国家科技支撑计划(2006BAF07B01)
- 作品数：27 被引量：78H指数：6
- 相关作者：颜光涛金伯泉邓子辉薛辉林季更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院第四军医大学四川大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 单克隆抗体制备技术及应用的研究进展被引量：4
- 2011年
- 单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用。近年来,随着分子生物学和细胞生物学的发展,出现了抗原特异性的B淋巴细胞杂交瘤技术、人-鼠嵌合抗体制备技术、噬菌体展示技术、核糖体展示技术和转基因小鼠技术制备单克隆抗体,这些技术有效地解决了单克隆抗体鼠源性等问题,使单克隆抗体凭借自身高度特异性和均一性的特点在治疗肿瘤、自身免疫性疾病和器官移植等方面显出了独特的优势和良好的应用前景,故单克隆抗体制备技术的发展也就显得尤为重要。
- 郭粉粉梁文波张学梅
- 关键词：单克隆抗体核糖体转基因小鼠
- 聚类GO术语在基因表达差异研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 针对基因功能分类体系基因本体(Gene Ontology,GO)特殊的有向无环图特点,改进传统的用单个GO术语检测基因差异表达信号的缺陷,设计出"聚类GO术语提升差异表达检测(ScaGO)"算法.通过简单的输入对照和实验组表达谱上的全部基因表达信号,来研究一些比较新的差异表达功能组,有助于进一步解释基因差异表达的生物学意义,如疾病发病机制、药物作用机理等.将ScaGO和基于单GO术语差异分析法应用到急性淋巴细胞性白血病数据集和酵母Rap1 DNA绑定突变体差异表达数据集上,结果显示,ScaGO能比基于单GO术语差异分析法发现一些新的与差异表达相关联的功能类基因,对于指导实验具有积极意义.
- 唐秋菊须涛王东李令锦杜林方
- 关键词：基因本体层次聚类基因差异表达语义相似性
- 金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展被引量：9
- 2010年
- 刘飞李永明金伯泉
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素
- 产磷酸甘油氧化酶菌株的鉴定及其酶学性质研究被引量：2
- 2008年
- 对筛选到的1株产磷酸甘油氧化酶的菌株进行了生理生化测定和16SrDNA序列分析,初步鉴定该菌株为粪肠球菌(Entero-coccus faecalis)。菌株经发酵培养,超声波破碎后,依次经过双水相萃取、阴离子交换层析和金属离子亲和层析,得到的磷酸甘油氧化酶活力达到54.3U/mg。还原和非还原SDS-PAGE显示该酶为单一条带并测得其表观分子质量为6.7×104Da,HPLC显示其天然酶的相对分子质量为1.2×105Da,据此推测该酶由2个分子质量相同的亚基组成。酶促反应动力学研究结果表明,该酶的最适pH值和酸碱稳定范围分别为8.0和5.0～7.5,最适温度为35℃,以磷酸甘油二钠为底物时,其Km值为3.2×10-2mol/L。将酶在-20℃保存12个月后仍具有60%的酶活力;4℃保存1个月,酶活力仍保持21%。
- 包凌晟杜林方李海林聂宇孟延发
- 关键词：粪肠球菌磷酸甘油氧化酶酶学性质
- Triton X-100洗涤剂对抗原包被效率的影响及其对策被引量：3
- 2008年
- 目的:观察抗原中残留的洗涤剂成分在间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆时,对抗原包被效率的影响以及相应的对策。方法:以卵白蛋白(OVA)、卵运铁蛋白(OT)和本室制备的相应的单克隆抗体(mAb)作为实验模型,在抗原中加入不同浓度梯度的Triton X-100包被ELISA板,用相应的mAb细胞株培养上清做间接ELISA,确定Triton X-100对包被效率的影响。结果:当包被抗原中Triton X-100的浓度为3×10-6(v/v)时,可以明显抑制包被效率,当TritonX-100的浓度为1.6×10-4(v/v)时几乎可以完全抑制抗原的包被;在含有一定浓度Triton X-100的条件下,提高抗原的浓度,或适当增大包被过程中的稀释倍数,可以明显提高包被效率。结论:洗涤剂对抗原包被有较强的影响,在抗体制备过程中,应尽量提高抗原的初始浓度,降低洗涤剂的浓度,设计合理的针对含有洗涤剂抗原的ELISA筛选方案,是mAb制备成功的关键之一。
- 李永明宋朝君张葵李琦田莹金伯泉
- 关键词：抗体ELISA洗涤剂
