中国疾病预防控制中心青年科研基金(2011A102) 作品数:2 被引量:1 H指数:1 相关作者: 任红宇 秦天 邵祝军 周海健 赵明强 更多>> 相关机构: 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 北京市昌平区疾病预防控制中心 四川大学 更多>> 发文基金: 中国疾病预防控制中心青年科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
三种定量方法在温泉水中军团菌连续性监测中的应用 被引量:1 2013年 目的比较传统的平板培养法、荧光定量PCR和荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidiummonoazide,EMA)结合荧光定量PCR的方法(EMA-荧光定量PCR)对温泉水中军团菌的检测效果。方法于2011年每月(除5月份)对北京市某温泉度假村的5个温泉池进行采样,每月采集11份水样,全年共采集121份。分别采用传统的平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法对水样中军团菌进行定性和定量分析。结果平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检测温泉水中军团菌污染率分别为74.4%(90/121)、100.0%(121/121)和100.0%(121/121);3种方法对121份温泉水样本中军团菌定量数值分别为0.10-216.00菌落形成单位(CFU)/ml、1.47-1557.75基因单位(GU)/ml和0.20-301.69GU/ml。荧光定量PCR、EMA-荧光定量PER和平板培养方法对121份温泉水每份军团菌含量检测的中位数(第25百分位数~第75百分位数)分别为75.30(32.51-192.10)GU/ml、36.46(16.08-91.21)GU/ml和5.30(0.00~33.70)CFU/ml。对于121份温泉水水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值差异有统计学意义(X^2=187.900,P〈0.01),其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。结论荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测温泉水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。 闫革彬 王焕新 秦天 周海健 李马超 徐颖 赵明强 邵祝军 任红宇关键词:军团菌 温泉 聚合酶链反应 荧光染料 利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用 2013年 目的改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。方法使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。结果去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。结论该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。 关红 秦天 周海建 任红宇 段永翔 许欣 邵祝军关键词:质粒 脉冲场凝胶电泳 军团菌