国家自然科学基金(30300420)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
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- 从噬菌体抗体库中筛选血管内皮细胞新型嘌呤受体功能抗体的研究被引量：7
- 2007年
- 目的筛选鉴定血管内皮细胞新型嘌呤受体功能性抗体,为进一步研究新型嘌呤受体提供标志物。方法大鼠血管内皮细胞蛋白质免疫BALB/c小鼠,采用噬菌体抗体库技术构建小鼠抗大鼠血管内皮细胞的单链噬菌体抗体库。利用新型嘌呤受体在主动脉内皮细胞表达而在血管平滑肌细胞不表达的特点,先用主动脉内皮细胞进行阳性筛选,再用血管平滑肌细胞进行阴性筛选,从噬菌体抗体库中富集主动脉内皮细胞特异抗体。对筛选到的抗体经可溶性表达后,采用离体血管环功能试验,筛选新型嘌呤受体特异单链抗体。采用免疫组化实验对筛选到的抗体进行鉴定。结果经过4次免疫后,小鼠血清抗内皮细胞蛋白的IgG效价为1∶16000,通过噬菌体表面呈现,得到小鼠抗大鼠内皮细胞免疫噬菌体抗体库容量为8×106。4轮主动脉内皮细胞阳性筛选及大鼠血管平滑肌细胞阴性筛选富集到约2500株主动脉内皮细胞特异抗体,可溶性表达后,在离体血管环上,经过4轮的逐级淘筛得到一株影响腺苷诱发NO依赖性血管收缩反应的功能性抗体ScFv-B,其抑制率为83.4%±21.6%。免疫组化鉴定此抗体与内皮细胞特异结合,功能性鉴定此抗体对腺苷诱发的肠肌收缩反应无影响,初步认为此抗体是新型嘌呤受体特异性功能抗体。结论本研究通过噬菌体抗体库的构建及抗体筛选和鉴定,得到了新型嘌呤受体特异性功能抗体ScFv-B,为进一步采用表达文库筛选的方法克隆新型嘌呤受体基因提供了良好的工具。
- 山丽梅赵艳玲张萍金城蔡光明肖小河
- 关键词：嘌呤受体血管内皮细胞噬菌体抗体库腺苷
- 嘌呤P2受体的分子生物学研究进展被引量：7
- 2007年
- 嘌呤P2受体家族是目前发现的最复杂的受体家族之一,在体内分布广泛,功能复杂,目前已有7种P2X受体和8种P2Y受体被克隆。P2受体的分类和研究历史非常复杂,随着分子生物技术的发展,P2受体的研究取得了明显的进展,特别是新克隆出的P2Y_(12),P2Y_(13)和P2Y_(14)受体,丰富了P2受体家族,使其结构特征、药理学特性不断被揭示。本文对P2受体的研究历史、分类方法、分子结构特征和药理学特性做一概述,并对最新报道的P2受体的相互作用以及关于P2Y_(15)受体的争论进行综述。
- 山丽梅赵艳玲金城张萍蔡光明肖小河
- 嘌呤P2受体的分子生物学研究进展
- 嘌呤 P2受体家族是目前发现的最复杂的受体家族之一,在体内分布广泛,功能复杂,目前已有7种 P2X 受体和8 种 P2Y 受体被克隆。P2受体的分类和研究历史非常复杂, 随着分子生物技术的发展,P2受体的研究取得了明显的...
- 山丽梅赵艳玲金城张萍蔡光明肖小河
- 关键词：受体
- 传代培养后主动脉内皮细胞差异表达基因cDNA序列的动脉粥样硬化相关性分析
- 2006年
- 目的筛选并分析传代培养后血管内皮细胞上表达下调基因。方法通过菌落原位杂交技术筛选用抑制消减杂交法构建的传代培养前后主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库,用聚合酶链反应(PCR)方法进一步筛选出有插入片段的阳性克隆,将阳性克隆进行DNA测序和同源性比较分析,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对部分cDNA序列进行初步鉴定。建立兔动脉粥样硬化模型,采用RNA点杂交技术鉴定部分筛选到的cDNA序列的动脉粥样硬化相关性。结果从消减文库中随机挑取的750个白色克隆中筛选出88个阳性克隆,DNA测序获得61个cDNA序列,其中26个为已知牛基因序列,19个与已知人基因具有高度同源性,其他16个是未知基因片段,选择4个已知基因采用RT-PCR验证了基因筛选的可靠性。5个新基因具有动脉粥样硬化相关性。结论用抑制消减杂交法构建的传代培养前后主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库富含动脉粥样硬化相关基因。
- 山丽梅赵艳玲张平谢进蔡光明肖小河
- 关键词：抑制消减杂交CDNA文库
