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HLA分型与胃癌相关性研究: 目的:研究HLA分型与胃癌之间的相关性,以及胃癌细胞株的HLA分型情况,旨在找出与胃癌相关的HLA位点,以判断不同的个体对胃癌的遗传易感性。了解胃癌的发病机制、分子流行病学及胃癌的治疗方法的选择和预后。方法:收集43例胃...; 俞焙秦陈雪华刘炳亚; 关键词：胃癌 HLA 胃癌细胞株; 文献传递

小鼠I-A^kII类分子限制性MAGE-3T表位筛选被引量：3: 2005年; 为了筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCII类分子限制性多肽表位。用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个候选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性识别及释放细胞因子能力评价多肽的免疫原性及免疫反应性。结果DC负载MAGE-322-36能够强效诱导T淋巴细胞增殖,DC负载MAGE-322-36诱导的T细胞以MHCII类分子限制性方式、特异性识别表达MAGE-3抗原的肿瘤细胞。DC负载MAGE-322-36诱导的T细胞群主要为CD4+Th1细胞,同时天然免疫系统中的NK、NKT、γ/δT细胞也得到活化。从小鼠MAGE-3抗原中筛选出MHCII类分子限制性多肽表位MAGE-322-36。; 李强张轶张奕陈雪华李建芳顾琴龙朱正纲刘炳亚; 关键词：MAGE-3 TH表位

树突状细胞及其负载胃癌细胞总RNA的抗肿瘤作用被引量：3: 2004年; 目的以小鼠胃癌细胞总RNA负载树突状细胞(DC),研究其抗肿瘤免疫作用。方法磁性细胞分选器(MACS)自小鼠脾细胞中分选出CDllc+的DC作短期培养,以小鼠前胃癌细胞株的总RNA脉冲DC,分别以RNA脉冲的DC(RNA/DC)和未脉冲的DC(UDC)皮下注射免疫小鼠2次;免疫后7d,皮下接种小鼠前胃癌细胞MFC 5×105/鼠,以未作免疫注射的小鼠作为对照。接种肿瘤细胞后21d,处死实验动物,测量肿瘤体积,检测自然杀伤细胞(NK)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性和血清IL-12含量。结果 RNA/DC免疫组、UDC免疫组和对照组的皮下肿瘤体积分别为(0.3688±0.6571)、(0.7536±0.3659)、(2.6323±1.1435)cm3。RNA/DC免疫组外周血和脾细胞NK活性均明显升高,较对照组分别高出66.2％和65.4％;其肿瘤特异性CTL也明显升高,较对照组升高49.5％。UDC组NK和CTL活性也明显高于对照组。结论短期培养的DC和以肿瘤细胞总RNA作为抗原脉冲的DC均可诱导较强的抗肿瘤免疫。; 刘炳亚陈雪华李建芳尹浩然朱正纲顾琴龙林言箴; 关键词：树突状细胞胃癌细胞总RNA 抗肿瘤作用免疫治疗

MAGE-3抗原肽脉冲树突状细胞对小鼠胃癌移植瘤的免疫防护作用被引量：8: 2005年; 目的观察MAGE3抗原肽脉冲的树突状细胞(DC/MAGE3)作为肿瘤疫苗抑制小鼠胃癌移植瘤生长的作用。方法检测了MAGE3抗原肽诱导出的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。在免疫保护实验中先用DC/MAGE3(1×106个细胞/只)于小鼠皮下注射免疫两次,然后接种MFC细胞(5×105个细胞/只);在免疫治疗实验中先接种MFC细胞(5×105个细胞/只),然后在皮下注射DC/MAGE3(1×106个细胞/只)两次,并以感冒病毒核蛋白抗原肽脉冲的DC(DC/Nup)及空白DC作为对照,观察小鼠肿瘤的生长情况及其存活期并进行统计学处理。结果(1)MAGE3抗原肽诱导出的CTL细胞对MFC细胞有较高的杀伤活性;(2)在免疫保护实验和免疫治疗实验中DC/MAGE3可以明显地延缓肿瘤的生长,延长小鼠的生存时间(P<0.05)。结论MAGE3抗原肽脉冲的DC可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具有明显的抗肿瘤活性。; 吕斌刘炳亚张轶陈雪华朱正纲尹浩然林言箴; 关键词：树突状细胞小鼠胃癌移植瘤

