国家高技术研究发展计划(2006AA020907) 作品数:6 被引量:10 H指数:2 相关作者: 陈坤 张贺秋 王国华 赵秀英 曾立明 更多>> 相关机构: 军事医学科学院 中南大学 首都医科大学附属北京佑安医院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
丙型肝炎核心抗原酶联免疫检测试剂的临床应用 被引量:6 2007年 目的评价1种国产丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶联免疫检测试剂的敏感性以及在临床应用效果。方法采用1种酶联免疫试剂盒(ELISA)检测HCV游离核心抗原,分别对2808名献血者、随机抽取的1099名门诊病人及244名抗-HCV阳性者血清作HCV-cAg检测,再进一步对献血者、门诊病人HCV-cAg阳性血清作HCV-RNA和抗-HCV检测,对244名抗-HCV阳性血清作HCV-RNA检测。结果献血者2808份血清,经HCV-cAg试剂检测出HCV-cAg阳性1例,此例血清HCV-RNA亦为阳性;随机抽取的1099份门诊病人血清标本,检测出HCV-cAg阳性8份,其中抗-HCV阳性5份(5/8),HCV-RNA阳性5份(5/6,有2份HCV-cAg阳性标本因血清不足未作RT-PCR和FQ-PCR);244名抗-HCV阳性的血清中检测出HCV-cAg阳性52份,HCV-RNA阳性49份(49/52),2种方法符合率为94.23%;另外,检测为HCV-cAg阴性的192份标本中,HCV-RNA阳性68份(68/192)。结论该HCV-cAg检测试剂在不同的临床样本中具有很好的应用价值。 刘湘林 谭德明 索凤霞 刘伟 赵秀英 曾立明 欧阳亦 周松辉 杨锡琴 白丹 刘昕 欧兰香 黄芯 陈坤 王国华 张贺秋 周见远关键词:丙型肝炎 ELISA试剂 抗-HCV 丙型肝炎病毒总核心抗原测定方法及临床应用 2009年 目的建立丙型肝炎病毒总核心抗原(总HCV-cAg)酶联免疫测定方法,并对相关的临床样品进行测定。方法通过对样品进行裂解处理,采用酶联免疫试剂盒(ELISA)检测总HCV-cAg,对201名抗-HCV阳性者血清进行总HCV—cAg检测,同时进一步作HCV-RNA检测,其中176例采用荧光定量PCR(FQ—PCR),25例采用逆转录PCR(RT—PCR)检测HCV.RNA。结果共检测201份血清标本,其中经PCR测定HCVRNA阳性88人份,阳性率43.8%;总HCV—cAg阳性71份,阳性率35.3%。经统计学分析,总HCV—cAg检测和HCVRNA检测的阳性率的差异无统计学意义。结论建立的总HCV—cAg酶联免疫测定方法适合临床应用,尤其适合在缺少RT-PCR或荧光定量PCR的中小医院使用。 谭德明 聂东宋 彭小虎 杨锡琴 李凯 赵秀英 欧阳奕 曾立明 周松辉 张贺秋 周见远关键词:肝炎抗原 HCV核心蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫学特性分析 2008年 目的:表达HCV核心蛋白,为检测丙肝病毒提供合适抗原。方法:以含HCV核心全长cDNA克隆的pMD18T/core质粒为模板,PCR扩增全长的HCV核心抗原基因,插入表达载体pQEN1构建重组质粒pQEN1/Core,转化BL-21(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His融合蛋白,表达产物经SDS-PAGE及Western blot检测和鉴定。结果:经SDS-PAGE及Western blot显示HCV核心蛋白在大肠杆菌中正确表达,融合蛋白分子量约为22 kD,表达量约占菌体蛋白总量的30%。纯化后的C蛋白能与慢性丙型肝炎患者有血清反应。结论:HCV核心蛋白在大肠杆菌中成功表达并具有较强的抗原性。 张如新 聂东宋关键词:HCV核心抗原 血清学反应 抗HCV抗体双抗原夹心ELISA法试剂的应用 被引量:1 2009年 目前常用的第三代抗HCV抗体试剂为间接ELISA试剂,存在一定的假阳性,且检测抗HCV抗体的“窗口期”较长。抗HCV抗体双抗原夹心法ELISA试剂是检测抗HCV总抗体,缩短了“窗口期”。因对抗体进行两次特异性反应,可降低间接ELISA法引起的假阳性。为评价抗HCV抗体双抗原夹心法试剂的性能,我们分别对湖南、南京和苏州等地的样本测定,现将结果报告如下。 夏敦年 王亮 周镇先 卢震 陈坤 周见远关键词:丙肝病毒 抗体 双抗原夹心 酶联免疫吸附试验 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测方法研究进展 被引量:1 2011年 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus HcV)是引起丙型肝炎的主要原因,目前,检测HCV感染的常用方法包括HCVRNA直接检测、HCV核心抗原检测和抗-HCV检测。HCV抗原抗体联合检测方法是一种同时检测HCV抗原和抗-HCV的新型酶免疫检测方法,可以缩短抗体阳转前的检测窗口期。此文就HCV抗原抗体联合检测方法研究进展作一综述。 廖云霞 周秀田 周见远(审校) 聂东宋关键词:肝炎病毒 肝炎抗原 丙型 肝炎抗体 丙型 免疫酶技术 核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达 被引量:2 2008年 目的克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因。方法人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性。结果人工合成的354 bpDNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因。将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物。SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符。在非变性条件下纯化目的蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当。结论成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因。 彭佳 王国华 陈坤 宋晓国 张贺秋 周见远 何竞关键词:克隆