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菠萝抗寒细胞株系的筛选: 菠萝是世界三大热带果树之一,不耐寒冷,7℃时便出现叶片枯黄等寒害现象,3℃持续24 h时几乎所有品种都会出现不同程度的茎尖分生组织坏死和茎叶腐烂等现象。中国菠萝栽培区是菠萝北缘产区,尤其是栽培面积在80%以上大陆产区,冬...; 何业华张雅芬夏靖娴郭翠红曹莉张俊丽; 关键词：菠萝体细胞胚抗寒细胞系; 文献传递

菠萝愈伤组织中体细胞胚起源过程的组织细胞学观察被引量：17: 2010年; 以菠萝(Ananas comosus)'神湾'品种为材料,采用石蜡切片法对其愈伤组织中球形胚形成过程进行了组织细胞学观察。结果表明,非胚性愈伤组织转入到MS+4.0mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA培养基培养后,愈伤组织中先出现一些胚性细胞;然后单个胚性细胞分裂形成一个由多细胞组成的原胚。原胚细胞分生能力强,与周围的母体组织之间形态差异显著,界限明显,其下部形成一个类似胚柄的结构。随着原胚不断生长,其形状由长椭圆形发展成倒卵形,最后逐渐形成表面较光滑、外观近球形的球形胚,并在'胚柄'基部与母体组织连接处形成离层。与此同时,球形胚内出现细胞分化。菠萝体细胞胚发生具有内、外两种起源方式,另外愈伤组织中体细胞胚发生普遍存在着不均匀、不同步和次生胚等现象。; 何业华方少秋马均胡中沂卢敏彭兵; 关键词：菠萝胚性细胞体细胞胚组织细胞学

菠萝SERK基因的克隆与表达分析: 在建立菠萝(Ananas comosus)体细胞胚发生体系和细胞学研究的基础上,对其体细胞胚发生类受体蛋白激酶(SERK)基因进行了克隆和表达分析,旨在探讨菠萝中SERK基因的存在状况、解析其结构和表达特征。以‘神湾’菠...; 马均何业华曹莉许文天郭翠红夏靖娴陈程杰; 关键词：菠萝克隆; 文献传递

菠萝AcSERK1启动子的克隆及其初步活性分析被引量：3: 2015年; 【目的】探讨Ac SERK1启动子的活性,为进一步研究Ac SERK1转录调控的分子机制提供依据。【方法】利用hi TAIL-PCR法从菠萝基因组DNA中分离Ac SERK1启动子序列,并利用Plant Care和PLACE分析该序列的顺式作用元件。将启动子与GUS融合,农杆菌真空渗透法浸染烟草叶片后,光照处理、暗处理和0.5 mg·L^(-1)2,4-D处理36 h后利用组织化学染色法检测GUS活性。【结果】克隆了Ac SERK1上游2097bp启动子序列,命名为P_(Ac SERK1)。预测结果显示,该序列除含有TATA-box、CAAT-box等真核生物启动子核心元件外,还含有生长素、赤霉素和茉莉酸甲酯等激素响应元件,高温和低温胁迫响应元件以及光响应元件。瞬时表达结果表明,在光和2,4-D的诱导下P_(Ac SERK1)具有启动基因表达的功能。【结论】分离获得了Ac SERK1启动子序列且该启动子在光和2,4-D诱导下能驱动GUS的表达。; 林文秋陈程杰何业华栾爱萍张俊丽冯筠挺张雅芬许文天; 关键词：菠萝启动子

菠萝SERK1 5’上游-921 nt/-881 nt区候选结合蛋白AcSET3和AcRBL的鉴定: 菠萝（Ananas comosus L.）为凤梨科多年生草本植物,是世界重要的热带果树之一。本课题组前期一系列的研究表明:Ac SERK1是菠萝体细胞胚发生受体类激酶基因,其TSS上游-921 nt/-881 nt区具有...; 丁雅琦; 关键词：菠萝; 文献传递

