您的位置: 专家智库 > 资助详情>国家自然科学基金(30170729)

国家自然科学基金(30170729)

作品数:6 被引量:28H指数:4
相关作者:陆承平曾勇康桦华朱建中更多>>
相关机构:南京农业大学南京医科大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金瑞典国际科学基金更多>>
相关领域:生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 4篇生物学
  • 2篇农业科学

主题

  • 4篇螯虾
  • 4篇基因
  • 3篇对虾
  • 3篇对虾白斑综合...
  • 3篇对虾白斑综合...
  • 3篇白斑综合征
  • 3篇白斑综合征病...
  • 2篇抑制性差减杂...
  • 2篇免疫
  • 2篇表达基因
  • 1篇蛋白
  • 1篇地方株
  • 1篇同源性
  • 1篇全长CDNA
  • 1篇热休克
  • 1篇热休克蛋白
  • 1篇微阵列
  • 1篇相关基因
  • 1篇免疫相关
  • 1篇免疫相关基因

机构

  • 6篇南京农业大学
  • 1篇南京医科大学

作者

  • 6篇陆承平
  • 4篇曾勇
  • 2篇康桦华
  • 1篇朱建中

传媒

  • 2篇病毒学报
  • 1篇中国水产科学
  • 1篇Curren...
  • 1篇海洋科学
  • 1篇水产学报

年份

  • 1篇2007
  • 2篇2006
  • 1篇2005
  • 2篇2004
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
cDNA芯片结合抑制性差减杂交技术构建对虾白斑综合征病毒表达基因和螯虾免疫相关基因文库被引量:7
2006年
以克氏原螯虾做为对虾白斑综合征病毒(WSSV)的增殖模型,试验组接种WSSV,对照组接种PBS。分别以试验组为检测组(tester)、对照组为驱逐组(driver),进行正向抑制性差减杂交;以对照组为tester、试验组为driver,进行反向SSH。将获得的正、反向差减杂交产物克隆入质粒载体PinPointTM Xa-1T-Vector,再转化大肠杆菌DH5α,共构建了2个分别含1620和400个克隆的正、反向差减文库。经PCR扩增,1514个差减克隆得到产物,其中正向差减克隆1221个,反向差减克隆293个。获得的PCR产物经浓缩、变性处理,用自动点样仪点制于尼龙膜载体上,制成cDNA芯片,用cDNA芯片对SSH获得的差减克隆进行鉴定,共获得差异表达克隆278个,其中攻毒组高表达克隆255个;对照组高表达克隆23个。
曾勇陆承平朱建中
关键词:白斑综合征病毒表达基因CDNA芯片
cDNA微阵列结合抑制性差减杂交研究对虾白斑综合征病毒部分表达基因被引量:4
2004年
通过抑制性差减杂交技术建立了包含对虾白斑综合征病毒表达性基因的差减文库,并用cDNA微阵列技术进行了鉴定,得到255个正向克隆。对其中的184个正向阳性克隆进行了测序,测序结果通过BLAST与GenBank中序列进行比对,共得到WSSV(whitespotsyndromevirus,WSSV)基因30个。此次首次鉴定了5个,其中WSV184具有调控蛋白的结构特征(Cys2/Cys2型锌指),WSV321和WSV322含跨膜结构,且存在可能的糖基化位点。有3个被其它研究推断无polyA结构的阅读框所处的mRNA应有polyA结构。进一步用DotNorthernblot对克隆号PCI118(含WSSV阅读框WSV321和WSV322)进行鉴定,表明确实存在该基因的转录。进而根据已报道的WSSV基因序列设计两条引物,用快速扩增cDNA末端技术,扩增WSV321和WSV322两个阅读框所处的cD NA的5′端片段和3′端片段,分析得到其全长共1109bp,与已报道的WSSV全基因序列(AF332093)的相关序列完全相同。该mRNA存在polyA,并有加尾信号AATAAA;两个阅读框都没有自己的TATA盒,但都有病毒RNA聚合酶Ⅱ的结合位点-CCAAT盒;它们编码的蛋白质分别有117和227个氨基酸,都存在可能的糖基化位点,其中WSV321一个,WSV322两个。
曾勇陆承平
关键词:对虾白斑综合征病毒基因斑点杂交CDNA微阵列
对虾白斑综合征病毒中国地方株变异区基因的比较被引量:6
2007年
