重庆市自然科学基金(cstc2011jjA10035)
- 作品数：6 被引量：21H指数：4
- 相关作者：宋方洲武向梅刘革力邓小园卜友泉更多>>
- 相关机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA介导的Bmi-1基因沉默对乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭迁移的影响被引量：4
- 2014年
- 目的:利用小干扰RNA技术沉默Bmi-1基因的表达,探讨其对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭转移能力的影响。方法:设计并化学合成了针对Bmi-1的小干扰RNA,转染具有高转移性的MDA-MB-231细胞,利用qRT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达水平。体外通过Transwell小室、Matrigel胶模型﹑流式细胞术,观察Bmi-1被沉默后对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生物学行为的影响。结果:qRT-PCR和Western结果显示,Bmi-1-siRNA转染组Bmi-1基因表达水平被有效抑制。与对照组相比,Bmi-1-siRNA转染组的细胞侵袭转移能力明显下降,细胞周期发生明显变化,细胞的增殖受到明显抑制。结论:抑制Bmi-1基因的表达可明显抑制MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力。
- 李海玉武向梅陈兴凤李韵樊建军刘革力宋方洲
- 关键词：BMI-1RNA干扰迁移
- 沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：5
- 2012年
- B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertionsite 1,Bmi-1)基因是多梳基因家族成员,参与细胞增殖调控.研究发现Bmi-1基因可能参与肿瘤的形成,可能成为肿瘤潜在的治疗靶点.用RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默Bmi-1基因表达观察其对乳腺癌细胞株MCF-7侵袭和转移等生物学特性的影响,以探讨Bmi-1在乳腺癌发生发展中的作用.PT67细胞包装质粒后产生的逆转录病毒感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株,稳定抑制Bmi-1的细胞株命名为MCF-7/Bmi-1si.通过RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Bmi-1的表达量;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭和转移能力.MCF-7/Bmi-1si组与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,Bmi-1 mRNA和蛋白表达量明显减少,克隆形成数及形成率也明显减少(P<0.05).侵袭和转移实验表明:与MCF-7和MCF-7/GFPsi组相比,MCF-7/Bmi-1si组细胞在Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数明显减少(P<0.05).结果表明沉默Bmi-1基因表达稳定细胞株构建成功,Bmi-1基因表达的沉默能显著降低MCF-7细胞的体外增殖及侵袭转移能力.
- 武向梅余华荣卜友泉易发平汪长东刘革力苟小燕邓小园宋方洲
- 关键词：BMI-1基因乳腺癌RNA干扰MCF-7细胞
- 沉默Bmi-1表达可促进MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭被引量：7
- 2016年
- 目的探讨B细胞特异的Moloney鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)基因沉默对细胞增殖与侵袭的影响及可能的分子机制。方法收集经病理确诊的乳腺癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测Bmi-1的表达差异;采用LipofectamineRNAi MAX转染试剂将靶向Bmi-1基因的小干扰RNA(siRNA)转染MCF-7细胞,流式细胞术检测Bmi-1沉默后细胞周期和凋亡的改变,Western blot法检测凋亡相关基因P21、Bax、Bcl-2的表达变化。TranswellTM侵袭实验检测MCF-7细胞侵袭力变化,Western blot法检测上皮钙黏素(E-cadherin),神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达水平。结果乳腺癌组织Bmi-1 mRNA表达量高于癌旁组织,沉默Bmi-1基因可使MCF-7细胞周期阻滞于G1期,凋亡细胞增多;与空白对照组、阴性对照siRNA转染组相比,Bmi-1-siRNA组中P21与Bax的表达水平明显上调,Bcl-2明显下调。沉默Bmi-1基因表达可抑制MCF-7细胞的侵袭力,与对照组相比,下调Bmi-1可增强E-cadherin的表达,减少N-cadherin、vimentin的表达。结论下调Bmi-1的表达可引起MCF-7细胞G1期阻滞,促进细胞凋亡,与P21表达上调,Bax/Bcl-2比率升高有关;下调Bmi-1水平可抑制MCF-7细胞侵袭性,与抑制肿瘤细胞上皮间质转化有关。
