国家自然科学基金(30300127)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
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- HMGN2分子体外抗乙型肝炎病毒活性研究
- 2009年
- 目的:我们先前的研究证明HMGN2(high mobility group nucleosomal-binding domain2)是人LAK细胞抗菌的一个新的效应分子,本研究欲检测其体外抗乙型肝炎病毒的活性。方法:应用反向高效液相色谱技术从人淋巴结组织酸溶性提取物中分离纯化批量HMGN2分子,用质谱精确分子量测定、Western blotting和抗菌试验对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。采用MTT法检测HMGN2分子对稳定转染复制型HBV重组质粒的肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞的细胞毒性;用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2.2.15细胞,分别在第3d和第6d收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的含量。结果:从人淋巴结组织中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白;在检1-100mg/L范围内,HMGN2分子对HepG2.2.15细胞无细胞毒性;HMGN2分子在1-5mg/L水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,可显著降低HBVDNA拷贝数。结论:HMGN2分子在体外具有较强的抗HBV活性。
- 孔祥丽张平何芳张敏唐红冯云吴琦黄宁王伯瑶
- 关键词：HMGN2抗病毒活性肝炎病毒乙型
- 重组人HMGN2多克隆抗体的制备及应用被引量：1
- 2005年
- 目的制备人高迁移率非组蛋白N2(HMGN2)多克隆抗体,并用于HMGN2的亚细胞定位分析。方法提取人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)总RNA,应用RT-PCR从其总RNA中分离HMGN2cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMGN2基因大肠杆菌表达载体。应用GST亲合层析柱分离GST-HMGN2融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化。用ELISA法检测HMGN2抗体,免疫细胞化学染色法分析HMGN2的亚细胞分布。结果经酶切产物电泳分析和DNA序列测定证明成功构建出HMGN2基因重组原核表达载体pGEX-1λT-HMGN2。转化大肠杆菌经异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得相对分子质量约35×103的GST-HMGN2融合蛋白。该融合蛋白免疫所得免疫血清经ELISA检测显示获得滴度为1∶2000的较高效价的兔抗人HMGN2多克隆抗体。并应用此抗体对THP-1细胞进行的免疫细胞化学染色显示,经LPS刺激后除细胞核外,胞浆亦明显着色。而且用ELISA法在细胞培养液亦检测到HMGN2。结论本实验成功制备出HMGN2特异多克隆抗体,免疫细胞化学分析初步证明在LPS刺激下HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核,还分布于细胞浆,并可释放到细胞外。
- 熊文碧冯云王国兴黄宁吴琦李绚王伯瑶
- 关键词：多克隆抗体单核吞噬细胞亚细胞定位
- HMGN2重组表达质粒的构建及其抗乙型病毒性肝炎的病毒活性被引量：3
- 2014年
- 目的构建HMGN2重组表达载体并观察高迁移率蛋白HMGN2分子的抗乙型病毒性肝炎的病毒作用。方法用基因克隆的方法,构建pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒;用亲和层析的方法,纯化His-HMGN2融合蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBV DNA转染的细胞株HepG2.2.15细胞为模型,用ELISA检测HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg),用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果成功构建了pET-32a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,降低HBV DNA拷贝数。结论 HMGN2在体外细胞培养中有直接抗HBV的活性。
- 张敏张远童荣生
- 关键词：重组表达质粒
- 人单核细胞株THP-1中HMGN2的分离纯化及其抗乙型肝炎病毒活性
- 2014年
- 目的：从人单核细胞株THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽，应用HepG2．2．15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型，以探讨HMGN2分子的抗HBV作用。方法：采用HPLC分离纯化，Tricine-SDSPAGE电泳、质谱精确分子量测定、Westernblotting对分离纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBVDNA转染的细胞株HepG2．2．15细胞为模型，用不同浓度HMGN2分子作用于HepG2．2．15细胞，分别在第4天和第8天收集细胞培养上清液，ELISA检测上清中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg），采用实时荧光定量PCR法检测上清液HBVDNA的含量。结果：从人单核细胞株THp-1中分离纯化获得纯度较高的HMGN2蛋白；其在1-100mg·L-1范围内，对HepG2．2．15细胞无细胞毒性；HMGN2蛋白分子在1-5mg·L-1水平即可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达，可显著降低HBVDNA拷贝数，继续增加剂量抗病毒效果不再明显增加。结论：HMGN2在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。
- 张敏张远童荣生
- 关键词：HMGN2分离纯化抗HBV
- 人单核细胞系THP-1中HMGN2的分离纯化及其抗菌活性被引量：4
- 2013年
- 目的从人单核细胞系THP-1中分离与纯化HMGN2抗菌肽,应用微量琼脂糖弥散法检测抗菌活性,以探讨HMGN2分子的抗菌作用。方法采用HPLC分离纯化,琼脂糖弥散法筛选纯化有抗菌活性的组分,用Tricine-SDS-PAGE电泳初步测定其分子质量,以质谱法进行分子质量的精确分析。结果从人THP-1细胞中分离纯化出HMGN2抗菌肽,琼脂糖弥散法检测显示其对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抑菌活性,对大肠杆菌标准株ATCC25922和临床分离株54080亦有较强的抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌ATCC25923未检测出抗菌活性。结论 HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。
- 张敏冯云
- 关键词：HMGN2抗菌肽分离纯化
- 高迁移率蛋白-17(HMG-17)基因重组多肽的制备及其抗菌结构域的研究被引量：1
- 2005年
- 为构建HMG-17原核表达系统,研究HMG-17抗菌功能与结构的关系,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR扩增HMG-17和HMG-17α螺旋结构成熟肽cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMG-17和HMG-17α螺旋结构基因大肠杆菌表达载体。该载体表达的融合蛋白GST-HMG-17和GST-HMG-17α经亲合层析、凝血酶酶切、AU-PAGE胶回收后获得高度纯化的HMG-17和HMG-17α肽,对纯化产物进行MEC、MIC、MBC等试验,与杀菌活性较强的抗菌肽HNP-1、NP-1进行活性对比,证明其具有较强的杀菌活性,且具有盐敏感性。并证明了HMG-17的α结构域是HMG-17的主要抗菌功能区域。
- 冯云杨华蓉黄宁吴琦鲍朗王伯瑶
- 关键词：抗菌功能结构基因融合蛋白结构域迁移率
- 人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定被引量：7
- 2005年
- 为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.
- 冯云熊文碧王国兴黄宁吴琦鲍朗李绚王伯瑶
- 关键词：LAK细胞HMGN2抗菌活性