- His标签单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：7
- 2008年
- 目的:制备和鉴定抗His标签单克隆抗体(mAb),初步建立检测和纯化带His标签融合蛋白的方法。方法:用碳化二亚胺法合成His-tag完全抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,通过有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。结果:His-tag完全抗原偶联成功,经细胞融合、筛选及克隆化,成功获得1株分泌His标签mAb的杂交瘤细胞株。制备腹水测得腹水效价高于1∶106,且此株mAb与其他融合蛋白标签无交叉反应,并在含His标签融合蛋白的鉴定实验中取得了满意效果。结论:成功制备了1株His标签mAb,为带His标签融合蛋白的研究应用提供了重要的工具。
- 王文礼王云龙李晨阳陈小科刘利锋
- 关键词：单克隆抗体蛋白印迹
- 玉米内州萎蔫病研究进展被引量：7
- 2008年
- 玉米内州萎蔫病是影响玉米生产的重要病害,主要分布于北美地区,我国尚无此病发生的报道。萎蔫病菌通过带菌种子做远距离传播,加强检验检疫成为该病防治的重要手段。本文综述了玉米内州萎蔫病的发生与危害、症状特点、病原菌分类、传播途径、防治措施以及最新的检测技术研究进展,对监测病害的发生和鉴定检疫措施的实施具有重要指导意义。
- 王岭田世民高海霞邹明强喻苗苗陈艳齐小花蒋继志
- 乳糖诱导重组尿酸酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：12
- 2009年
- 对用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组产朊假丝酵母尿酸酶基因在E.coliJM109(DE3)中表达进行了研究,拟建立一种高效低成本的生产重组尿酸酶的工艺路线。通过摇瓶试验对诱导所采用的乳糖浓度,诱导时机和诱导持续时间进行了优化,并考察在乳糖诱导下的目的产物表达动力学,随后在5L发酵罐上进行扩大化培养以验证摇瓶优化的结果,进一步将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为5g/L,最佳诱导时机是对数生长期中后期,诱导持续时间为9～10h;按照优化的条件在摇瓶和5L发酵罐上进行分批培养,重组尿酸酶最大表达量可达菌体总蛋白的26%左右,可溶性蛋白的36%左右,略高于IPTG的诱导效果;高密度发酵过程菌体终密度达到OD600值40以上,尿酸酶表达量占菌体总蛋白25%左右。
- 邓永康吴民泸刘盛邦杜林方伍黎黎李曼孟延发
- 关键词：尿酸酶乳糖高密度发酵
- 食欲素-A在大鼠肝再灌注诱导的肝损伤中的变化
- 2009年
- 目的:研究食欲素-A(orexin-A)在肝再灌注时的表达变化及其与肝损伤的联系,探讨orexin-A在创伤应激反应中的作用。方法:建立大鼠70%肝再灌注模型,设立假手术和不同再灌注时间的损伤组,采用自制放射免疫分析法和试剂盒检测损伤后血浆、下丘脑orexin-A的蛋白水平和血清葡萄糖、总抗氧化能力、丙氨酸氨基转移酶,HE染色、免疫组织化学检测肝的病理学改变、orexin-A蛋白表达,RT-PCR观察下丘脑、肝orexin-AmRNA表达。结果:自制orexin-A放射免疫分析法的标准曲线形态和测量结果均良好。各再灌注组血浆、下丘脑orexin-A的蛋白水平无显著变化,损伤后期血清葡萄糖、总抗氧化能力显著升高,血浆orexin-A与血清葡萄糖、总抗氧化能力均存在显著的线性正相关;各再灌注组血清丙氨酸氨基转移酶显著升高,损伤后期肝损害显著减轻。各再灌注组肝orexin-A蛋白表达和下丘脑、肝orexin-AmRNA表达有不同程度的变化。结论:Orexin-A在肝再灌注时发生显著的表达变化,提示它参与调控肝再灌注诱导的肝损伤和内环境紊乱。
- 林季颜光涛薛辉郝秀华张凯王录焕
- 关键词：再灌注损伤下丘脑
- 玉米内州萎蔫病菌免疫学检测方法的建立被引量：7
- 2010年
- 以玉米内州萎蔫病菌单抗(4H4和4G12)为基础,纯化抗体后,进行亚类鉴定、效价及特异性测定。比较间接ELISA和双单抗夹心ELISA(DAS-ELISA)的检测灵敏度,并应用于玉米种子中萎蔫病菌的检测。结果表明,两株单克隆抗体(0.4g/L)效价均可达1:256000,亚类鉴定结果分别为IgG2a和IgG2b,轻链均为K链。与供试的16株非目标细菌均无交叉反应。DAS-ELISA对萎蔫病菌种子悬浮液的检测灵敏度为1.0×109CFU/L,在此基础上建立了灵敏、特异的玉米内州萎蔫病菌双单抗DAS-ELISA检测方法。
- 吴晓巍金涌田世民董金皋张洋柳青松李娇
- 关键词：单克隆抗体ELISA