- 邓小园武向梅翁华莉宋方洲
- 关键词：BMI-1乳腺癌细胞凋亡细胞侵袭
- 抑制Bmi-1基因表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响被引量：6
- 2014年
- 目的利用小干扰RNA技术沉默Bmi-1基因的表达,探讨其对人鼻咽癌CNE-1生物学行为的影响。方法设计并化学合成了针对Bmi-1的小干扰RNA,转染具有高转移性的CNE-1细胞,利用qRT-PCR和Western blot分别检测Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达水平。体外通过Transwell小室、Matrigel胶模型﹑流式细胞术,观察Bmi-1被沉默后对鼻咽癌细胞株CNE-1生物学行为的影响。结果 qRT-PCR和Western结果显示,Bmi-1-siRNA转染组Bmi-1基因的表达水平被有效抑制。与对照组相比,Bmi-1-siRNA转染组的细胞侵袭迁移力明显下降,细胞被阻滞在S期。结论抑制Bmi-1基因的表达可有效降低CNE-1细胞侵袭迁移的能力。
- 李海玉陈兴凤余思颖刘革力宋方洲
- 关键词：BMI-1RNA干扰增殖凋亡
- 沉默Bmi-1基因表达对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究Bmi-1对MCF-7细胞阿霉素敏感性的影响及机制。方法阿霉素处理MCF-7／Bmilsi、MCF-7／GFPsi和MCF一7细胞株，M1Tr法检测阿霉素的IC50；DAPI检测阿霉素处理后细胞的凋亡，计算凋亡指数（apoptosisindex，AI）；Western印迹检测相关蛋白P53，phospho—Akt（Ser473）（pAkt），totle—Akt（tAkt），Bcl-2，Bax的表达。结果阿霉素处理72h的MCF-7／Bmi．1si组生长抑制率明显高于MCF-7和MCF-7／GFPsi组，MCF-7／Bmilsi组的IC50为（0．15±0．02）μg／ml，而MCF-7组和MCF-7／GFPsi组的IC50分别为（0．87±0．06）μg/ml和（0．81±0．02）μg/ml（P〈0．05）。阿霉素处理48h后用DAPI检测凋亡发现，MCF-7／Bmi．lsi＋doxorubiein组可见大量凋亡细胞，而MCF-7＋doxorubicin和MCF-7／GFPsi＋doxo—rubicin组出现较少的凋亡细胞，MCF-7／Bmi-1si＋doxorubicin组凋亡指数明显高于对照组（P〈0．05）。进一步研究发现：MCF-7／Bmi．1si＋doxorubicin组与MCF-7＋doxorubiein及MCF-7／GFPsi＋doxorubiein组相比，P53表达量增加，tAkt表达未发生改变，而pAkt的表达明显减少，另外，Bcl-2表达量减少而Bax表达量增加，差异具有显著性（P〈0．05）。结论沉默Bmi—l基因表达能增加MCF-7细胞对阿霉素的敏感性，增加阿霉素引起的凋亡。
- 武向梅余华荣卜友泉易发平汪长东刘革力邓小园苟小燕宋方洲
- 关键词：BMI-1基因乳腺癌阿霉素
- 干扰Bmi-1表达对宫颈癌Hela细胞TGF-β/Smads通路基因表达的影响
- 2013年
- [目的]干扰Bmi-1对siRNA转染宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达影响,为寻找宫颈癌中Bmi-1的靶基因奠定基础。[方法]将Bmi-1 siRNA转染Hela细胞,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后Hela细胞中TGF-β、Hey1、Hes1、Bmp7、Smad3、Casp3和Casp6基因的表达变化,对有明显变化的基因用WesternBlot在蛋白水平进一步验证。[结果]Hela细胞中Bmi-1基因RNA干扰后,TGF-β表达上调,Smad3、Casp3和Casp6基因表达下调。[结论]沉默Bmi-1的表达可使宫颈癌细胞系Hela中TGF-β、Smad3、Casp3和Casp6的表达量均有不同程度的改变,Bmi-1基因在宫颈癌发生发展中可能与TGF-β/Smads信号通路有关。
- 邓小园武向梅刘革力翁华莉易发平卜友泉宋方洲
- 关键词：BMI-1基因宫颈癌RNA干扰
