中分离的ADMSCs可在体外稳定传代；差速贴壁法可以简便、高效地提取ADMSCs；携带EGFP的LV可有效感染ADMSCs，并且感染后其增殖能力不受影响。
- 谢遂亮杨达胜毕凌云胡丹
- 关键词：脂肪源间充质干细胞原代细胞培养生物学特性慢病毒转染小鼠
- 不同剂量顺铂诱导小鼠急性肾损伤模型及其生物学指标检测被引量：8
- 2015年
- 目的观察不同剂量顺铂诱导的急性肾损伤（AKI）动物模型及其生物学指标血肌酐（Scr）、血红素氧化酶-1（HO-1）和调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）的表达变化,探讨HO-1、RANTES在AKI疾病过程中的表达意义。方法 25只6~8周龄健康雄性昆明小鼠,随机分为正常对照（NC）组和模型A、B、C组。模型组小鼠通过腹腔注射顺铂（CDDP）建立AKI模型,剂量分别为10、15、25 mg·kg-1,NC组小鼠不做任何处理。在模型建立后第3天,收集各组小鼠血液标本检测Scr,并取肾组织,应用苏木精-伊红（HE）染色观察各组肾组织病理改变,酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫组织化学染色法（IHC）测定肾组织RANTES和HO-1蛋白表达。结果与NC组比较,模型A、B、C组小鼠Scr水平显著升高（P〈0.01）。且Scr水平随CDDP应用剂量增加呈升高趋势,模型A、B、C组组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。ELISA和IHC结果均显示,与NC组比较,模型A、B、C组小鼠RANTES及HO-1蛋白表达均显著升高（P〈0.05）,且随CDDP应用剂量的增加,RANTES及HO-1蛋白表达逐渐升高（P〈0.05）。结论顺铂的肾毒性呈剂量依赖性;HO-1、RANTES可作为预测AKI发生的生物学标志物。
- 潘笑悦赵德安侯玉龙毕凌云杨达胜
- 关键词：急性肾损伤顺铂血红素氧化酶-1小鼠
