国家自然科学基金(30772336)
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
- 相关作者：漆洪波刘芳杨霞张翠华罗欣更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆市妇幼保健院更多>>
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- 相关领域：医药卫生电子电信更多>>
- 纤维蛋白支架三维培养人羊膜细胞的生物学特性被引量：1
- 2009年
- 背景:未足月胎膜早破是产科常见的妊娠期并发症,三维培养可使组织缺损恢复解剖学上的完整性,使得细胞培养成为更有实用价值的技术。目的:通过观察人羊膜细胞在纤维蛋白支架上三维培养后的生物学特性变化,探讨细胞/支架复合物模拟体内羊膜组织用于未足月胎膜早破破口修复的可能性,并与普通平面二维培养结果进行比较。设计、时间及地点:细胞-支架学体外观察,于2007-12/2008-11在重庆医科大学基础研究所完成。材料:剖宫产孕妇的羊膜组织,由重庆医科大学附属第一医院妇产科提供。纤维蛋白原为Sigma公司产品。方法:将酶消化法和反复贴壁法相结合,体外分离培养并纯化羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞。纤维蛋白原聚合后,取处于对数生长的上皮细胞,接种于纤维蛋白支架表面,模拟胶上型三维立体培养;在纤维蛋白原聚合前,将处于对数生长的间质细胞和纤维蛋白溶液混合,模拟胶内型三维立体培养。同时将上皮细胞和间质细胞接种于24孔板中,进行普通平面二维培养。主要观察指标:倒置显微镜及电镜下观察细胞的形态学特征,不同培养条件下间质细胞的增殖情况,间质细胞和支架的相互作用。结果:在纤维蛋白支架表面,上皮细胞形态较平面培养圆润,细胞间可见伪足伸出,表面微绒毛丰富;在纤维蛋白胶中,间质细胞呈梭形,沿支架伸展,可见细胞在不同平面形成网络状。三维立体培养下,间质细胞增殖活性平稳,但增长幅度较平面培养缓慢。在胶内型三维立体培养中,随时间的延长纤维蛋白胶发生收缩,凝胶厚度逐渐降低,至第5天纤维蛋白胶厚度占原厚度的40%左右,第15天收缩到原厚度的10%左右。结论:羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞能够在纤维蛋白支架上立体生长,增殖活性平稳;在细胞-纤维蛋白支架复合物中,可观察到纤维蛋白胶随着时间推移而发生收缩
- 杨霞漆洪波
- 关键词：羊膜细胞纤维蛋白支架胎膜早破
- 人羊膜上皮细胞和间质细胞的分离培养被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨人羊膜上皮细胞和羊膜间质细胞的分离、培养及鉴定。方法:取足月妊娠剖宫产术中的羊膜组织剪成碎片,胰蛋白酶消化15min,共四次,取消化液1000rpm离心5min收集细胞。剩余羊膜组织加入1.0g/L的胶原酶和0.1g/L的DNA酶,39℃消化120min,消化液1000rpm离心5min收集细胞。用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养、传代。倒置显微镜下观察其细胞形态及细胞生长情况。通过免疫细胞化学的方法对细胞进行细胞鉴定。结果:通过不同的酶消化分离法可以将羊膜上皮细胞和间质细胞进行细胞分离培养,羊膜细胞体外一段时间内表现出良好的细胞增殖能力和传代能力。胰蛋白酶消化的细胞角蛋白染色呈阳性,波形蛋白染色呈阴性。胶原酶消化的细胞波形蛋白色阳性,角蛋白染色阴性。结论:羊膜上皮细胞和间质细胞能够在体外分离、扩增。这为羊膜细胞进行细胞治疗和组织工程技术奠定了实验基础。
- 刘芳漆洪波
- 关键词：羊膜上皮细胞细胞培养细胞鉴定
- 人羊膜细胞在Ⅰ型胶原基质中的三维培养研究被引量：2
- 2010年
- 将人羊膜间质细胞种入Ⅰ型胶原三维基质中,羊膜上皮细胞接种在基质的表面,构建人羊膜细胞/Ⅰ型胶原基质复合物以模拟人体羊膜组织结构,为其用于修复胎膜破口的研究做准备。采用罗丹明-鬼笔环肽荧光染色剂特异性标记胞浆中的微丝(F-actin)结构,观察细胞在三维基质中的细胞形态;扫描电镜和透射电镜法观察羊膜上皮细胞和间质细胞在三维培养中的超微结构。结果显示人羊膜上皮细胞和间质细胞在Ⅰ型胶原基质的复合培养中生长良好,显示出与体内羊膜细胞的相似性。以上结果提示,Ⅰ型胶原蛋白有望应用在羊膜细胞组织工程,三维细胞基质培养系统有望为胎膜早破提供新的研究方法和治疗手段。
- 刘芳漆洪波
- 关键词：人羊膜细胞
- 人胎膜组织中E26转录因子1的表达及其与胎膜早破的关系被引量：4
- 2010年
- 目的检测人胎膜组织中E26转录因子1（Ets-1）的表达及定位，探讨其与胎膜早破发生的关系。方法选择2007年2—11月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的产妇100例为研究对象，按足月与否、有无胎膜早破、分娩方式将其分为早产临产、未足月胎膜早破（PPROM）、足月临产、足月胎膜早破（TPROM）组，以足月择期剖宫产产妇为对照组，每组各20例，分娩后采集其胎膜组织，用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接（SP）法检测Ets-1蛋白的表达水平及定位，每组选取6例以逆转录（RT）-PCR技术检测Ets-1mRNA的表达水平，并进行半定量分析。结果（1）各组胎膜组织中Ets-1mRNA的表达：早产临产、PPROM、足月临产、TPROM、对照组胎膜组织中Ets-1mRNA表达水平分别为0．342±0．016、0．6034-0．027、0．325±0．013、0．