国际科技合作与交流专项项目(2013DFG32370)
- 作品数：5 被引量：75H指数：3
- 相关作者：董世娟李震于瑞嵩朱于敏司伏生更多>>
- 相关机构：上海市农业科学院上海市农业遗传育种重点实验室南京农业大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 利用DNASta软软件对GeneBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因序列进行分析,选择保守区域设计合成引物和探针,制备M基因重组质粒标准品,建立检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。结果表明:建立的定量标准曲线Ct值和模板起始拷贝数对数在10~8—10~1copies/μL有良好的线性关系,相关系数R^2为0.997,该方法可检测到初始模板中6.368 copies/μL的质粒DNA;应用该方法检测49份临床样品,阳性率达98%,比普通RT-PCR方法检测的阳性率高18%。研究表明,建立的PEDV TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较好的灵敏性、特异性和重复性,适用于临床样本中PEDV的快速检测,为PEDV的感染和增殖规律的研究奠定了基础。
- 董世娟石明明朱于敏于瑞嵩张源淑夏东李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒荧光定量PCRM基因TAQMAN
- 中国猪流行性腹泻病毒分子流行病学研究进展被引量：60
- 2013年
- 2010—2011年中国境内的猪流行性腹泻(PED)大流行给养猪业造成重大经济损失。因疫苗免疫无法控制疫病流行,因此学者普遍认为猪流行性腹泻病毒(PEDV)出现了新的变种。论文综合分析了这个时期国内学者PEDV分子流行病学的研究结果,又对国内新近分离的PEDV的11个毒株的全基因序列进行遗传进化分析,进一步确定了国内暴发流行的PEDV毒株已远离中国86年分离的毒株和欧洲毒株CV777,成为了一个新的基因型。毒株基因变异应该是造成免疫失败和仔猪死亡率高的主要原因。进一步分析发现分离毒株的全长基因序列和棘突蛋白(S)基因序列长度有差异,其他基因长度保守性强。S基因的变异率高于其他基因,特别是短期内基因突变主要发生于S基因。综合分析认为国内变异毒株虽与韩国毒株遗传关系较近,但从境内毒株衍生和进化而来的可能性更大。因2006年已经观察到PEDV的免疫失效和PED流行,2010—2011年PED集中暴发可能是病原长期突变和适应性积累的结果,提示今后应充分发挥全国动物疫病预警网络的作用,加强毒株进化检测和疫病预警,优化疫病的防控手段,降低疫病发生频次和规模,减小疫病发生损失。
- 施标董世娟朱于敏于瑞嵩李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒分子流行病学
- 新发猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传进化分析被引量：3
- 2014年
- 从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。
- 董世娟朱于敏于瑞嵩司伏生石明明张源淑李震
- 关键词：猪流行性腹泻病毒分子流行病学ORF3基因
- 猪流行性腹泻病毒流行毒株S1片段的克隆表达及其抗体制备被引量：3
- 2015年
- 通过对猪流行性腹泻病毒（PEDV）流行毒株S基因进行序列分析,选取S1蛋白502～641氨基酸位置,根据大肠杆菌密码子偏嗜性进行密码子优化,PCR融合扩增片段,并将其克隆到原核表达载体上,获得重组质粒p ET32a-S417、p XXGST-S417。将获得的重组质粒转化到BL21感受态细胞,成功诱导表达、纯化,以GST-S417重组蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明：本试验所选区域具有好的抗原免疫原性,制备的多克隆抗体能特异性识别目的蛋白,为PEDV诊断试剂盒和疫苗研制提供了理论依据。
- 王国松张明朱于敏于瑞嵩董世娟李震
- 关键词：PEDVS蛋白
- ORF3蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上的增殖被引量：6
- 2018年
- 【背景】猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水。自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施。【目的】研究orf3对PEDV体外增殖的影响。【方法】利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID_(50)并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定。【结果】RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成。SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID_(50))显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36 h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒。【结论】ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的。本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础。
- 胡晓霞于瑞嵩司伏生司伏生董世娟陈冰清李震
- 关键词：ORF3猪流行性腹泻病毒体外增殖
