海南省教育厅高等学校科学研究项目(Hj2008-09)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：翟金玲黄惜高艳梅黄文峰徐远峰更多>>
- 相关机构：海南大学中国热带农业科学院更多>>
- 发文基金：海南省教育厅高等学校科学研究项目海南省自然科学基金海南省耐盐作物生物技术重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学理学更多>>
- 利用GATEWAYTM技术构建番木瓜环斑病毒CP基因的RNAi表达载体
- 针对传统的通过酶切和连接的构建方法相当耗时费力等缺点,以番木瓜环斑病毒 CP 基因为供试材料,利用 GATEWAY技术快速高效构建双链 RNA 的表达载体的方法,即利用λ噬菌体插入/切除特异序列重组系统将目标基因序列插入...
- 翟金玲高艳梅徐远峰罗越华邓用川林栖凤黄惜
- 关键词：RNAI番木瓜环斑病毒
- 文献传递
- 一种快捷有效的构建cDNA文库的方法
- 2009年
- 构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段，传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列，通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端，然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括：（1）通过反转录合成cDNA第一条链，通过置换底物的方式在cDNA3’末端合成接头序列。（2）利用cDNA两端的接头引物，通过TaqDNA合成酶PER扩增合成cDNA第二条链。（3）将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。（4）将连接物转化大肠杆菌，得到cDNA文库。利用本方法，我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在O．5～3．0kb之间，大部分cDNA的长度在500—1000bp之间，表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点，而且适用于任何高等生物RNA样品。
- 徐远峰黄文峰高艳梅翟金玲黄惜
- 关键词：红海榄CDNA文库
- 利用GATEWAY^(TM)技术快速构建番木瓜环斑病毒HC-pro基因的RNAi表达载体被引量：1
- 2009年
- 通过RT-PCR扩增番木瓜环斑PRSV病毒HC-pro基因,序列比对结果表明,克隆到的该基因片段与已知的海南或华南地区已克隆的HC-pro基因只有约92%的同源性,说明PRSV病毒具有较大的变异性。为了培育番木瓜转基因抗病植株,利用pWATERGATE载体和GATEWAYTM技术,成功构建了番木瓜环斑病毒HC-pro基因的RNAi表达载体。具体步骤如下:①设计带特异性重组序列attB的HC-pro基因PCR的引物;②利用该引物进行RT-PCR扩增HC-pro基因;③通过BP反应,将扩增得到的HC-pro基因序列插入入门载体pDONR201中;④通过LR反应将HC-pro基因序列从pDONR201重组到目标载体pWATERGATE中,得到PRSVHC-pro基因的RNAi表达载体。
- 高艳梅翟金玲黄惜
- 关键词：番木瓜环斑病毒RNAIHC-PRO基因
