国家质检总局科技计划项目(2009IK173)
- 作品数：3 被引量：22H指数：2
- 相关作者：刘志刚王建峰黄素文倪健波杨文潮更多>>
- 相关机构：深圳大学宁波出入境检验检疫局深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蜜蜂主要变应原酸性磷酸酯酶基因的克隆及原核表达载体的构建
- 2010年
- 目的克隆蜜蜂Apis cerana cerana主要变应原酸性磷酸酯酶(Api m3)基因,构建其原核表达载体。方法根据已知序列设计带有酶切位点的特异性引物,以提取的蜜蜂总RNA为模板RT-PCR扩增目的基因,并进行序列分析。将基因片段亚克隆到PET-28a表达载体上。结果获得蜜蜂Api m3基因,构建了其原核表达载体。基因分析显示该基因全长1 167 bp,编码388个氨基酸,推测分子质量单位为45.279 9 ku,等电点为5.53。序列分析显示与Gen-Bank中已知基因的同源性为97%。结论成功克隆蜜蜂Api m3基因并构建原核表达载体,对进一步进行变应原表达和免疫学活性鉴定有积极意义。
- 张强叶卫翔刘志刚陈思罗新萍黄钟
- 关键词：蜜蜂基因克隆原核表达载体
- 淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定被引量：18
- 2011年
- 目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄素文杨文潮朱海王建峰倪健波吕志平冼静雯刘志刚
- 关键词：淡水小龙虾原肌球蛋白免疫活性
- 淡水小龙虾过敏原胶体金快速检测试纸条的研制被引量：4
- 2014年
- 目的研制虾过敏原胶体金快速检测试纸条。方法利用克隆表达的具有变应原活性的重组淡水小龙虾原肌球蛋白制备虾过敏原单抗和多抗,用胶体金偶联虾过敏原单抗;将过敏原多抗和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维膜上,分别作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果使用研制的试纸条检测淡水小龙虾、日本沼虾、虾蛄、河鲫鱼、带鱼、猪肉和牛肉等样品提取液,只有淡水小龙虾出现阳性条带,其余样品均为阴性,无明显交叉反应。此试纸条的检测灵敏度也很高,达到100 ng/ml。结论该试纸条重复性好、操作简单、灵敏度高、特异性强,能快速检测食品中的淡水虾过敏原,具有很重要的应用推广价值。
- 黄素文王建峰朱海倪健波刘志刚杨文潮
- 关键词：淡水小龙虾胶体金试纸条
