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国家科技支撑计划(2006BA102A12)
作品数:
7
被引量:4
H指数:1
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高军
李兆申
龚燕芳
杜奕奇
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第二军医大学
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解放军第40...
作者
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李兆申
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高军
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龚燕芳
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杜奕奇
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满晓华
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2011
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2010
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2009
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人胰腺癌编码SUFU蛋白的新剪接体
2013年
目的分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体。方法用反转录和3’cDNA末端快速扩增(3’RACE)法扩增suppresseroffused(SUFU)片段,测序发现一个新的外显子,应用RT—PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU(nSUFU)。采用脂质体法将nSUFU及SUFU转染SWl990细胞,应用蛋白质印迹法检测SWl990细胞及胰腺癌组织新剪接体编码的蛋白质的表达。结果通过3’RACE法的第二轮巢式PCR扩增产物约600bp,经测序并将其序列与NCBI网站Blast序列对比分析发现,在SUFUmRNAisoforml(NM_016169.3)的第10外显子和第11外显子之间插入了一个长为126bp的新外显子。通过对SWl990细胞的验证,包含新外显子的完整的新剪接体片段长约1400bp。转染nSUFU的SWl990细胞强表达nSUFU蛋白,胰腺癌组织既表达SUFU蛋白,又表达nSUFU蛋白。结论人类胰腺癌组织和细胞中存在一种新的可以编码SUFU蛋白的剪接体。
徐清
满晓华
高军
李兆申
龚燕芳
吴红玉
金晶
关键词:
胰腺肿瘤
HEDGEHOG信号通路
剪接体
SUFU
胰腺癌分泌型凋亡相关蛋白2基因第一外显子区甲基化模式及意义
2008年
目的研究胰腺癌分泌型凋亡相关蛋白2(SARP2)基因第~外显子区CpG岛甲基化模式及其与临床生物学特征的关系,为胰腺癌早期诊断及预后判断奠定基础。方法收集23例胰腺癌及相应癌旁组织、6例慢性胰腺炎和7例正常胰腺组织作为研究对象。抽提上述标本DNA进行亚硫酸氢盐修饰,聚合酶链反应扩增sARP2基因第一外显子区CpG岛区域,测序明确该区域CpG位点甲基化情况,并分析与临床生物学特征的关系。结果胰腺癌SARP2基因CpG位点甲基化率(37.9%)显著高于正常胰腺(O.O%)、慢性胰腺炎(2.5%)及癌旁组织(15.2%),差异有统计学意义(P值均〈0.05)。SARP2基因CpG岛1区甲基化具有较好的胰腺癌特异性。胰腺癌SARP2基因CpG岛1区CpG位点甲基化与性别、年龄、诱因、肿瘤大小、肿瘤分级、分期、转移无关(P值均〉O.05),但肿瘤直径较大者及分化程度较高者具有SARP2基因高甲基化趋势。结论胰腺癌SARP2基因第一外显子区基因CpG岛甲基化分布具有不均衡性,部分CpG位点高甲基化具有胰腺癌特异性.可作为胰腺癌基因诊断的靶点,且与一些临床生物学特征有关,可能对胰腺癌预后评估有一定价值。
宋健
高军
杜奕奇
曹佳
吕顺莉
许国铭
李兆申
龚燕芳
满晓华
关键词:
胰腺癌
甲基化
CPG岛
遗传学诊断
组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响
被引量:3
2009年
目的观察沉默组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)基因对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法培养胰腺癌PaTu8988细胞株,设空白对照组(未予任何处理)、阴性对照组[予30nmol/L阴性小干扰RNA(siRNA)]、HDACl低剂量组(予15nmol/LHDAC1s.RNA)和HDACl高剂量组(予30nmol/LHDAC1siRNA),siRNA转染48h后,分别采用相对实时定量PCR法和Western印迹法检测HDAC1基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率,细胞计数试剂盒法检测siRNA干扰前、后细胞增殖变化,流式细胞技术检测干扰前、后细胞凋亡变化。