5824-0．075、0．139±0．012．PPROM组和TPROM组均高于对照组，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；早产临产组与足月临产组，PPROM组与TPROM组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）Ets-1蛋白在胎膜组织的定位：Ets-1蛋白集中在羊膜和绒毛膜的间质层、滋养层细胞的胞质和胞核中表达；细胞内可见清晰的棕黄色颗粒。在羊膜上皮细胞中未见Ets-1蛋白表达。（3）各组胎膜组织中Ets-1蛋白的表达：早产临产、PPROM、足月临产、TPROM、对照组胎膜组织中Ets-1蛋白表达水平分别为0．552±0．018、2．853±0．174、0．538±0．042、2．731±0．090、0．214±0．013，PPROM组与TPROM组均高于对照组，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；但早产临产组与足月临产组，PPROM组与TPROM组胎膜组织分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论Ets-1在人类胎膜组织中有表达，且在胎膜早破时表达水平升高。
- 罗欣漆洪波
- 关键词：胎膜早破免疫组织化学
- 纤维蛋白支架上人羊膜细胞的三维培养用于胎膜破口修复的实验研究被引量：1
- 2009年
- 胎膜早破是妊娠期最常见的并发症，临床上尚无针对胎膜早破治疗的理想方法，体外研究发现，纤维蛋白胶能有效地封闭胎膜破口，恢复羊膜腔的完整性。然而，单纯的生物材料修复只能使胎膜达到功能性封闭，而不能恢复解剖性封闭。三维培养技术的出现，已成为组织工程学的重要组成部分，人造皮肤替代物和人造血管均证明三维培养使细胞培养成为更有价值的技术，并应用于组织工程中成为组织替代物。本研究应用纤维蛋白原、凝血酶、氯化钙构建纤维蛋白支架，接种人羊膜间质细胞和上皮细胞，模拟正常羊膜组织结构，从而探讨细胞-细胞外琏质复合物用于胎膜破口修复的可能性。
- 杨霞漆洪波
- 关键词：人羊膜细胞纤维蛋白胶胎膜早破
- 未足月胎膜早破的诊断和治疗策略被引量：17
- 2010年
- 未足月胎膜早破（preterm premature rupture ofmembrane,PPROM）带来的早产、羊膜腔感染、新生儿呼吸窘迫综合征（respiratory distress syndrome ofnewborn,NRDS）、胎儿窘迫、胎盘早剥和羊水过少等,是产科领域关注的热点问题。PPROM的诊治,特别是处理策略,也一直是产科临床面对的棘手问题,加拿大妇产科医师学会（Society of Obstetricians andGynaecologists of Canada,SOGC）（2005年）、
- 漆洪波
- 关键词：未足月胎膜早破新生儿呼吸窘迫综合征妇产科医师RUPTURECANADA羊膜腔感染
- 可用于羊膜腔封闭的医用黏合剂的体外毒性研究被引量：4
- 2012年
- 目的:通过研究3种医用组织黏合剂对胎膜组织块的毒性效应,为未足月胎膜早破(Preterm premature rupture of themembranes,PPROM)行羊膜腔封闭治疗时黏合剂的选择提供安全性依据。方法:氰基丙烯酸酯(Cyanoacrylates,CA)胶组、胶纤维蛋白胶(Fibrin sealant,FS)组、胶原蛋白(Coll组)分别作用于胎膜组织,设立空白对照(Con组)。培养24 h后,胎膜小片固定、包埋、切片,进行HE染色观察组织块结构变化,TUNEL染色技术进行细胞凋亡检测;免疫蛋白印迹(Western blot)技术定量检测调节凋亡的相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果:(1)HE染色显示CA组羊膜上皮层连续性被破坏,其余3组羊膜上皮层完整。(2)TUNEL染色提示CA组(51.0±1.8)%与Con组(12.1±0.8)%、FS组(16.0±0.8)%、Coll组(13.0±1.0)%相比,差异均有统计学意义(P<0.01);FS组与Coll组、Con组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Coll组与Con组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。(3)CA组、FS组、Coll组以及Con组Bax蛋白相对灰度值依次为(1.294±0.029)、(0.421±0.023)、(0.479±0.024)、(0.287±0.017),CA组、FS组、Coll组以及Con组各组之间相比,Bax蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白的相对灰度值依次为(0.350±0.034)、(0.406±0.269)、(0.433±0.020)、(0.493±0.027),CA组与FS组、Coll组以及Con组相比,Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。FS组、Coll组与Con组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。FS组与Coll组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:(1)目前的CA胶尚不适用于羊膜腔封闭治疗。(2)FS和胶原蛋白对胎膜的毒性较小,从安全性方面考虑,是目前用于羊膜腔封闭较为合适的医用组织黏合剂。
- 张翠华漆洪波
- 关键词：未足月胎膜早破组织黏合剂
