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蒿属花粉抗原对扁桃体淋巴细胞因子及细胞增殖的影响被引量：1: 2004年; 目的　研究蒿属花粉过敏体质者与非过敏对照者扁桃体淋巴细胞在特异性抗原刺激下细胞因子的动态变化以及细胞增殖情况。方法　采用淋巴细胞分离液分离扁桃体淋巴细胞 ,16 4 0培养液进行培养 ;经蒿属花粉抗原刺激后 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测上清液中IL 4、IL 5、IFN γ水平 ,MTT测定淋巴细胞增殖情况。结果　蒿属花粉过敏体质者扁桃体淋巴细胞经特异性抗原刺激后IL 4、IL 5水平明显升高 ,而IFN γ水平明显降低 ,与非过敏对照者细胞因子水平相比较有显著差异 (P <0 .0 1)。此外 ,过敏体质者淋巴细胞在抗原刺激后细胞增殖明显 (P <0 .0 1) ,而对照组无显著性变化 (P >0 .0 5 )。结论　过敏体质者扁桃体的淋巴细胞在蒿属花粉特异性抗原刺激下 ,Th2型细胞因子分泌升高 ,而Th1型细胞因子分泌下降 ,Th1向Th2漂移。; 丘劲刘志刚刘明卢永田; 关键词：扁桃体淋巴细胞蒿属花粉细胞因子 MTT

蒿属花粉cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：14: 2004年; 目的构建蒿属花粉cDNA表达文库。方法应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5.6×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.3kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对蒿属花粉特异性重组变应原的进一步研究。; 刘志刚吉坤美高波何毅华黄妩姣吴晓蔓; 关键词：蒿属花粉重组变应原 CDNA文库

艾蒿花粉与豚草花粉的抗原成分分析被引量：17: 2004年; 目的　比较艾蒿花粉和豚草花粉粗浸液中的蛋白质组分 ,探讨两者间有无共同抗原。方法　制备艾蒿花粉和豚草花粉的花粉浸液 ,采用SDS -PAGE及考马斯亮蓝染色分析两种花粉粗浸液中的蛋白质组分 ;用蒿属花粉过敏者的血清作为第一抗体 ,分别与两种花粉浸液发生反应 ,通过Western -blotting判断两种花粉间交叉抗原的存在。结果　SDS -PAGE显示 ,艾蒿花粉显带 13条 ,分子量在 18～ 10 0kDa之间 ;豚草花粉显带 5条 ,分子量在 18～ 6 3kDa之间。免疫印迹表明 ,11份蒿属花粉过敏患者的血清 ,均能同时与艾蒿花粉及豚草花粉抗原发生反应 ,其中 ,同时发生反应的艾蒿花粉抗原有两条 ,分子量分别为 18kDa和 2 0kDa ;豚草花粉抗原有一条 ,分子量为18kDa。结论　艾蒿花粉与豚草花粉提取液蛋白组分差异较大 ,前者更复杂 ;但两者间存在共同抗原 ,可发生交叉过敏。; 吴晓蔓黄妩姣; 关键词：抗原成分蒿属花粉浸液显带考马斯亮蓝染色豚草

椰子花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：2: 2009年; 目的:克隆并表达椰子花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(Profilin)。方法:利用RT-PCR结合RACE技术克隆椰子花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个椰子花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了椰子花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。经分析,这个序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.61,分子量约为14 kD。此序列已被GeneBank收录,登陆号为EF173598。重组椰子花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达和纯化后,经Western blot检测具有良好的免疫学活性。结论:成功地克隆和表达了椰子花粉profilin,为该花粉profilin用于椰子花粉过敏诊断和免疫治疗提供了理论依据。; 孟光姚敏刘志刚邬玉兰张红云; 关键词：PROFILIN 基因表达纯化

短穗鱼尾葵花粉泛过敏原profilin基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：9: 2007年; 目的克隆并表达短穗鱼尾葵花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆短穗鱼尾葵花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短穗鱼尾葵花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western-blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了短穗鱼尾葵花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。该序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.52,相对分子质量约为14200。此序列已被GenBank收录,登陆号为EF173600。重组短穗鱼尾葵花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western-blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了短穗鱼尾葵花粉profilin,为短穗鱼尾葵花粉过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。; 刘晓宇邬玉兰刘志刚孟光张红云; 关键词：PROFILIN 基因表达纯化

花粉重组变应原的研究现状: 2004年; 分子克隆技术应用以来,出现了许多具有免疫活性的花粉重组变应原,这不仅改进了花粉过敏性疾病的诊断和特异性免疫治疗方法,也使花粉变应原的分子和生化特征的鉴定取得了很大进展。本文综述了变应原已被克隆和测序的树木(tree)花粉、牧草(grass)花粉和杂草(weed)花粉的研究现状。; 黄妩姣吴晓蔓刘志明; 关键词：花粉重组变应原

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广东省自然科学基金(020738)