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大孔吸附树脂分离纯化合欢皮总皂苷的工艺研究被引量：2: 2009年; 目的:优化大孔吸附树脂分离纯化合欢皮总皂苷的工艺,探讨有效纯化总皂苷的途径。方法:以静态吸附率,静态洗脱率为考察标准,优选大孔树脂型号,然后以合欢皮总皂苷洗脱率为考察标准,建立合欢皮总皂苷的制备工艺参数。结果:D101型大孔吸附树脂对合欢皮总皂苷吸附、解析能力较强,制备工艺参数为:层析柱径高比为1∶5,上样吸附时间为2h,洗脱流速1.5BV/h,洗脱体积3BV,收集和70%乙醇洗脱部位。结论:重复该工艺得70%乙醇洗脱率相对稳定,平均达到86.06%(n=3),浸膏得率为43.71%,流份中总皂苷含量为51.67%。; 陈爽邱丽颖金坚冯磊; 关键词：大孔吸附树脂合欢皮总皂苷

白藜芦醇靶点蛋白质的研究被引量：3: 2009年; 为探讨白藜芦醇在肿瘤细胞中的结合靶点蛋白质。采用亲和甄别磁珠法生物淘洗白藜芦醇的靶点蛋白质。在构建并优化了白藜芦醇结构模型的基础上,通过分子动力学优化分析白藜芦醇与其靶点蛋白质的结构模型,并且使用分子对接分析验证两者的结合作用。结果表明,亲和甄X别磁珠法直接筛选到的能与白藜芦醇的特异性结合的蛋白质是Myosin蛋白质和Actin蛋白质,并且成功构建得到了合理的白藜芦醇分子与Actin蛋白质的复合物的三维结构。通过分析白藜芦醇分子与Ac-tin蛋白活性氨基酸残基结合模式发现,残基Val30,Phe31,Pro32,Thr203,Ala204,Glu205,Pro243,Asp244,等对两者的结合都有重要贡献。白藜芦醇是通过作用于肿瘤细胞的骨架结构蛋白来干扰细胞的有丝分裂过程,从而导致肿瘤细胞的体外增殖受到抑制。; 冯磊花慧邱丽颖金坚; 关键词：白藜芦醇 MCF-7细胞

性别对慢性交感应激导致心脏重塑的差异研究: 2020年; 目的探究性别对慢性交感应激导致的心脏重塑是否存在差异。方法将小鼠随机分为四组:雄性对照组、雄性异丙基肾上腺素(ISO)组、雌性对照组、雌性ISO组。皮下注射异丙基肾上腺素ISO 10 mg/(kg·d)14 d,诱导小鼠心脏重塑模型。通过心脏重量与小鼠体重之比(HW/BW)、心脏重量与胫骨长度之比(HW/TL),评估心脏重塑大体指标;超声心动图评估小鼠心功能;HE染色检测心肌细胞横截面积,超声心动图检测舒张末期室壁厚度,用于评估小鼠心脏肥大;天狼猩红染色用于评估心脏纤维化。结果雄性ISO组与对照组相比,心体比和心胫比分别增加9.1%(P<0.05)和42.8%(P<0.001),雌性ISO组与对照组相比,心体比和心胫比分别增加12.9%(P<0.05)和9.5%(P<0.05),而与雌性ISO组相比,雄性ISO组心胫比增加了19.8%(P<0.01);雄性ISO组与对照组相比,心肌细胞横截面积增加了19.1%(P<0.0001),雌性ISO组与对照组相比,小鼠心肌细胞横截面积增加了6.9%(P<0.05),而与雌性ISO组相比,雄性ISO组心肌细胞横截面积增加了11.6%(P<0.01);与对照组相比,雄性和雌性ISO组EF值和FS值均无明显差异;雄性ISO组与对照组相比,小鼠心脏纤维化面积增加了158%(P<0.0001),雌性ISO组与对照组相比,纤维化面积增加了39.7%(P<0.05),与雌性ISO组相比,雄性ISO组心脏的纤维化面积增加了119%(P<0.0001)。结论性别对慢性交感应激导致的心脏重塑存在差异,与雌鼠相比,雄鼠更容易出现心脏肥大和心脏纤维化。; 李文奇冯磊; 关键词：性别心脏重塑

重组人ADAM15去整合素区域蛋白抑制HeLa细胞的增殖及迁移被引量：1: 2014年; 观察重组人ADAM15去整合素区域蛋白(记做rhdd ADAM15)干预He La细胞在体内外的增殖及迁移效应,初步鉴定了其作用的相关通路,为研究其作用机制提供基础。利用SRB法及划痕法测得rhdd ADAM15对He La体外的增殖及迁移均有明显的抑制作用,IC50分别为2.44、1.60μmol/L,当其浓度低于8μmol/L时,细胞增殖及迁移抑制率与蛋白质浓度呈剂量依赖关系;利用瞬时转染法在He La细胞内过表达rhdd ADAM15,致使He La细胞的迁移能力下降,细胞周期出现S期阻滞,阻滞率约为5%;SRB法表明,MAPK通路激动剂EGF可以逆转rhdd ADAM抑制He La细胞增殖的效应;利用斑马鱼肿瘤移植模型,观察得到rhdd ADAM15对斑马鱼体内He La细胞生长及转移均有明显的抑制作用。以上结果表明,rhdd ADAM15可抑制He La细胞体内外的增殖及迁移,这种抑制作用与MAPK信号通路密切相关,作用靶点在细胞外及细胞内均有分布。; 侯颖储敏蔡燕飞杜芳芳王晓敏陈蕴金坚; 关键词：去整合素迁移 MAPK 斑马鱼