菠萝SERK5’调控序列的克隆及载体构建: SERK是体细胞胚发生早期特异表达的标记基因,而菠萝(Ananas comosus)中存在着3个AcSERKs,但只有AcSERK1在非胚性细胞向胚性细胞转变的过程中特异性表达。因此,本试验克隆了AcSERKs 5′上游...; 栾爱萍何业华林文秋许文天陈程杰; 关键词：菠萝; 文献传递

菠萝全转录组的研究初报: 从转录水平上研究菠萝(Ananas comosus)基因的表达情况,对揭示其特定生物学过程的分子机理有着重要意义。国内外仅见Ong等(2012)报道菠萝果实转录组,通量仅350 M。本课题组对菠萝不同器官及其体细胞胚发生...; 陈程杰何业华林文秋栾爱萍张雅芬; 关键词：菠萝转录组 SSR; 文献传递

菠萝AcSERK1启动子的转录起始位点及胚性细胞特异性鉴定被引量：2: 2016年; AcSERK1是菠萝(Ananas comosus)体细胞胚发生初期特异表达的基因,为探讨其转录调控规律,对其5′上游调控序列的转录起始位点及启动特性进行了鉴定。采用hiTAIL-PCR技术从菠萝基因组DNA中克隆了AcSERK1完整的5′上游调控序列,利用5′RACE技术鉴定出其转录起始位点位于起始密码子(ATG)上游258 nt(G)处。以AcSERK1 5′上游完整调控序列取代pBI121中的CaMV 35S启动子,构建植物表达载体AcSERK1(–2090/+258)︰︰GUS,并在菠萝不同组织器官中进行瞬时转化分析,发现AcSERK15′上游完整的调控序列(–2090/+258)能够启动GUS在胚性细胞中特异性表达,与AcSERK1表达规律相同,说明该启动子为胚性细胞特异性启动子,对调控外源基因在体细胞胚早期特异表达有重要意义。; 栾爱萍何业华林文秋陈程杰冯筠庭谢桃龚雪夏靖娴; 关键词：菠萝启动子转录起始位点

根癌农杆菌介导CYP1A1转化菠萝的研究被引量：4: 2010年; 将菠萝(Ananas comosus)愈伤组织经含有植物表达重组质粒(pUHA1-CYP1A1)的根癌农杆菌(LBA4404菌株)侵染后,在MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+100μmol/LAS+8g/Lagar上共培养3d,转入选择培养基(MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+20mg/LKm+400mg/LCarb+8g/Lagar)上培养约10d后开始分化出不定芽;28d后将绿色的抗Km不定芽转入MS+2.0mg/LNAA+30mg/LKm+300mg/LCarb+8g/Lagar上再进行连续2轮选择,随后将绿芽转入MS+1.0mg/LIBA+30mg/LKm+8g/Lagar上生根,共获得95株Km抗性植株,转化率0.12%～2.69%.对其中部分的抗Km植株进行PCR检测,PCR阳性植株率达64.29%.经Southern杂交进一步证实,CYP1A1已整合到菠萝基因中.以琼脂为培养基凝固剂、共培养基中添加AS、增加选择次数和逐渐增加新一轮选择培养基中的Km质量浓度等是根癌农杆菌介导菠萝愈伤组织获得转基因植株的重要条件.; 何业华吴会桃罗吉方少秋马均卢敏彭兵伍成厚; 关键词：菠萝 CYP1A1 根癌农杆菌

甲基化抑制剂在菠萝体细胞胚发生同步化调控中的作用: 获得不同发育阶段均匀一致的体细胞胚是实现植物人工种子生产的前提条件。甲基化抑制剂5-氮杂-胞嘧啶核苷(5-Aza-CdR)会阻止甲基基团向腺嘌呤或胞嘧啶转移，导致DNA甲基化反应受阻，使基因组DNA甲基化水平降低，功能基...; 栾爱萍何业华郭翠红毛琪谢桃龚雪陈程杰; 关键词：菠萝体细胞胚甲基化抑制剂同步化显微观察

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