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国家教育部博士点基金(20124404120007)
国家教育部博士点基金(20124404120007) 作品数:5 被引量:35 H指数:4 相关作者: 王加峰 陈志强 刘浩 王慧 蔡坤 更多>> 相关机构: 华南农业大学 昆士兰大学 更多>> 发文基金: 国家教育部博士点基金 国家级星火计划 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
水稻抗稻瘟病蛋白Pik_2-H4基因的克隆及互作蛋白的筛选 被引量:6 2014年 Pik2-H4是从水稻高抗稻瘟病株系H4中克隆的广谱型抗稻瘟病基因。Pik2-H4基因的CDS全长序列3066 bp,与日本晴中的等位基因相比,其序列存在较大差异。Pik2-H4属于NBS-LRR类基因,其蛋白序列含有NBARC结构域及富亮氨酸重复序列。采用酵母双杂交系统,以Pik2-H4蛋白为诱饵从水稻cDNA表达文库中钓取互作蛋白质,并成功筛选到3个与Pik2-H4有相互作用的蛋白质(LOC-Os08g39300、LOC-Os03g25960、LOC-Os09g29130)。本研究结果有助于进一步了解由Pik2-H4介导的水稻抗稻瘟病反应机理。 刘浩 王加峰 孙大元 王慧 陈志强关键词:克隆 酵母双杂交 水稻NBS-LRR类抗稻瘟病基因研究进展 被引量:8 2014年 稻瘟病是水稻生产上危害最严重的病害之一,针对该病的抗性基因在水稻中大多编码NBS-LRR类抗病蛋白质,该类蛋白质能够识别病原菌关联分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMP),参与调控效应蛋白质激活免疫反应(Effector-triggered immunity,ETI)。NBS-LRR类蛋白质结构多样、功能复杂,它们在植物抗病过程中扮演了重要的角色。本文主要对NBS-LRR类蛋白质的结构与功能、NBS-LRR类抗稻瘟病基因的克隆进展、NBS-LRR类蛋白质介导的信号传递途径以及目前研究中存在的问题进行了介绍。 刘浩 陈志强 王加峰关键词:稻瘟病 抗性基因 信号传导 基于RC网络相频特性的土壤含水率传感器设计 被引量:12 2013年 土壤中的水分影响土壤养分的溶解、转移和微生物的活动,是作物赖以生存的基本要素。土壤含水率的快速准确监测对于农业生产具有重要意义。该文设计了一种基于RC网络相频特性的土壤含水率传感器。不同含水率的土壤的介电常数的变化会导致RC电路网络的相频特性的变化。传感器通过感知这种变化进而确定土壤含水率。此外,针对RC网络电路元件参数和工作频率选择的问题,该文采用最优化方法求解从而使传感器在量程范围内具有最佳的灵敏度。其中最优的工作频率为f*=1.9412×108Hz,最优的串联电阻R*=13.1Ω。试验表明,该传感器对砖红壤土含水率的预测模型的决定系数R2为0.9889,实际预测误差≤4.58%。 蔡坤 岳学军 洪添胜 徐兴 黄双萍关键词:传感器 土壤含水率 RC网络 相频特性 水稻NBS-LRR类抗稻瘟病蛋白Pik-h的互作蛋白筛选 被引量:9 2016年 【目的】利用酵母双杂交系统,以组成抗稻瘟病基因Pik-h的2个紧密连锁且功能独立的Pikh-1和Pikh-2蛋白为诱饵,在水稻叶片中筛选与之互作的蛋白,以便深入研究抗病基因Pik-h介导的抗病反应途径。【方法】以含抗稻瘟病基因Pik-h的近等基因系IRBL8为材料,取稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)GD0193接种12和24 h后的水稻叶片,等量混合后提取总RNA,按照酵母双杂交试剂盒(Make Your Own"Mate&Plate"Library System)的要求构建水稻叶片靶标c DNA文库。利用快速重组克隆的方法构建p GBKT7-Pikh1和p GBKT7-Pikh2诱饵载体,并分别将它们转化至酵母菌株Y2H Gold,提取细胞总蛋白后利用Western blot检测Pikh1和Pikh2的表达情况,并对这2个诱饵载体自激活和毒性分析后进行酵母双杂交筛选。提取SD/-Ade/-Leu/-Trp/-His/X-α-Gal筛选平板培养基上呈蓝色的酵母单克隆的质粒,将其分别与对应的诱饵载体共转化酵母菌株Y2H Gold,涂布于筛选平板培养基上进行互作的重复验证,将通过重复验证的质粒测序分析所得的序列比对水稻基因组数据库以确定目的基因,并对这些基因进行gene ontology(GO)注释分析以确定其分子功能、生物过程及细胞组成。【结果】靶标c DNA文库的库容量约为2.2×10~6,插入片段长度均大于400 bp,表明水稻c DNA文库质量高。诱饵载体p GBKT7-Pikh1和p GBKT7-Pikh2均能在酵母细胞中正确表达出对应的Pikh1及Pikh2蛋白,无自激活活性而且对酵母无毒性作用,符合文库筛选的要求。利用含有诱饵载体的酵母菌株Y2H Gold与靶标文库菌株Y187结合(Mating)的方式筛选,获得13个与Pikh-1相互作用的蛋白、5个与Pikh-2相互作用的蛋白,其中有2个与Pikh-1及Pikh-2同时存在相互作用。这些蛋白包括4个在逆境响应或激素信号转导过程中起到重要作用的(辅)转录因子、3个信号蛋白、4个参与光合作用的叶绿体蛋白、1个含有U-BOX结构 王加峰 刘浩 王慧 陈志强关键词:水稻 Cloning of Rice Blast Resistance Gene Pik_2-H4 and Screening of Its Interaction Protein 2014年 Abstract The broad-spectrum rice blast resistance gene Pik2-H4 was cloned from the highly resistant line H4. The full-length sequence of Pik2-H4 was 3 066 bp, which was different from the corresponding allele sequence of Nipponbare. Pik2-H4 belonged to NBS-LRR genes and coded a protein containing NB-ARC domain and leueine-rieh repeats. To find the interaction proteins with Pik2-H4 from the rice, the yeast two-hybrid system was used and three important proteins ( LOC- Os08939300, LOCOs03g25960 and LOC-Os09929130)were identified. The results could provide some new information for the mechanism of rice blast resistance mediated by Pik2-H4. Liu Hao Sun Dayuan Wang Hui Chen Zhiqiang关键词:CLONE