生物素化白藜芦醇的分离纯化与药效学评价被引量：1: 2009年; 以DCC为催化剂,采用低温化学催化法合成生物素化白藜芦醇。产物采用Resourse RPC反相色谱柱分离、纯化,并且运用液质联用进行分析验证。MTT法测定产物体外对HepG2、MCF-7肿瘤细胞的抑制作用。实验结果显示:通过HPLC-MS、紫外扫描分析鉴定证实,分离得到的产物确实是生物素化白藜芦醇,其保留了原有的体外抗肿瘤活性。此种化学合成方法反应条件温和,容易控制,操作方便。合成得到的白藜芦醇的生物素化衍生物,为下一步探讨白藜芦醇的结合蛋白提供简单有效的分子工具。; 冯磊花慧邱丽颖金坚; 关键词：白藜芦醇化学合成抗肿瘤

化疗药体外干预诱导人乳腺癌细胞产生耐药性的研究被引量：4: 2009年; 目的研究化疗药物高浓度冲击法和低浓度干预对乳腺癌细胞MDA-MB-231多药耐药性的影响。方法采用化疗药物紫杉醇、阿霉素高浓度冲击和紫杉醇低浓度短期干预MDA-MB-231细胞,SRB法检测细胞药敏性改变;HE染色检测细胞形态;免疫细胞化学检测P-gp蛋白表达变化;RT-PCR检测MDR1基因表达。结果阿霉素高浓度冲击后细胞未存活,紫杉醇高浓度冲击后细胞能存活并最终稳定生长(MDA-MB-231/a),SRB法检测IC50发现该细胞药敏性与野生型细胞(MDA-MB-231/w)无差异;紫杉醇低浓度短期干预后(MDA-MB-231/b)SRB法检测发现该细胞对多种化疗药的IC50比野生型略有提高;免疫细胞化学显示MDA-MB-231/aP-gp表达与野生型无差异,MDA-MB-231/bP-gp表达略有提高;RT-PCR检测发现MDA-MB-231/b中MDR1基因表达高于MDA-MB-231/w。结论化疗药物高浓度冲击法无法获得MDA-MB-231的耐药细胞,低浓度短期干预可以略微提高细胞的耐药性,提示低浓度持续诱导法可以获得MDA-MB-231的耐药细胞。; 马晓峰张莲芬屈琳金坚; 关键词：人乳腺癌细胞 SRB法

LSCM880 with Airyscan和转盘共聚焦成像特点及应用比较研究被引量：1: 2020年; 近年来,激光共聚焦显微成像技术发展迅速,新技术在提高分辨率、扫描速度、降低光毒性、活体观察、大视野图像拼接和三维重建等方面提升和扩展了其应用功能。新技术带来更多医学相关领域的应用潜力,本研究梳理了所管理的两台大型精密仪器设备蔡司超高分辨率共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope with Airyscan,LSCM880 with Airyscan)和安道尔转盘共聚焦显微镜(Andor Spinning-Disk Confocal Microscopy,SDCM)在成像原理、配置参数、成像特点及应用领域等方面的不同,使研究人员熟悉和了解两台共聚焦显微镜的应用特点,获得更多的实验方法及思路,更加直观准确的展示实验结果。; 李红娟宋鑫宏程建青冯磊; 关键词：激光理论

合欢皮总皂苷急性毒理学研究被引量：16: 2010年; 本文采用常规急性毒理学研究的方法探究合欢皮总皂苷对小鼠的毒性剂量。HE染色观察其主要器官形态学变化,玻璃毛细管法测定血液凝固时间,生化法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性。合欢皮总皂苷的最小致毒量为7.5 mg/kg,近似致死量为1500 mg/kg,半数致死量(LD50)为2164 mg/kg。毒性表现为动物活动减少、1500 mg/kg以上剂量使小鼠食欲下降、2250 mg/kg剂量使小鼠体重明显下降;给药后1 d、7 d和14 d给药组血液凝固时间缩短;主要器官形态学明显改变,明显降低主要器官SOD和GSH-PX活性。结果表明合欢皮总皂苷对小鼠有一定的毒性作用。; 赵建国刘玲艳朱颖越邱丽颖冯磊金坚; 关键词：合欢皮总皂苷毒性小鼠

改善稀有密码子和氨基酸残基限制提高重组人ADAM15去整合素结构域蛋白表达水平被引量：17: 2008年; 【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。; 吴静雷楗勇张莲芬花慧金坚; 关键词：稀有密码子抑制血管生成

王不留行提取物抑制血管生成的药效学研究被引量：11: 2009年; 目的探讨王不留行提取物对肿瘤新生血管生成的抑制作用。方法采用鸡胚尿囊膜血管生成模型分析王不留行提取物对新生血管生成的影响,用免疫组化染色法检测荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中CD31表达的变化。观察王不留行提取物对小鼠Lewis肺癌转移模型的影响。结果王不留行提取物具有明显抑制鸡胚尿囊膜血管新生成的作用,能够明显降低荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中的CD31表达,显著抑制Lewis肺癌肿瘤细胞的生长、转移,稳定病灶。结论王不留行提取物具有明显抑制肿瘤新生血管生成的作用,提示其有可能成为新的血管生成抑制剂。; 冯磊花慧邱丽颖张莲芬金坚; 关键词：王不留行血管生成肿瘤

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国家自然科学基金(30772586)

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