树突状细胞与胃癌细胞融合的肿瘤疫苗研究被引量：1: 2004年; 目的以肿瘤细胞与树突状细胞(dendriticcells,DCs)相融合使融合细胞能将肿瘤抗原递呈给T细胞,并提供T细胞激活所必需的第二信号,借此激活机体的抗肿瘤免疫。方法通过PEG法将鼠源性胃癌细胞MFC与小鼠DC进行融合(T/DC),融合后经50Gy电子线照射,以1×106肿瘤疫苗于小鼠皮下注射免疫2次,间隔1周后接种,后一次免疫后1周于小鼠皮下接种5×105MFC胃癌细胞。肿瘤细胞接种3周后处死实验动物,测量肿瘤大小、外周血NK活性和脾细胞CTL活性。结果肿瘤接种后一周对照组小鼠皮下均有肿瘤生长,而T/DC免疫组均无皮下可触及的肿瘤(10/10),10天后T/DC免疫组才有4/10只鼠皮下出现可触及的肿瘤,3周后对照组肿瘤体积明显大于T/DC免疫组。经T/DC免疫后小鼠生存期明显较对照组延长,对照组于肿瘤接种后2周开始有小鼠衰竭死亡,至肿瘤接种后3周对照组仅有3只存活,T/DC免疫组有8只鼠存活,并仍有3只无肿瘤生长。经T/DC免疫后,小鼠NK活性和肿瘤特异性CTL活性均明显提高,T/DC免疫组和对照组MFC特异性CTL活性分别为30.09%和7.12%。结论肿瘤细胞鄄DC融合的肿瘤疫苗可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具明显的抗肿瘤活性。; 刘炳亚陈雪华李建芳顾琴龙朱正纲尹浩然林言箴; 关键词：树突状细胞肿瘤疫苗胃癌细胞融合

辅助性T细胞和细胞毒性T淋巴细胞双表位修饰的树突状细胞肿瘤疫苗治疗胃癌的实验研究被引量：5: 2006年; 目的研究辅助性T细胞(Th)表位和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)双表位修饰的树突状细胞(DCs)肿瘤疫苗用于胃癌免疫治疗的效果。方法用CTL表位MAGE-341-49和Th表位MAGE-322-36混合多肽冲击DCs,每周刺激脾脏T细胞1次,4周后收集多肽特异性T细胞。流式仪分析T细胞亚群分布,测定CD4+T细胞识别抗原细胞因子分泌及CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞效能,观察双表位修饰的DCs肿瘤疫苗治疗胃癌的保护性免疫效应。结果双表位致敏的DCs体外可同时活化CD4+和CD8+T细胞,其中CD4+T细胞识别肿瘤细胞小鼠前胃癌细胞株MFC后分泌大量Th1型细胞因子犤干扰素(IFN)-γ,白介素(IL)-2犦,CD8+T细胞强效杀伤MFC。双表位修饰的DCs肿瘤疫苗小鼠体内免疫治疗获得抵抗后继胃癌细胞MFC的免疫保护能力,并显著高于单一表位(CTL或Th)修饰的DCs疫苗。结论Th和CTL双表位修饰的DCs肿瘤疫苗可同时激活CD4+Th1细胞和CD8+CTL抗肿瘤免疫,有效清除胃癌细胞。; 李强张轶陈雪华曹伟新顾琴龙朱正纲刘炳亚; 关键词：肽类树突细胞免疫疗法

MAGE-1、MAGE-3基因在胃癌和胃活检组织中的表达及意义被引量：18: 2004年; 目的 :检测黑色素瘤抗原基因 1、 3(MAGE 1和MAGE 3)在胃癌中的表达 ,探索其在胃癌免疫治疗中的应用价值。方法 :采用RT PCR法 ,对 36例胃癌患者的癌组织和相应的癌旁“正常”黏膜 ,以及 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因的表达进行研究 ,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 :36例胃癌组织中 ,MAGE 1基因的表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36 ) ,MAGE 3基因的表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36 )。MAGE 1、MAGE 3的表达均为阳性者为 5 2 .78% (19/ 36 )。癌旁“正常”黏膜中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36 )和4 4 .4 4 % (16 / 36 ) ;MAGE 1、MAGE 3基因表达双阳性者为 30 .5 5 % (11/ 36 )。在 37例胃慢性炎症患者中 ,MAGE 1、MAGE 3基因的表达阳性率 ,分别为 2 9.73% (11/ 37)和 2 7.0 3% (10 /37) ;MAGE 1、MAGE 3基因的表达双阳性者为 8.1% (3/ 37)。胃癌组织中 ,MAGE 1和MAGE 3基因表达阳性率均高于癌旁和胃慢性炎症患者 ;在肿瘤组织中的表达阳性率与肿瘤浸润的深度和分化程度有关 (P <0 .0 5 ) ;而与临床病理分期及淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论 :基于MAGE 1和MAGE 3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用这两种蛋白作为靶?; 陈雪华刘炳亚张冬青张奕张轶李建芳朱正纲; 关键词：胃癌 MAGE-1 MAGE-3

