国家自然科学基金(30571622) 作品数:7 被引量:52 H指数:5 相关作者: 黎源倩 渠凌丽 李永新 何玲 何成艳 更多>> 相关机构: 四川大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 理学 医药卫生 更多>>
多响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测食源性致病菌 被引量:6 2009年 建立了食品中常见致病菌:沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR产物-毛细管电泳快速检测方法.根据沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺菌及副溶血性弧菌的特异性基因保守序列设计出多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系.采用多响应曲面法优化毛细管电泳的分离条件,以含有DNA荧光染料SYBR GreenⅠ的1.0%甲基纤维素为筛分介质,通过毛细管电泳-激光诱导荧光同时检测4种常见致病菌的PCR扩增产物.在优化的多重PCR反应体系和毛细管筛分电泳条件下,此方法可以同时检测出沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR扩增产物,25 min内即可完成检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%~1.58%.通过多响应曲面的优化,有效改善了毛细管电泳对DNA分子的分离能力. 渠凌丽 黎源倩 郑波 何成艳 何玲 李永新关键词:毛细管电泳 激光诱导荧光检测 食源性致病菌 多重PCR 非水毛细管电泳-化学发光法测定食品包装材料中酚类环境激素 被引量:13 2009年 建立食用包装材料中的双酚A、壬基酚等多种环境激素的非水毛细管电泳-化学发光分析方法。食品包装材料样品浸出物中的双酚A、烷基酚等环境激素经衍生剂DIB-Cl衍生后,经过非水毛细管电泳分离后,分别与过氧草酸酯化学发光反应体系作用,光信号经过光电倍增管接收放大后被检测。以雌二醇(17β-E2)为内标,以相对迁移时间定性,相对发光强度比定量,内标校准曲线法测定样品浸出物中待测物的含量。对影响非水毛细管电泳分离如溶剂组成和比例、电解质浓度、温度、乙酸浓度、电泳电压等条件进行了优化。同时对化学发光体系也进行了优化。4-叔丁基酚、双酚A、4-叔辛基酚、4-壬基酚和四溴双酚A分别在0.0095~3.0mg/L,0.0087~3.0mg/L,0.0085~3.0mg/L,0.011~3.0mg/L和0.009~3.0mg/L范围内线性良好,r>0.9947。相对迁移时间和相对峰高的RSD分别为0.88%~2.96%和6.54%~8.57%。加标回收率为86.7%~98.8%。对5种常见的食品包装材料样品进行了测定,所建立的方法简便、快速、灵敏,适合于食品包装材料中酚类环境激素的检测。 肖全伟 黎源倩 邹晓莉关键词:环境激素 食品包装材料 非水毛细管电泳 化学发光 食品中沙门菌和单增李斯特菌的多重PCR-芯片电泳快速检测 被引量:3 2012年 建立了食品中沙门菌和单增李斯特菌的多重PCR-芯片电泳快速检测方法。根据沙门菌和单增李斯特菌的特征基因合成2对特异性引物,优化聚合酶链反应(PCR)体系,采用芯片毛细管电泳快速检测食品中上述2种致病菌的多重PCR扩增产物。在优化的实验条件下,6 min内即可完成沙门菌和单增李斯特菌的同时检测;迁移时间的日内精密度为0.20%~1.7%,日间精密度3.7%~4.5%。 李永新 黎源倩 何玲 渠凌丽关键词:食品 致病菌 多重PCR 微流控芯片-激光诱导荧光快速检测4种食源性致病菌 被引量:18 2008年 建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法。根据副溶血弧菌的Vpara(16S-23SrDNAIGS)基因、沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157:H7的rfbO157基因和志贺菌的ipaH基因序列设计了4对特异性引物,对上述致病菌进行四重PCR扩增,采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重PCR扩增产物。优化了多重PCR扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件。当芯片电泳的筛分介质HPMC-50浓度为2.2%、溴乙锭(EB)含量为3.75μmol/L、电场强度为120V/cm时,pUC Mix DNA Marker8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离,600S内即可完成上述4种致病菌的同时检测,迁移时间的日内相对标准偏差为0.74%~2.09%。本方法能够检出1×10^2cfu/mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌O157:H7和志贺菌。方法特异性高,所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段。将本法应用于食品中上述致病菌的测定,获得了满意的结果,为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段,对保障食品安全具有重要的现实意义。 李永新 黎源倩 渠凌丽 何成艳关键词:微流控芯片 激光诱导荧光检测 食源性致病菌 多重聚合酶链反应 多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌 被引量:6 2007年 建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157:H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应(PCR)产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。 毛红霞 黎源倩 裴晓方 何超 渠凌丽关键词:多重聚合酶链反应 毛细管电泳法 激光诱导荧光检测 食源性致病菌 毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展 被引量:1 2012年 大量的转基因生物体作为食品进入人们的生活,灵敏、快速、特异的检测方法对保护消费者的知情权和选择权、保障转基因标签制度的顺利实施起到了举足轻重的作用。毛细管电泳和芯片电泳作为新兴的分离技术,以其高通量、高灵敏度、快捷低耗的优势弥补了传统凝胶电泳的不足。对目前常用的转基因食品检测方法进行归纳和评价,并重点综述了近年来毛细管电泳与芯片电泳技术在转基因食品检测中的研究进展。 李永新 黎源倩 何玲 李灿关键词:转基因食品 毛细管电泳