According to the conservative sequence in the epitaxial variable region of Thailand strain of WSSV published in GenBank,a pair of primers were designed to amplify the variable region genes of 5 local WSSV strains(ZHSH,ZHJ,HN,QD1,QD2) by PCR and then cloned.In accordance with the CN,the results indicated that the number of nucleotide of 5 strains were deleted more than 591bp of the TW and TH strains.The ZHSH and HN strains that deleted 591bp at the 3′ end,and 454 bp at the 5′ end of varible gene was highly homologous with CN strain about 99.3%.229bp of ZHJ strain at the 5′ end was homologous with CN about 99.3%,and deleted of 816bp at the 3′ end.97bp at the 5′ end and 171bp at the 3′end of QD1 and QD2 strains were homologous with CN strain about 99.3%,and about 777bp were absent in the middle.The above data showed that the variable region genes of WSSV had mutated more in China.The variable region gene of QD2 strain was coincidence with that of QD1 after propagating 10 generations in crayfish.The results indicated that the crayfish inoculation did not result in mutation of variable region genes of WSSV.
康桦华陆承平
关键词:对虾白斑综合征病毒
克氏原螯虾热休克蛋白70ku类似物基因的cDNA分析被引量:2
2006年
根据已测序的克隆号PCI246基因序列设计2条引物,用快速扩增cDNA末端技术扩增克氏原螯虾(Procambarus clarkii)70 ku热休克蛋白同类物基因cDNA的5'端片段和3'端片段,测序得到1 184 bp基因片段,包含该基因的完整3'端,GenBank登录号AY357302,与GenBank序列号AB016836家蚕(Bombyx mori)的70 ku热休克蛋白同类物mRNA的部分片段83%同源。和果蝇(Drosophila melanogaster)的热休克蛋白同类物3的同源性最高(GenBank的登录号分别是NP_727 563,NP_511 132,NP_727 564,NP_727 565),为85%。
曾勇陆承平
关键词:全长CDNA快速扩增CDNA末端同源性
一种新的螯虾丝氨酸蛋白酶抑制物基因的克隆表达及其活性分析被引量:2
2005年
根据本课题组从克氏原螯虾中新发现的丝氨酸蛋白酶抑制物的基因序列(GenBank登录号CD644775)设计一对引物,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从螯虾血淋巴细胞中扩增出丝氨酸蛋白酶抑制物基因PCI188,将其连入原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌Rosetta株和BL21株中进行蛋白表达,结果该蛋白只在前者表达。表达产物用免疫转印检测,出现50kD的特异性条带,与螯虾PCI188基因编码的蛋白大小相符。将融合蛋白纯化后免疫新西兰兔,用免疫血清与螯虾血淋巴作用后测定酚氧化酶活力,结果显示,酚氧化酶活力有所升高,从而首次证实螯虾PCI188编码的蛋白对丝氨酸蛋白酶有抑制作用。
康桦华陆承平
关键词:螯虾克隆免疫酚氧化酶
螯虾免疫相关基因的检出及丝氨酸蛋白酶抑制物基因分析被引量:13
2004年
通过对抑制性差减杂交和cDNA芯片技术分离的 2 0 1个阳性克隆的测序 ,得到螯虾 (Procambarusclarkii)免疫相关基因 4 8个 ,其中正向克隆中 4 2个 ,反向克隆 6个 ,除正向克隆中SNAP - 2 5 (synatosome-associatedproteinof2 5ku)已报道外 ,其余均为新基因 ,均在GenBank登录。正向克隆中的同源基因有微管蛋白、超氧化物歧化酶前体、丝氨酸蛋白酶抑制物Ⅰ、精氨酸激酶、70kD伴侣蛋白同类物等。进一步用DotNorthernblot对克隆号PCI188进行鉴定 ,结果攻毒组的杂交信号是对照组的 3.2 4倍 ,与cDNA芯片结果相符。用快速扩增cDNA末端技术扩增克隆号PCI188基因的 5’端片段和 3’端片段 ,全长共 112 8bp ,编码的蛋白质有 2 77个氨基酸 ,分子量为 30 .2 7kD。与GenBank序列号X795 12软尾太平剌蛄 (P .le niusculus)的蛋白酶抑制物Ⅰ (为丝氨酸蛋白酶抑制物 )的基因同源性为 5 8.7% ,氨基酸同源性为 6 9.7%。该蛋白质有 5个重复的结构域 。
曾勇陆承平
关键词:螯虾免疫相关基因
共1页<1>
聚类工具0