OPTIMIZATION OF ELECTROPORATION PARAMETERS FOR TRANSFECTION OF PLASMID DNA INTO MURINE BONE MARROW-DERIVED DENDRITIC CELL: 2006年; Objective To explore the optimal electroporation parameters for transfection of plasmid DNA into murine bone marrow-derived dendritic cells. Methods Murine bone marrow-derived dendritic cells （DCs） were electroporated with plasmid DNA in varied conditions, such as electrical voltage, pulse time ,pre-electroporation cell condition and serum concentration in electrical buffer, lnverted fluorescence microscope and flow cytometer were used to determine the transfection efficiency. Some of the DCs genetically modified under different conditions were stained with trypan-blue and its viability was observed microscopically 48h after electroporation. Results Highest transfection efficiency （22.10%） could be reached when electrical voltage was 250V and pulse time was 20ms. Refreshing the culture medium pre-electroporation may help the cells recover more easily from gene transfer. Besides, electrical buffer containing serum may benefit the viability of DC after electroporation and temperature may has little influence on transfection efficiency. Conclusion Our observations demonstrated plasmid DNA could be efficiently transferred into murine bone marrow-derived DCs by electroporation. These data may helpful for cancer research related to murine DC transfection.; 柯山陈雪华黎皓李建芳顾琴龙朱正纲刘炳亚

CD4^+CD25^+T细胞在CD8^+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用被引量：9: 2005年; 实验旨在研究CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中的调节作用。将小鼠脾脏中分离的单个核细胞分为两组,即去除CD4+CD25+T细胞组和未去除CD4+CD25+T细胞组,测定树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽刺激不同T细胞增殖活性、细胞因子IFN-γ分泌,以及多肽特异性CD8+T细胞对同源性胃癌细胞株MFC的杀伤活性。结果显示预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,所诱导的特异性CD8+CTL对肿瘤细胞免疫应答增强,表现为反应性T细胞对树突状细胞提呈的肿瘤抗原多肽增殖反应增强,IFN-γ分泌量提高及CD8+T细胞对MFC杀伤活性增强。这些结果表明,预先去除未致敏T细胞中的CD4+CD25+T细胞,肿瘤抗原多肽修饰的树突状细胞肿瘤疫苗效能可明显增加。CD4+CD25+T细胞在CD8+T细胞抗肿瘤免疫中起下调作用。; 施敏敏刘炳亚李强张轶陈雪华陈皓朱正纲; 关键词：CD4^+CD25^+T细胞树突状细胞肿瘤免疫治疗

小鼠MHCⅠ类分子限制性MAGE-3多肽表位筛选被引量：2: 2005年; 目的筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCⅠ类分子限制性多肽表位。方法用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个侯选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性杀伤活性及释放细胞因子含量,评价多肽的免疫原性及免疫反应性。结果树突状细胞(DC)负载MAGE-341~49能够强效诱导T淋巴细胞增殖,DC负载MAGE-341~49诱导的T细胞以MHCⅠ类分子限制性方式,特异性识别表达MAGE-3抗原的肿瘤细胞。DC负载MAGE-341~49诱导的T细胞群主要为CD8+T细胞,同时天然免疫系统中的NKT、γ/δT也得到活化。结论从小鼠MAGE-3抗原中筛选出CD8+T细胞识别的、MHCⅠ类分子限制性多肽表位MAGE-341~49。; 李强张轶陈雪华顾琴龙朱正纲刘炳亚; 关键词：MAGE-3 抗原表位 T淋巴细胞树突状细胞

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