江苏省科技支撑计划项目(BE2012609)
- 作品数：5 被引量：28H指数：4
- 相关作者：吕恒王长军张锦海王平顾海涛更多>>
- 相关机构：南京军区疾病预防控制中心南京医科大学中国人民解放军南京军区更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型布尼亚病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立被引量：5
- 2016年
- 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反应条件,根据HNB颜色变化进行结果判定,评估LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP方法最低检出限为10拷贝/反应管;方法的特异性高,仅SFTSV反应管颜色由紫罗兰变为天蓝色,而汉坦病毒、新疆出血热、Q热、马尔堡、埃博拉病毒及阴性对照反应管均未发生变色反应;LAMP反应的最佳温度为63℃,其扩增效率高于常规PCR,试验过程仅需30min。结论建立的可视化SFTSV LAMP检测方法具有特异性强,灵敏性高,实验设备要求简单等优点,可用于SFTSV的快速检测。
- 吕恒钟璟浩张锦海王平王长军
- SARS冠状病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立SARS冠状病毒可视化快速检测方法。方法针对SARS冠状病毒RNA聚合酶编码基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入钙黄绿素作为LAMP扩增反应指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据钙黄绿素的颜色变化进行结果判定,评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性。结果本方法最低检出限约为10拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅SARS冠状病毒反应管钙黄绿素颜色由褐色变为黄绿色,而甲型H1N1病毒、高致病性H5亚型禽流感病毒、普通流感病毒均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,35 min内出结果。结论所建立的基于颜色判定的SARS病毒检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于SARS冠状病毒现场快速检测。
- 吕恒张锦海陈凤娟顾海涛王平王玉邦王长军
- 关键词：SARS病毒钙黄绿素
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速可视化检测被引量：8
- 2013年
- 目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。
- 吕恒张锦海顾海涛王平王长军王玉邦
- 关键词：环介导等温扩增
- 实时荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒被引量：2
- 2012年
- 目的建立快速检测H5亚型禽流感病毒HA基因的实时荧光定量RT-PCR方法,为禽流感病毒的监测和感染的预防控制提供科学的技术手段。方法针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与荧光探针;通过体外克隆技术获得阳性定量标准品;优化探针、引物浓度、反应体系与反应条件,提高检测方法的特异性、敏感性与重复性,并进行定量分析。结果反应体系具有良好的扩增效率,80 min内可完成扩增检测工作;检测灵敏度为100拷贝/反应,通过外标准品建立的标准曲线在一条直线上;3个外标准品的变异系数(CV)分别为2.60%、2.47%、2.44%;H5亚型禽流感病毒培养液、确诊人感染高致病性禽流感患者标本为阳性扩增结果,而其它流感病毒临床标本及阴性对照均呈阴性。结论本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法具有敏感、快速、重复性好的特点,适合于H5亚型禽流感病毒的快速定量检测。
- 吕恒张锦海王长军顾海涛王平鲁娟东
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR血凝素基因
- 军团菌检测方法概述被引量：7
- 2014年
- 军团菌(Legionella)是一种革兰阴性致病菌,广泛存在于天然淡水环境和人工水系中,并引起人呼吸道急性感染,可作为生物战剂使用。目前已知军团菌有58个种,3个亚群,70多种血清型,与人类疾病相关的有24种,嗜肺军团菌(L.pneumophila,LP)是引起军团菌肺炎的主要病原菌。由于军团菌病暴发范围广,严重威胁人类健康,因此越来越受到人们的关注。本文就目前军团菌检测方法作一综述,主要包括细菌培养法、免疫学方法和分子生物学方法。
- 吕恒张锦海陈凤娟顾海涛王平王长军
- 关键词：军团菌
