博士科研启动基金(0302173)
- 作品数：3 被引量：24H指数：1
- 相关作者：高凤山许崇波张强白婧李新生更多>>
- 相关机构：大连大学中国农业科学院兰州兽医研究所中国农业大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大肠杆菌表达的重组猪β_2微球蛋白二级结构的圆二色谱分析被引量：23
- 2009年
- 【目的】研究巴马小型猪β2微球蛋白(β2m)的结构和功能。【方法】亚克隆巴马小型猪β2m的成熟肽部分,并构建与pMAL-p2X的重组质粒,转化大肠杆菌TB1并诱导后,融合表达蛋白分别经过Western blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构。【结果】重组表达的融合蛋白MBP-β2m大小为53.1kDa。切割后去除MBP的单体蛋白大小为10.6kDa。圆二色谱分析单体蛋白β2m二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲所含有的氨基酸残基数目分别为0、45、8和45。【结论】分析揭示表达的β2m具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。
- 高凤山夏春张强李云岗李新生许崇波白婧
- 关键词：圆二色谱Β2微球蛋白
- pMAL-p2X系统表达SLA-Ⅰ复合体蛋白被引量：1
- 2008年
- SLA-Ⅰ/pMAL-p2X为人工构建的原核表达体系.为获取最佳表达的SLA-Ⅰ复合体蛋白及其可溶性表达含量,设计实验对其进行表达优化(pH值、温度、菌体密度I、PTG浓度、诱导时间),SDS-PAGE检查目的蛋白的表达.另外检查目的蛋白的可溶性表达含量.结果显示,SLA-Ⅰ在pMAL-p2X的最佳表达条件为pH=8.0、T(温度)=37℃、OD600=1.0I、PTG=0.4 mmol/L和t(诱导时间)=5 h;证明目的蛋白可溶性表达含量占总表达蛋白的70%左右.研究表明pMAL-p2X系统适合于生产可溶性的SLA-Ⅰ复合体蛋白,便于今后进一步研究SLA-Ⅰ类分子结构和功能.
- 高凤山王远征倪晶郭小宇荆月升侯义龙许崇波
- SLA-Ⅰ重链分子的表达及结构分析
- 2009年
- 为研究SLA-Ⅰ重链分子在pMAL-p2X载体表达条件,从培养基pH值、温度、菌体密度、IPTG浓度、时间5个条件设计了优化条件的实验.SDS-PAGE筛选出在pMAL-p2X系统上表达SLA-Ⅰ重链分子的最佳条件,并运用EXPASY服务器上的SOPMA法对SLA-Ⅰ重链分子和HLA-A2进行2级结构的预测,同时同源模建其3级结构.结果表明:pH8.0,37℃,0.2 mmol/LIPTG,培养5 h,D600 nm=0.8是SLA-Ⅰ重链分子蛋白表达的最佳条件.2级结构预测和分析发现,猪和人MHCⅠ类分子重链2级结构成分上非常相似,其同源率远远大于氨基酸的同源率;同源模建发现,猪和人、小鼠的MHCⅠ类分子3级结构非常相似.
- 高凤山付寅坤