结果转染HDAC1siRNA48h后,低剂量组和高剂量组人胰腺癌PaTu8988细胞中HDAC1mRNA表达率分别为46.1%±6.1%和32.3%±1.4%,均显著低于空白对照组(100.0%±3.4%)和阴性对照组(87.4%±28.3%),差异有统计学意义(P值均〈0.05)。空白对照组和阴性对照组HDAC1蛋白表达水平高于其余两组。空白对照组、阴性对照组、HDAC1低剂量组和HDAC1高低剂量组的细胞存活率分别为100.0%±17.1%、87.1%±5.0%、68.7%±4.7%和61.6%±2.0%,细胞凋亡率分别为4.20%±0.95%、4.59%±1.26%、10.09%±1.36%和11.19%±6.07%,空白对照组和阴性对照组与其余两组比较,差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。结论HDAC1siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDAC1表达,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。
高道键
徐岷
张玉琦
杜奕奇
高军
龚燕芳
吴红玉
许国铭
李兆申
关键词:
胰腺肿瘤
RNA干扰
粪便Alu序列的检测在胰腺癌诊断中的价值
2011年
目的检测胰腺癌患者粪便Alu序列表达量,探讨其对胰腺癌的诊断价值。方法收集41例胰腺癌、27例慢性胰腺炎及23例健康者的粪便样本,采用酚一氯仿方法抽提粪便中基因组DNA,应用实时定量PCR方法检测Alu重复序列的表达量。结果胰腺癌、慢性胰腺炎、正常健康者粪便Alu重复序列表达量分别为(5.17±0.99)、(3.79±0.94)、(0.28±0.35)ng/g,三组间差异有统计学意义(P值均〈0.05)。通过接受者操作特征(ROC)曲线分析,胰腺癌的曲线下面积为74.8%,95%可信度为0.661~0.835,诊断胰腺癌的敏感性为75.6%,特异性为67.1%。结论胰腺癌患者粪便Alu序列表达量显著增加,对胰腺癌的诊断可能有一定价值。
任艳
高军
王小玮
刘建强
顾俊骏
金晶
龚燕芳
李兆申
关键词:
胰腺肿瘤
实时定量PCR
粪便
外周血SARP2基因甲基化检测对胰腺癌的诊断价值
被引量:1
2009年
目的探讨胰腺癌患者外周血DNA中SARP2基因甲基化对胰腺癌的诊断价值。方法收集12例原发性胰腺癌、10例慢性胰腺炎和6例健康志愿者外周静脉血,提取血清游离DNA,经亚硫酸氢盐修饰后,行SARP2基因第一外显子区域的BSP扩增和测序。结果12例胰腺癌外周血DNA、10例慢性胰腺炎外周血DNA中分别有10例(83%)和4例(40%)检测出明显的SARP2基因甲基化改变。胰腺癌患者外周血中SARP2基因第一外显子区CpG位点甲基化率为16.8%;慢性胰腺炎患者的甲基化率为10.4%,健康志愿者为2.2%。3组间的SARP2CpG岛甲基化率差别非常显著(P〈0.01或P〈0.05)。结论胰腺癌患者外周血DNA中可以检测到SARP2甲基化改变,SARP2甲基化的检测对胰腺癌的诊断可能有潜在的临床价值。
宋健
杜奕奇
吕顺莉
曹佳
高军
李兆申
龚燕芳
满晓华
关键词:
胰腺肿瘤
DNA甲基化
小干扰RNA组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞甲基化的作用研究
2011年
基因甲基化是抑癌基因失活的主要机制。胰腺癌中许多抑癌基因因CpG岛异常超甲基化而失活,如人类错配修复基因1(human mutLhomolog 1,hMLH1)、维甲酸受体β基因(retinoicacid receptor,RAR—β)等。组蛋白去乙酰化后的异染色质蛋白1(heterochromatin protein1,HP1)可募集DNA甲基转移酶,从而使基因启动子CpG岛甲基化。
高道键
徐岷
张玉琦
高军
龚燕芳
许国铭
李兆申
关键词:
组蛋白去乙酰化酶1
胰腺癌细胞
小干扰RNA
CPG岛甲基化
人类错配修复基因
DNA甲基转移酶
超声内镜细针穿刺研究胰腺组织中微小核糖核酸的表达及临床意义
2010年
目的 研究超声内镜(EUS)-细针穿刺(FNA)胰腺组织中微小核糖核酸(miRNA)的表达及临床意义.方法 用实时定量逆转录-聚合酶链反应方法 检测23例胰腺癌和13例胰腺良性占位病变的EUS-FNA组织标本中miRNA-210、miRNA-21、miRNA-196a、miRNA-181a、miRNA-181b、miRNA-155和miRNA-16的表达并分析其临床意义.结果 胰腺癌中miRNA-210、miRNA-21、miRNA-196a、miRNA-181a、miRNA-181b的相对表达量分别为0.86±1.10、0.69±0.64、0.32±2.50、0.16±0.83、0.56±0.88,均较胰腺良性占位病变中(分别为-0.11±0.98、-0.03±0.97、-1.50±1.40、-0.53±1.10、-0.28±1.10)显著升高,P值分别=0.012、0.011、0.024、0.036、0.015.miRNA-16、miRNA-155在胰腺癌组织和胰腺良性占位病变中的相对表达量分别为-0.11±0.69、0.08±1.04和-0.73±1.26、-0.19±1.19,差异均无统计学意义(P值分别=0.067和0.467).miRNA-196a高表达与胰腺癌淋巴结转移和TNM分期正相关.结论 胰腺癌发生中存在多条miRNA异常高表达,其中miRNA-196a与胰腺癌临床恶性特征相关.
王小玮
高军
刘建强
任艳
金震东
杜奕奇
李兆申
关键词:
胰腺肿瘤
微小核糖核酸
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